酿酒酵母中双链RNA介导基因沉默技术研究GRE3基因表达抑制

RNA沉默技术作为探索基因功能的实验手段应用于多种生物.以编码酿酒酵母NADPH依赖型醛糖还原酶的GRE3基因为对象,检测酿酒酵母双链RNA介导的基因沉默效应.以pESC-LEU为骨架,构建重组质粒psiLENT-GRE3并用于转化酿酒酵母YPH499.用RT-PCR检测到诱导1 kb RNA双螺旋和136 bp loop结构引起的GRE3基因表达下调.结果表明,双链RNA介导的基因沉默技术,能够用作降低酿酒酵母某一特定基因表达水平的工具.并有助于理解芽殖酵母的RNA干扰现象.     

极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37℃下在pH8～10的缓冲液中保温1h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75℃,酶活稳定的温度范围为25～55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0·024mmol/(L·min)。Ca2 、Fe3 、Mn2 等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。     

酿酒酵母中双链RNA介导基因沉默技术研究GRE3基因表达抑制

RNA沉默技术作为探索基因功能的实验手段应用于多种生物. 以编码酿酒酵母NADPH依赖型醛糖还原酶的GRE3基因为对象，检测酿酒酵母双链RNA介导的基因沉默效应. 以pESC-LEU为骨架，构建重组质粒psiLENT-GRE3并用于转化酿酒酵母YPH499. 用RT-PCR检测到诱导1 kb RNA双螺旋和136 bp loop结构引起的GRE3基因表达下调. 结果表明，双链RNA介导的基因沉默技术，能够用作降低酿酒酵母某一特定基因表达水平的工具. 并有助于理解芽殖酵母的RNA干扰现象.     

糖尿病的形成机理(病因)及其临床诊断标准

本文系统地分析了糖尿病与胰岛素的关系以及胰岛素与血糖的关系,阐明了糖尿病的形成机理,介绍了美国、中国以及WHO的糖尿病临床诊断标准,以期提高和加深公众对糖尿病的认识和了解,有助于全球社会有效地控制和预防糖尿病.     

胰腺癌中小肠细菌过度生长及炎症介质异常表达分析

目的本研究通过检测胰腺癌患者小肠细菌过度生长(SIBO)、癌组织中IL 1β、IL 6和TNF α的表达水平,探讨胰腺癌患者是否更易发生SIBO及SIBO伴随的炎症介质水平变化。方法采用葡萄糖氢呼气试验(HBT)检测40例胰腺癌患者和40例健康查体人群的SIBO的发生情况。采用免疫组织化学技术(IHC)测定胰腺癌组织中IL 1β、IL 6和TNF α的表达情况,分析与胰腺癌临床病理的关系。结果胰腺癌组SIBO阳性率为60.0%,健康对照组SIBO阳性率为15.0%,胰腺癌组SIBO阳性率显著高于对照组(P<0.001)。在胰腺癌患者SIBO阳性组和阴性组间IL 1β、IL 6、TNF α表达水平有显著差异(P<0.05)。胰腺癌患者癌组织中IL 1β的表达与分化程度及临床分期差异具有统计学意义(P<0.05)。IL 6的表达在淋巴结是否转移及年龄的差异具有统计学意义(P<0.05)。TNF α的表达在分化程度及淋巴结是否转移的分布差异具有统计学意义(P<0.05)。结论胰腺癌患者较健康人更容易发生SIBO,SIBO可能通过促进IL 1β、IL 6及TNF α的表达影响胰腺癌的发生发展。