水貂犬瘟热动物模型的建立

目的建立水貂犬瘟热动物模型,并利用水貂犬瘟热模型评价不同犬瘟热强毒株的毒力,为水貂犬瘟热病毒疫苗的研究奠定基础。方法从猴、藏獒、犬的病料中分离犬瘟热病毒,测定犬瘟热病毒的毒力,并进行传代培养。利用犬的犬瘟热动物模型筛选稳定的犬瘟热强毒株,进行水貂犬瘟热动物模型的建立及其毒力评估。结果筛选出了稳定的犬瘟热强毒株并进行了家犬动物实验,同时表现出了强烈的临床症状,并利用不同的代次毒进行了犬瘟热动物模型的建立。结论成功建立了犬瘟热动物模型并对不同来源的犬瘟热病毒毒力进行了评估。     

犬瘟热病毒小熊猫株反向遗传系统的构建及其鉴定

以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(Canine distemper virus,CDV)为模板,构建犬痘热病毒感染性cDNA克隆.对其全基因组序列测定后,用RT-PCR的方法获得组成全长基因的7个片段,通过酶切、拼接将7段CDVcDNA序列插入到真核表达载体pCI的MCS上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cDNA质粒(pCI-CDV-LP),同时分别克隆CDV小熊猫株N、P、L蛋白ORF构建三个辅助质粒.酶切鉴定和序列测定表明,pCI载体中插入的核酶及CDV cDNA序列正确无误,使用转染试剂Lipofectamine TM 2000将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(BSR),经RT-PCR、间接免疫荧光和病毒感染VERO-SLAM细胞试验鉴定,成功拯救出CDV小熊猫株,显示CDV小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础.     

犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达

核蛋白基因(N)位于犬瘟热病毒基因组的108—1679位置处,是保守性较强的免疫原性蛋白,因此选择N基因作为目的基因,利用酶切、连接等方法构建了含犬瘟热病毒核蛋白基因的穿梭质粒pVAX?E3LPN。以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建了重组质粒pCAV-2-CDVLPN,利用脂质体介导法转染MDCK细胞,转染三次后,细胞出现了典型的腺病毒样病变。电镜负染、切片观察,酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明表达犬瘟热核蛋白基因的重组犬2型腺病毒构建成功,表达的核蛋白分子量为58kDa。     

ICAM-1及其受体在高致病性禽流感病毒性肺炎中的作用研究

本文应用高致病性禽流感病毒性肺炎(Highlypathogenicavianinfluenzaviralpneumonia,HPAIVP)小鼠模型,采用免疫组织化学染色方法,对实验组和对照组小鼠肺组织中ICAM-1及其受体的表达含量进行检测。研究发现:实验组小鼠肺组织中ICAM-1及其受体表达含量在攻毒后1d即开始升高,第4天达高峰。就攻毒剂量来说,以100LD50/50μL攻毒组小鼠肺组织中ICAM-1及其受体阳性表达量升高最明显。并通过ELASA方法进一步证实了这种变化。结果表明:ICAM-1及其受体在HPAIVP中呈现高表达,可能在其发病中发挥了重要作用。     

虎源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠模型的建立

为研究H5N1亚型禽流感病毒的病原特性、致病机理及对其疫苗与救治药物效果评价提供平台,利用本室分离鉴定的虎源A/Tiger/Harbin/01/2002株(简称HAB/01)H5N1亚型禽流感病毒进行连续10倍稀释后,对4～6周龄雄性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定其MLD50,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14d。结果感染小鼠呈现出规律的以肺炎为主的临床症状、病理变化及病死率;测得该病毒对小鼠的MLD50为10-7.1/0.05mL。成功建立了虎源H5N1亚型禽流感病毒感染BALB/c小鼠的实验模型。     

影响多粘类芽胞杆菌发酵液抑菌活性因素的研究

目的以点青霉菌作为指示菌,研究影响植物内生多粘芽胞杆菌发酵液抑菌活性的部分因素,为鉴定发酵液的抑菌物质提供基础研究。方法通过对多粘类芽胞杆菌发酵液进行不同处理（改变pH、加热、乙醇处理和蛋白酶酶解）,采用牛津杯法观察处理后发酵液对点青霉菌抑菌活性的变化。结果多粘类芽胞杆菌发酵液的抑菌效果在酸性条件下稳定,抑菌效果明显;而在中性和碱性范围内不稳定,抑菌效果不明显;多粘类芽胞杆菌发酵液中的有些抑菌物质具备良好的热稳定性;80％乙醇处理的发酵上清液有抑菌作用;经蛋白酶酶解后发酵液的抑菌活性变化不大。结论多粘类芽胞杆菌产生的乙醇沉淀物具有抑菌作用;发酵液中可能含有类细菌素的抑菌物质。     

虎血清犬腺病毒抗体调查

犬腺病毒（Canine adenovirus,CAV）属于腺病毒科哺乳动物腺病毒属成员,分为犬腺病毒Ⅰ型（CAV-1）和犬腺病毒Ⅱ型（CAV-2）,其中CAV-1主要引起狐狸（Vulpes vulpes）脑炎和犬（Canis familiaris）传染性肝炎（殷震和刘景华,1997;胡体拉,1963）。在国内,夏咸柱等（1984）首次分离到CAV-1,随后,多个地区的不同动物中又有相继分离到该病毒的报道（钟志宏等,1990;范泉水和袁国庆,1992;夏咸柱等,1984）。CAV-2主要引起犬的喉气管炎和幼犬咳嗽,在我国的感染也比较普遍（范泉水和夏咸柱,1999）。