豌豆根瘤菌与新疆中华根瘤菌原生质体的属间融合研究

以青霉素和氯霉素分别作为RhizobiumleguminosorumUSDA2 370和SinorhizobiumxinjiangnesisCCBAU110的抗药性标记。利用原生质体融合技术 ,成功地获得了USDA2-370和CCBAU110的属间融合菌株。该融合菌株可分别在双亲寄主植物上结瘤。融合菌株在细胞形态、大小、菌落特征及蛋白质电泳图谱上与亲本菌株均有所不同。融合菌株与USDA2-370的DNA同源性为 5.66 % ,而与CCBAU110的DNA同源性为10.2 %。     

我国豆科植物根瘤菌资源多样性及应用基础研究

北京农业大学菌种保藏中心(CCBAU)现已保藏根瘤菌5000余株,是全世界最大的根瘤菌资源数据库。通过对其中的2000余株根瘤菌作多相分类研究,确定根瘤菌新属2个、新种11个。结合根瘤菌宿主及其生态环境的关系,提出根瘤菌与豆科植物共生关系的新认识;并得出豆科植物接种根瘤菌的新见解,这对于西部大开发中新区种植豆科植物接种适宜的根瘤菌具有重要指导意义。     

西部某些根瘤菌的数值分类和16SrDNA PCR-RFLP分析

选用 61株分离自我国西北地区的野豌豆、棘豆、苜蓿和草木樨根瘤菌和 4株已知参比菌株 ,进行了营养利用、抗生素抗性和耐逆性等 1 3 2个表型性状研究 ,通过MINTS软件分析 ,得到了数值分类树状图 ,发现全部供试菌株在 79%的相似性水平上 ,分为 5个群。对 5 7株未知菌株和 1 0株参比菌株进行了 1 6SrDNAPCR RFLP分析 ,发现共具有 2 0个遗传图谱类型 ,聚类分析树状图表明所有菌株共分为 5个系统发育分支 ,与数值分类结果有较好的一致性。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳用于根瘤菌鉴定的研究

运用凝胶电泳技宋分析了40余个根瘤菌菌株的可溶性蛋白。对蛋白质电泳图谱做了紫外扫描。结果发现,供试的慢生根瘤菌与快生根瘤菌各个种有明显区别,快生根瘤菌种间也有明显差别。蛋白质电泳图谱可用于种群鉴定,用于区分各种群的主要区域在相对迁移率为0.42至1.0之间。该方法比裂解气相色谱法费时多些,但比生理生化鉴定快,且重复性好,方法简便。     

细菌分类——Ⅴ.血清学和化学分类

血清学和化学分类是研究细菌细胞分子结构的两种方法,尽管用于这两种技术的方法学是很不相同的。血清学血清学技术是依靠细菌细胞的化学结构作为抗原的行为的能力,即在脊椎动物中诱导产生抗体的能力。用于血清学研究的抗体是发现在血清中的体液抗体,因而称之抗血清。使用的血清学技术包括凝聚、沉淀(包括很多精细的改进,如使用凝胶和电泳技术),补体固定和免疫荧光。技术细节可以在很多免疫学或微生物学教科书中找到。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳用于根瘤菌鉴定的研究

运用凝胶电泳技宋分析了40余个根瘤菌菌株的可溶性蛋白。对蛋白质电泳图谱做了紫外扫描。结果发现,供试的慢生根瘤菌与快生根瘤菌各个种有明显区别,快生根瘤菌种间也有明显差别。蛋白质电泳图谱可用于种群鉴定,用于区分各种群的主要区域在相对迁移率为0.42至1.0之间。该方法比裂解气相色谱法费时多些,但比生理生化鉴定快,且重复性好,方法简便。     

海南省根瘤菌资源考察及分类

对海南省各地区的豆科植物进行了根瘤菌共生情况调查和根瘤样品采集。经分离、纯化和回接试验后,选取了其中38株菌与Rhizobium、Bradyrhizobium、Sinoorhizobium和Agra-btcterium四属的18株参比菌进行了193个生理生化性状分析,使用简单匹配系数(ssm)和平均连锁法(UPGMA)进行了聚类分析,同时对部分菌株做了DNA—DNA杂交分析及交叉结瘤试验。结果表明,海南省根瘤菌被分为快慢两群,自同一寄主植物属既分离出快生根瘤菌又分离出慢生根瘤菌。海南省慢生根瘤菌全属于Bradyrhizobium群,该群在88％相似性水平分为三个亚群,相当于亚种水平。慢生菌在亚群中的分布与原寄主无相关性,即同一寄主的菌分布在不同亚群中。海南快生菌却独立成群,在碳氮源利用、抗生素抗性及其它生理生化特性上与海南慢生菌群和快生参比菌群均显著不同,值得进一步研究,以确定其分类地位。     

海南快生根瘤菌I66的部分16S rRNA序列测定

与豆科植物共生固氮的根瘤菌目前有4个属、10个种.包括Rhizobium(6个种),Sinorhizobium(2个种),Azorhizobium(1个种)和Bradyrhizobium(1个种).其中多数是近年来采用现代分类技术分析后建立的,而且新的类群还在不断被发现.在以前的根瘤菌数值分类及DNA-DNA杂交研究中,我们确定了海南慢生型根瘤菌属于大豆慢生根瘤菌种(B.japonicum).而海南快生型根瘤菌的分类地位则较为分散.其中一些菌株属于已知各根瘤菌种,另有4株银合欢根瘤菌和13株来自不同寄主的菌株分别构成具有独立的分类地位的两个菌群(第2群和第4群)(待发表).为了进一步明确它们的分类地位,我们依据国际系统细菌学委员会根瘤菌分委员会的建议,利用Young等建立的聚合酶链反应(PCR)及测序技术,对第4群的代表菌株166的部分16SrRNA基因片段进行了扩增和测序.     

海南快生根瘤菌蛋白、多位点酶及质粒电泳

在本室以前的研究中,海南快生根瘤菌具有分类上的多型性。其一部分归于已知各根瘤菌种,另有一部分菌株构成独立的表观群及相应的ＤＮＡ同源群（亚群Ⅱ和Ⅳ）。本文采用不同的电泳方法,分析了海南快生根瘤菌和已知根瘤菌种的代表共５５个菌株的全细胞蛋白、酯酶、过氧化物酶及质粒组成。结果表明：同一亚群的菌株间有相似的蛋白图谱,种群之间有较明显的差异,根瘤菌中普遍存在酯酶,酶带的数量和迁移率具有菌株专一性,更适合于苗株的鉴别。过氧化物酶只在部分菌株中观察到,亚群Ⅱ与亚群Ⅳ的菌株均显示一条酶带,但二者之间的相对迁移率有明显差别     

微生物基因组研究及其对生命科学的影响

微生物基因组研究是人类基因组计划 (ＨＧＰ)的一部分 ,主要含有以下三类[1 ] :人类基因组计划中的“模式生物”(ｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍ) ,即重要病原微生物和对阐明生物学基本问题有价值的微生物。自 1 995年流感嗜血杆菌 (Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)的全基因组序列完成以来 ,微生物基因组研究范围不断扩大 ,目前已达 1 0 0多项 (ｈｔｔｐ ://ｗｗｗ .ｔｉｇｒ.ｏｒｇ,1 999/5/1 9) ,已完成测序的微生物 2 5个 ,其中 1 9个已发表。微生物基因组研究对人基因组计划及微生物学 ,甚至整个生命科学都产生了巨大影响。1…