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61.
本研究以兔为实验材料,对细胞核移植过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行PMSGhCG超数排卵,收集成熟卵母细胞和16细胞胚;后者经胰蛋白酶消化,去除胶膜和透明带,在不含Ca2+、Mg2+的分离液中分成单个卵裂球;然后,分别对两者做CB预处理;首次尝试采用Wiladsen法,去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带,同时、与McGrathSolter法进行比较;通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内;将所得移核胚在体外或在中间受体内培养并观察。结果表明:一、Wiladsen法与McGrathSolter法比较,核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异(Tab.1)。相对于后者,Wiladsen法更简便、易于掌握并提高去核率。二、hCG超排注射后13~15h,观察卵母细胞发现:其中,678%保留有第一极体。此时的卵子若去除1/3胞质量,去核率可以达到583%。若推迟去核时间,笫一极体退化,失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件,发现强度为063kv/cm,持续160μs的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率(70.8%)(Tab.2);并可使611%的成熟 相似文献
62.
节丛孢属rDNA ITS区RFLPs分析 总被引:2,自引:0,他引:2
利用PCR朢FLP方法对捕食线虫真菌节丛孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4为引物对该属10种12个菌株的核糖体DNA转录间区(ITS)进行了PCR扩增,4种内切酶(AluI、HaeIII、HpaII、TaqI)酶切。结果表明该属的ITS区长度没有明显差异,其长度范围在658~705之间,酶切图谱能体现不同种间的多态性,根据4种内切酶酶切结果,利用UPGMA法构建的节丛孢属分子系统树,基本体现了属内不同种间的亲缘关系,从分子水平证明了节丛孢属形态分类上的合理性,同时对该属属征的扩大提出疑议。 相似文献
63.
哺乳动物克隆及其应用前景 总被引:1,自引:0,他引:1
细胞核移植一词最早出现于Spemann(1938)所著《胚胎发育与诱导》一书中,他建议把发育后期的细胞核移植到去核的卵中,以研究细胞核的发育能力,但由于当时实验条件的限制而未能够实施。直到1952年,Briggs和King才第一次报道了蛙的胚胎细胞核移植成功。Gurdon(1962)将爪蟾蝌蚪期肠上皮细胞核移植到去核的卵母细胞中,重构胚胎发育成正常的个体;而将成体爪蟾的肠上皮细胞核移入去核卵母细胞中时.... 相似文献
64.
65.
66.
利用DNA重组技术,将转录因子NF-κBp50基因片段插入pGEX-2T质粒载体,经DNA序列分析证明克隆的正确性.将重组的pGEX-2T/p50转化入大肠杆菌JM109,表达出pGEX-2T/p50融合蛋白.经WesternBlot检测证实表达产物对抗p50c的抗体呈特异性反应,表明克隆的正确性,并成功地应用纯化的p50蛋白制备了免疫血清.为进一步对NF-κB的功能进行研究打下了良好的基础 相似文献
67.
68.
小鼠不同卵龄卵母细胞电刺激后第二极体形成和原核发育的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
实验以强度为0.45KVcm,持续不同时间(80、160、320、640μs)的电脉冲刺激不同卵龄(注hCG后13、15、17、19小时)小鼠卵母细胞,观察电刺激后第二极体形成和原核发育情况。实验结果说明:(1)卵母细胞守全活化(形成原核)率随卵母细胞也出现MⅢ现象,未活化卵母细胞形成第二极体(MⅢ)者随卵龄增加而明显增多;(3)电刺激活化小鼠卵母细胞在培养6-9小时之间仍有6.7%形成原核。 相似文献
69.
2012年6月,对湖南省石门县壶瓶山国家级自然保护区神景洞短嘴金丝燕的回声定位叫声进行研究,在黑暗山洞内使用录音仪器录制其自由飞行状态的声音后使用声音软件进行分析.短嘴金丝燕捕食归巢时,快速飞入洞口,在洞内有光区域不发声,到达洞内黑暗区域后开始发出回声定位叫声,且飞行速度减慢.声音分析结果表明其回声定位叫声为双脉冲组的噪声脉冲串型(noise burst),组内脉冲间隔很短[(6.6±0.42)ms],组间脉冲间隔较长[(99.3±3.86) ms],两者差异显著(P<0.01).对比第一、第二脉冲声音参数发现,主频和脉冲时程差异不显著,第一、第二脉冲主频分别为(6.2±0.08) kHz和(6.2±0.10) kHz (P>0.05);脉冲时程分别为(2.9±0.12) ms和(3.2±0.17) ms (P>0.05);最高和最低频率差异显著,第一、第二脉冲最高频率分别为(20.1±1.10) kHz和(15.4±0.98) kHz (P<0.01),最低频率分别为(3.7±0.12) kHz和(4.0±0.09)kHz (P<0.05);第一脉冲频宽((16.5±1.17) kHz)宽于第二脉冲((11.4±1.01) kHz) (P<0.01);且第一脉冲能量[(-32.5±0.60) dB]高于第二脉冲[(-35.2±0.94) dB] (P<0.05).另外,短嘴金丝燕在黑暗山洞内的回声定位叫声还包含了部分超声波,最高频率可达33.2 kHz. 相似文献
70.
目的:了解新疆独山子地区肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率、作为指示剂的五种抗生素的检出情况及ESBLs主要基因型。方法:收集临床分离的148株肺炎克雷伯菌,采用双纸片协同筛选法、NCCLS推荐的表型筛选和确证试验对细菌进行ESBLs产酶株的识别;耐药基因的质粒重组、转化,聚合酶链反应(PCR)扩增阳性产物测序,通过GenBank对序确定基因型。结果:本地区肺炎克雷伯菌ESBLs的分离率达31.1%,头孢曲松(CRO)安曲南(ATM)和头孢噻肟(CTX)头孢泊肟(CPD)、头孢他定(CAZ)作为指示剂检出率分别为97.8%、95.6%、93.4%、76.0%、65.2%;本地区产ESBLs菌株耐药基因型CTX-M-22占54.3%,CTX-M-18占41.3%,TEM61.8%,52.1%的产ESBLs肺炎克雷伯菌SHV耐药基因阳性。结论:CRO、ATM和CTX对检测ESBLs阳性率较高;CTX-M-22、CTX-M-18是本地区产ESBLs菌株的主要基因型。 相似文献