三角褐指藻D5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

D5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的D 5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物, 分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段, 序列分析结果显示, 结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子, 这是国内外首次报道。将D5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中, 在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5, 用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中, 在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5。在合适的培养条件下, 添加外源底物双高g-亚麻酸和诱导物半乳糖, 培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析, 表明三角褐指藻D5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达, 将双高g-亚麻酸转化为花生四烯酸, 其底物转化率达到了45.9%。     

脱氢表雄酮对大鼠脂类代谢和抗氧化作用的影响

目的：研究灌胃脱氢表雄酮（DHEA）对大鼠脂类代谢和抗氧化作用的影响。方法：选用健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组（n=10）。对照组灌胃给予灭菌生理盐水,实验组灌胃给予20mg／kg、10mg／kg、5mg／kg体重的DHEA受试溶液,灌胃量均为1．5ml。每天一次,连续35d。实验结束后采血测定血糖（BG）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,血清和肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果：DHEA显著降低大鼠血糖、TG、HDL-c及血清和肝脏MDA含量,显著升高血清LDL-c含量和肝脏SOD活性,而对大鼠体重、血清TC含量和SOD活性没有显著影响。结论：DHEA具有降低大鼠血脂和增强抗氧化能力的作用。     

植物细胞质外体多肽与蛋白研究

细胞质膜以外的质外体是植物细胞的重要组成部分,质外体是植物细胞的重要信号源和细胞器。当植物遭受生物或非生物环境刺激时,可能首先引起质外体信号系统的变化;同时质外体作为植物细胞之间最方便的通道,在细胞间信号传递和信息交流上起重要作用,从而成为协调植物细胞分化、器官形成和整体生长发育的决定性因素之一。本文概括地介绍了我室在此领域的一些研究进展。     

白念珠菌高铁还原酶FRP1基因的功能

白念珠菌((Candida albicans)获得铁的能力影响细胞的生长和毒力,高铁还原酶是白念珠菌高亲和铁吸收系统的重要组成部分.[目的]构建高铁还原酶FRP1(Ferric reductase protein)基因缺失突变株,对FRP1基因功能进行初步研究.[方法]使用Northem杂交的方法分析FRP1基因在缺铁和富铁条件下的表达.利用PCR介导的基因敲除技术构建frp1缺失突变株,并且对野生型和缺失突变株在细胞高铁还原酶活性以及缺铁条件下的生长情况进行比较分析.[结果]缺铁条件可以诱导FRP1基因的表达.frp1缺失突变株不能在铁缺陷的固体培养基上生长.[结论]FRP1蛋白可能是白念珠菌在缺铁条件下起主要作用的高铁还原酶.     

胡芦巴籽中特征性香味成分分析

为建立胡芦巴籽中特征性香味成分胡芦巴内酯含量的分析方法,采用溶剂提取及Oldershow柱浓缩胡芦巴籽中的胡芦巴内酯,气相色谱外标法定量分析胡芦巴内酯的含量,气相色谱-质谱法定性鉴定胡芦巴内酯的结构;并测定了安徽产的胡芦巴籽中的胡芦巴内酯的含量;结果标明采用气相色谱法分析胡芦巴内酯,高效、准确、重现性好、分析时间适中。     

小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

Δ8途径是合成多不饱和脂肪酸的替代途径,Δ8-脂肪酸脱氢酶是该途径的关键酶之一。根据已报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从小眼虫藻基因组DNA和cDNA中扩增得到该基因片段,序列分析表明：结构基因长1 266 bp,编码421个氨基酸;该基因没有内含子,比已经报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因长6 bp,并且N末端序列也有所不同。利用酿酒酵母的载体pYES2.0构建Δ8-脂肪酸脱氢酶表达载体pYEFD,并转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YD8。YD8在合适的培养条件下,添加外源底物二十碳二烯酸和二十碳三烯酸并诱导基因表达。脂肪酸甲酯气相色谱分析表明小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效表达,将二十碳二烯酸和二十碳三烯酸分别转化成二高-γ-亚麻酸和二十碳四烯酸,其底物转化率分别达到了31.2％和46.3％。     

天然抗感染分子-细菌透性增加蛋白

革兰氏阴性菌细胞外壁中的脂多糖结构即内毒素,经常是引发脓毒症、菌血症等系统性炎症反应的"元凶"。近十余年的研究发现,细菌透性增加蛋白（bactericidal/permeability-increasing protein,BPI）具有特有的中和内毒素和拮抗革兰氏阴性菌的能力, 是一种抗感染的天然的分子靶。大量的临床研究结果已经显示其用药的有效性和安全性。近几年来国外生物药业公司正努力将重组人BPI推向市场。     

关于进化真菌学教学内容的讨论

核酸序列的比较研究使进化真菌学的面貌发生了革命性的变化,分子系统发育揭示的关系反映出真菌进化的复杂性和多样性,真菌系统学反映真菌进化关系的自然系统还有很大的距离,有赖于新物种的不断发现和分子系统发育证据的不断丰富。     

水稻类受体激酶OsCR4的抗体制备及特异性检测

运用生物信息学的方法对水稻类受体激酶OsCR4的抗原性进行分析,选取胞外部分片段与GST融合,在细菌大规模诱导该融合蛋白,利用GST sepharose进行亲和层析纯化,所得蛋白使用SDS-PAGE结合KCl/DTT染色切胶的方法得到收集。以此融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,获得了1：512,000效价的多克隆抗体,该抗体可特异识别水稻叶片微粒体组分中的OsCR4蛋白。