坛紫菜（Porphyra Haitanensis）中抑菌活性肽的制备与初步纯化

目的：提取坛紫菜中水溶性蛋白,并对其进行初步纯化和抑菌活性影响因素研究。方法：坛紫菜水溶性蛋白胃蛋白酶在37℃、pH1.8条件下酶解3h,再经超滤、Bio-Gel P-10和DEAE Sephadex A-50层析纯化步骤得到一定分子量范围的多肽混合物。采用平板打孔法和对金黄色葡萄球菌的抑制作用,跟踪测定活性多肽纯化过程及其活性影响因素。结果：SDS-PAGE测定结果表明该抗菌多肽分子量介于43.0KD~66.2KD之间。它对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用随着温度的升高逐渐减弱,5%EDTA、5%柠檬酸、5%维生素C及25%二甲基亚砜对它的抑菌活性有协同作用,而5%维生素E则对它的抑菌活性有拮抗作用。结论：从坛子菜水溶性蛋白中初步纯化得到的分子量介于43.0KD~66.2KD的多肽,对金黄色葡萄球菌的生长有明显地抑制作用,并且它的抑菌活性受到温度,部分有机酸和维生素的影响。     

条斑紫菜中R－藻红蛋白的生化特性

条斑紫菜的Ｒ－藻红蛋白（Ｒ－ＰＥ）,在ＣＭ－５２柱上用含８ｍｏｌ／Ｌ脲的０．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵缓冲液（ｐＨ＝５．０５）洗脱,观察到３条色带,经吸收光谱测定表明,它们分别是α、β、γ亚基。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定的α、β和γ亚基分子量分别是１７．０ｋｄ,１８．０ｋｄ和３１．７ｋｄ。Ｒ－ＰＥ中亚基的摩尔比是６α：６β：１γ。条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ最稳定的聚集态分子量是２２９ｋｄ。各亚基的发色团含量：α亚基含２个藻红胆素（ＰＥＢ）,β亚基含１个ＰＥＢ和０．５个藻尿胆素（ＰＵＢ）,γ亚基含２个ＰＥＢ和３个ＰＵＢ。结合Ｒ－ＰＥ和各亚基的氨基酸组成分析,条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ亚基组成是（αβ）６γ。     

条斑紫菜多糖抗疲劳生物活性研究

主要应用活体动物实验技术,研究了纯化产物紫菜多糖的抗疲劳作用及量效关系。通过紫菜多糖PY-G1不同剂量对小鼠游泳时间、乳酸脱氢酶活性、肌糖原和肝糖原含量等指标的检测,分析了紫菜多糖提高小鼠抗疲劳生物活性功能及其量效关系。实验结果表明,紫菜多糖可显著延长小鼠游泳时间,最高可以提高37%;并且可以使小鼠在游泳前后乳酸脱氢酶含量分别增加35%和37.5%(P<0.05);增加小鼠肌糖原储备量和肝糖原储备量,其肌糖原储备量和肝糖原储备量最高可以分别增加85.6%和86%。实验结果表明,条斑紫菜多糖具有明显提高小鼠抗疲劳生物学活性。     

紫菜多糖对小鼠TNF-α、NO的诱生作用

探讨紫菜多糖对小鼠免疫功能的刺激作用。以不同浓度的紫菜多糖及生理盐水(NS)经BALB/C小鼠腹腔连续注射7 d(1次/d)后,通过结晶紫染色法及Griess法分别测定小鼠的脾细胞分泌TNF-α、NO水平。0.15 g/kg紫菜多糖注射组小鼠脾细胞分泌TNF-α、NO的水平高于NS对照组(P<0.05)。结果可见,适宜浓度的紫菜多糖具有增强小鼠免疫功能的效应。     

海带,裙带菜和紫菜蛋白酶谱的研究

采用复性电泳方法对海带（ＬａｍｉｎａｒｉａＬａｍｘ．）、裙带菜（ＵｎｄａｒｉａＳｕｒｉｎｇａｒ）和紫菜（ＰｏｒｐｈｙｒａＣ．Ａｇ．）３个属１１种海藻的蛋白酶进行了研究,分析了海带、裙带菜和紫菜在不同ｐＨ条件下,蛋白酶种类的分布情况和活性差异。结果表明：（１）蛋白酶种类和活性受ｐＨ的影响和制约,其最适ｐＨ为８．０,此条件下蛋白酶的种类最多,活性最强;（２）亲缘关系越近,蛋白酶种类和活性越相似,海带同属不同种之间存在相同的蛋白酶,而不同属的海藻中很难找到相同的蛋白酶带;（３）海带属不同种所共有的两种蛋白酶（分子量１９ｋＤ和１８ｋＤ）是其特征性酶带;（４）蛋白酶谱可作为海藻分类依据之一。     

坛紫菜凝集素的糖结合专一性和细胞凝集作用

坛紫菜的磷酸盐缓冲液浸取液,经硫酸铵沉淀和DEAE－Sepharose,SephadexG-100二步层析纯化,获得纯化的坛紫菜凝集素（PHL）。该凝集素能与3种单糖（阿拉伯糖,半乳糖,木糖）及麦芽糖专一性结合,其中与麦芽糖结合最强。细胞凝集实验结果显示,PHL能凝集兔,绵羊及鸡红细胞而不能凝集鸭,鸽子及人血红细胞,PHL还能凝集海洋微藻－绿色巴夫藻和淡水微藻－蛋白核小球藻,它们的凝集活性与藻细胞密度有关。不同状态的细菌和酵母细胞对PHL反应不同,表明随着细胞状态的改变,细胞表面的凝集素受体也随之发生变化。     

坛紫菜叶状体的无菌化培养及其应用

对坛紫菜叶状体的无菌处理方法进行了优化,并利用紫菜外生菌对无菌处理后的紫菜叶片进行了人工感染。经0.7%KI和0.1%(w/v)氨苄青霉素对紫菜叶片进行预处理后,利用氨苄青霉素、硫酸链霉素、新霉素、庆大霉素及卡那霉素等5种抗生素及其不同组合对紫菜叶片进行处理,筛选出最佳抗生素组合、浓度和培养条件。结果表明:氨苄青霉素(终浓度300μg/mL)、卡那霉素(终浓度100μg/mL)与庆大霉素(终浓度100μg/mL)3种抗生素组合对坛紫菜叶状体进行无菌处理18 h,对紫菜细胞的毒害较小,并且3种抗生素合用对89.5%紫菜外生细菌的抑菌率达80%以上;外生菌感染结果研究表明:用105/mL真菌孢子液和细菌菌液回染紫菜,培养22 d后,实验组紫菜生长状况较对照组好,对照组紫菜出现褪色。用108/mL真菌孢子液分别回染健康紫菜、穿刺紫菜(用灭菌刀片在紫菜表面划1～2 mm的伤口),分别在18℃、28℃和35℃条件下培养。实验结果表明28℃和35℃高温和穿刺均会影响无菌紫菜健康生长,且加菌紫菜在高温和穿刺条件下,则会出现明显病斑,而18℃培养的加菌紫菜则生长良好。     

条斑紫菜蛋白酶解产物中抗菌肽的纯化及特征

以酶解产物对金黄色葡萄球菌的抑菌能力为指标,筛选出木瓜蛋白酶并优化确定酶解条件,酶解液中分子量在1000 Da以下的小分子肽类占96.68%;采用DEAE-52纤维素阴离子交换层析、Sephadex G-25凝胶层析得到纯化的紫菜蛋白抗菌肽(LPAP);液质联用分析该纯化抗菌肽中主要的多肽序列为FFDD(Phe-Phe-AspAsp);该LPAP对G+菌和G-菌都有抑制作用,具有相对广谱性,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)为0.25 mg/m L,抗菌肽作用金黄色葡萄球菌的电镜照片表明其抑菌机制可能是对细胞膜的破坏作用。     

紫菜外生细菌抑菌活性及其多聚酮合酶（PKS I） 基因筛选

摘要：【目的】：基于紫菜外生细菌抑菌活性的研究,本文对具有广谱抑菌活性的菌株进行了多聚酮合酶(Polyketide synthase I, PKS I)基因的筛选,以期获得PKS I 阳性菌株及探讨紫菜藻际微生物区系细菌的拮抗机制与PKS I 途径的关系。【方法】：利用琼脂柱法筛选出具广谱抑菌活性的菌株31株,以其基因组DNA 为模板,设计引物扩增酮基合成酶(Ketosynthase, KS) 片段基因并将其克隆到 pMD19-T Vector,筛选出PKS I 阳性菌,进行16S rDNA 测序分析。【结果】：紫菜外生细菌表现出广谱抑菌性。从温州病烂紫菜外生菌中筛选出3株具强抑菌活性的PKS I 阳性菌,BLAST 比对结果显示：菌株WPhG3、WPySw1和WPySw2 扩增得到PKS I 的KS 结构域核苷酸序列所对应的氨基酸序列与Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168（NP_389602）、Bacillus subtilis (ABR19776)和Aspergillus carbonarius (AAZ99721) 的PKS I 的KS 结构域的同源性分别达到98%、99%和98%;16S rDNA 系统发生学分析显示它们均与Bacillus 的同源性最高。【结论】：紫菜藻际微生物群落组成复杂,通过多条途径调节藻际微生物区系的平衡。PKS I 途径可能是温州病烂紫菜外生菌Bacillus 表现抑菌活性的一种方式。     

紫菜腐霉激发子基因家族特征及其在感染过程中的作用

[背景]激发子(elicitin)是卵菌(Oomycetes)疫霉和腐霉分泌的可诱发宿主产生免疫反应的小分子化合物.[目的]鉴定紫菜腐霉激发子基因家族,分析其结构特征和在感染宿主过程中可能的作用机制.[方法]运用同源比对法筛查紫菜腐霉NBRC33253基因组中激发子基因家族成员,利用生物信息学工具分析激发子家族的理化性...