自身互补型腺相关病毒载体发展趋势

重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)可以作为基因运载工具将目的基因运送入靶器官并对多种疾病发挥治疗作用。以rAAV为载体进行基因治疗的关键是病毒基因组由单链变为双链,否则不能适时、有效表达目的基因。自身互补型rAAV(scrAAV)载体基因组本身以双链形式存在,与常规的单链rAAV(ssrAAV)载体相比,无论在表达时间还是表达强度上都有十分明显改善,可显著降低在疾病治疗过程中由于载体本身所诱发的免疫反应。目前,scrAAV已经在肝脏疾病、中枢神经系统疾病、眼部疾病、干细胞修饰以及RNA干扰、核酶技术等领域得到应用。以下在介绍scrAAV载体构建、表达、定位的基础上,以血友病B为主要对象,阐述scrAAV的应用潜力及发展趋势。     

一种适合于烟粉虱产卵的新型人工膜系统

介绍一种适合烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)产卵的新型人工膜系统。该系统由一个透明的塑料盒,底直径30mm,顶口直径40mm,深35mm,其上覆盖1层或2层Parafilm M膜,与产卵的成虫相接触的1层厚度为5~8μm,2层膜中间或单层膜上加试验所需的试剂。将膜装置放于不透光的容器上,其上覆盖黄色玻璃纸,以吸引烟粉虱产卵。该装置可用于烟粉虱的人工产卵,观察卵的发育及研究相关的生理机制。     

分枝杆菌Ag85A DNA疫苗对膀胱癌小鼠细胞免疫功能的影响

为探讨分枝杆菌Ag85A DNA疫苗能否提高荷膀胱癌小鼠保护性免疫应答水平,将1×10^6个MBT-2细胞注射于C3H/HeN小鼠的右侧背部皮内,待肿瘤长至直径约5～8 mm时,将动物随机分成实验组、空质粒组和空白对照组3组,分别于小鼠双侧股四头肌内注射Ag85A-V1 Jns.tPA质粒,V1 Jns.tPA质粒总量0.1 mL（100μg）,或生理盐水0.1 mL,每14 d 1次,共3次,末次免疫后第14天分别检测T细胞亚群数量、NK细胞活性、FasL mRNA表达情况、淋巴细胞增殖水平及肿瘤重量。结果显示,实验组较空白质粒组和空白对照组免疫指标均无明显增高（P〉0.05）,提示肌肉注射Ag85A DNA疫苗不能明显提高荷瘤小鼠免疫功能。     

人类人工染色体作为转基因载体的应用前景

自1997年首次成功构建人类人工染色体(human artificial chromosome,HAC)以来,对其理论、方法学问题的研究一直就是人们关注的焦点,并引起了科学家们的极大兴趣,目前已能采用不同的方法获得多种类型的HAC。与酵母人工染色体（YAC）、细菌人工染色体（BAC）等相比,HAC不整合到细胞的基因组中,以一个独立的功能性染色体单位而存在,并在细胞中进行正常的有丝分裂和减数分裂。迄今的研究表明：HAC可以携带大片段基因组DNA,是研究人类基因表达和调控、染色体功能基本单元的重要工具,也是建立HAC动物模型的重要手段。在未来的基因治疗方面有着广阔的应用前景。     

西格列汀对2 型糖尿病患者微量白蛋白尿影响的研究

目的:研究西格列汀对2型糖尿病患者微量白蛋白尿的影响,分析其可能机制和临床应用价值。方法:选取160例伴微量白蛋白尿的2型糖尿病患者,随机分为西格列汀组和其他药物组,各80例。比较两组患者治疗前和治疗3个月后血糖水平、尿微量白蛋白、超敏C反应蛋白及血浆还原型谷胱甘肽水平。结果:经3个月治疗,两组患者空腹血糖、餐后2 h血糖、Hb A1c均较治疗前下降,但差异无明显统计学意义(P0.05);西格列汀治疗组患者尿微量白蛋白和血浆Hs-CRP水平明显下降,血浆还原型谷胱甘肽水平明显升高,与其他口服药物治疗组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:西格列汀可能通过改善机体炎症状态,降低氧化和应激水平等机制降低2型糖尿病患者的尿微量白蛋白水平。     

UVA照射通过诱导HO-1的表达对细胞产生保护作用

长波紫外线A(UVA,320～400nm)照射皮肤后可产生活性氧族(reactive oxygen species,ROS),导致细胞损伤或免疫抑制,还能增强UVB的损伤作用。但也有研究表明,UVA照射不会产生免疫抑制,它可通过诱导血红素氧合酶1(HO-1)的表达减轻UVB照射引起的免疫抑制效应,从而对细胞产生保护作用。由于UVA照射引起的损伤或保护作用尚存在很大争议,本文主要结合近年来的相关研究,概括了适量UVA照射引起的免疫改变以及相关研究,总结了UVA照射诱导HO-1表达所发挥的细胞保护作用,尤其是HO-1的抗氧化和免疫保护作用,这将为深入了解UVA照射的反应机制和新型防晒剂的应用提供一定的指导意义。     

应用条件价值评估法对无锡市五里湖综合治理的评价

在政府环境审计项目中,政府审计机关面临着对环境改善效益进行评估的需要。由于环境资源不具有市场价值,目前条件价值评估方法是唯一能对环境物品进行评估的技术方法。首先对条件价值评估方法及其步骤进行了分析,然后将其应用于实际的审计案例,验证其可行性和有效性。案例研究把江苏省无锡市五里湖作为假想市场,以元锡市当地居民和来此旅游的游客为调查对象,利用问卷调查方式针对五里湖环境改善前后公众的满意度、受访者的旅游支付意愿以及对综合整治工程的资助意愿进行调查分析。对452位受访者调查结果显示,受访者对于五里湖环境改善后的满意度确有显著提高;在环境改善后受访者的旅游支付意愿为89．1元（总支付金额22275万元）,与改善前的支付意愿22．6元（总支付金额5650万元）相比有较大提高;对综合整治工程的资助意愿为平均每人140．2元（总支付金额62063万元）;然后从受访者不同的社会经济属性及对自然生态的认识与态度等各种因素,对受访者的支付意愿进行分析显示,对公众满意度影响最显著的因素是家庭年收入和职业,对五里湖综合整治工程的资助意愿影响最显著的因素是家庭年收入和教育程度,而所在地域、性别、年龄及是否参加环保社团对支付意愿无显著性影响。     

夜香树均一化全长cDNA文库的构建及EST分析

为构建高质量的夜香树(Cestrum nocturnum)均一化全长c DNA文库,以其花朵为材料,采用DSN均一化技术与改进的SMART技术相结合,将连接产物进行脱盐浓缩后电转化进行构建。结果表明,未脱盐连接产物的转化效率为1μL连接产物有7000个菌落,理论重组率为96%;脱盐后,提升为4.1×106个菌落,理论重组率为98%;蓝斑也有插入片段,实际重组率应为100%;插入片段大小平均为1.6 kb。随机挑取500个单克隆(含50个蓝斑)测序,共获得464条EST,单一序列(unigene)为426条,占91.8%,其中片段重叠群26个,单基因400个,冗余率仅为8.1%,表明构建文库的均一化效果较好,可满足后续功能基因的筛选和基因信息的研究。     

基于整合网络和联合策略预测心肌梗死的新致病基因

目的:基于整合网络和联合策略预测心肌梗死的新致病基因.方法:从系统生物学的角度,提出基于蛋白质亚细胞定位信息,构建区域化的蛋白质互作的整合网络;通过疾病风险基因与已知致病基因的功能一致性程度和互作相关性的强度联合筛选的新策略,预测心肌梗死的新致病基因.结果:预测出10个心肌梗死的新致病基因(CCL19、CCL25、COMP、CCL11、CCL7、F2、KLKB1、HTR6、ADRB1、BDKRB2),其中8个基因(CCL 19、CCL25、CCL11、CCL7、F2、KLKB1、ADRB1、BDKRB2)经文献证实与心肌梗死的发生发展有着密切的联系;另外2个基因(COMP、HTR6)尚需实验验证.结论:基于整合网络和联合策略预测出10个心肌梗死的新致病基因,此方法为探索复疾病的致病基因提供了新的思路,有助于阐明复杂疾病的致病机理.     

薰衣草高质量DNA提取及ISSR-PCR多重化体系的建立

以伊犁薰衣草‘701’新鲜叶片为材料,对4种基因组DNA提取方法进行比较,并通过单因子梯度比较试验结合L9(34)正交优化设计,对ISSR-PCR扩增体系中退火温度、DNA、Mg2+、dNTP和引物浓度进行最佳条件及配比筛选。结果表明,改良3×CTAB法是薰衣草高质量DNA少量提取的最佳方法 ;建立薰衣草ISSR-PCR扩增优化体系为,20μL反应体系中包括模板DNA 50 ng,Mg2+3 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,引物0.3 mmol/L,Taq酶1 U;扩增程序退火温度为56℃。运用本试验建立的ISSR-PCR优化体系,对5份薰衣草种质进行了初步验证,获得了良好的多样性扩增条带。