蛋白质-RNA相互作用鉴定技术研究进展

RNA结合蛋白(RNA binding protein, RBP)是基因表达调控的关键因子，参与包括蛋白质复合物的协调与稳定、RNA的加工与成熟以及mRNA的转运、稳定、翻译和降解等重要的细胞生物学过程。而RBP和RNA之间的相互作用可以在它们各自的生物学过程中起到重要作用。因此，快速、准确检测RBP-RNA相互作用的技术对研究RBP和RNA的功能至关重要。对近些年发展起来的RNA纯化的染色质分离（chromatin isolation by RNA purification，ChIRP）、RNA靶标的捕获杂交分析（capture hybridization analysis of RNA targets，CHART）、三分子荧光互补技术（trimolecular fluorescence complementation，TriFC）、RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation, RIP)、紫外交联免疫沉淀(UV-crosslinking and immunoprecipitation，CLIP)、RNA Pull-down和RNA电泳迁移分析等主要RBP-RNA相互作用鉴定技术的基本原理和优缺点以及应用进行了综述，旨在为新型技术的发现提供新的思路。     

胆囊牵拉影响心功能的传出效应分析

本工作观察了胆囊牵拉(或充气)对麻醉狗的心脏泵血功能的影响,并对与此有关的肾上腺素能受体的活动作了分析。实验表明,胆囊牵拉不影响用来反映左室射血分数的 PEP/ET 值,但引起有显著意义的心率加快和平均动脉压的升高;如预先给动物注射心得安,则牵拉不再能引起心率改变,但仍引起血压的升高,同时出现泵血功能的下降;如预先给动物注射酚妥拉明,牵拉不再引起血压改变,但出现心率的加快和泵血功能的增强。实验结果说明,胆囊牵拉可能通过心脏的β-肾上腺素能受体和动脉血管的α-肾上腺素能受体影响心脏的泵血功能,而这两种作用在正常情况下有可能相互抵消,造成胆囊激惹不显著影响泵血功能的假象。对这一现象在临床上的意义作了初步讨论。     

桑氏链霉菌几丁质酶ChiKJ40基因的克隆表达及其抑菌作用

【背景】目前关于桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)生防基因的研究不多,仅从其基因组中克隆了2个几丁质酶基因片段,其单个几丁质酶的完整基因序列相关研究未见报道。【目的】克隆S.sampsonii KJ40的几丁质酶基因Chi KJ40并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其抑菌作用。【方法】采用PCR扩增法从S.sampsonii KJ40中克隆几丁质酶基因Chi KJ40,连接到表达载体p ET-32a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。使用His标记蛋白质微量纯化试剂盒对重组几丁质酶进行纯化,Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的浓度,几丁质酶试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的几丁质酶活性。观察重组几丁质酶对桉树焦枯病菌(Cylindrocladium scoparium)、栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)、链格孢菌(Alternaria alternate)、紫丝核菌(Rhizoctonia violacea)几种致病真菌的抑菌作用。【结果】Chi KJ40基因(登录号为MF434484)在E.coli中经IPTG诱导表达,获得42 k D的重组几丁质酶,不同浓度IPTG在37°C诱导3 h,蛋白产量无明显变化。0.2 mmol/L IPTG 16°C诱导过夜,重组几丁质酶主要以可溶性形式存在于上清,小部分以包涵体存在于沉淀中。粗酶液几丁质酶活性为0.080 U/m L,酶比活力为0.041 U/mg,纯化酶液几丁质酶活性为0.046 U/m L,酶比活力为0.115 U/mg,纯化倍数为2.8,酶活回收率为57.5%。重组几丁质酶处理后,C.scoparium、C.parasitica和A.alternata菌丝细胞出现分节、膨胀,R.violacea菌丝溶解且部分被破坏成碎片。【结论】Chi KJ40基因的研究补充了S.sampsonii的生防背景,为几丁质酶基因找到了新的来源,并为其应用奠定了理论基础。     

紫外辐照恢复早期耐辐射奇球菌的转录组学分析（英文）

目的 耐辐射奇球菌是一种对紫外线、电离、干燥和化学试剂具有较强抗性的极端微生物。然而，该菌在紫外辐照后恢复早期的分子响应还不完全清楚。本文的目的是揭示耐辐射奇球菌在这一阶段的转录组响应。方法 本研究采用RNA-seq技术，测定了正常和紫外辐照培养条件下耐辐射奇球菌的转录组。为确定关键的差异表达基因及其调控关系，进行了功能富集分析。选取部分关键差异表达基因，进行实时定量PCR实验验证。利用以往研究中的转录组数据，寻找紫外辐照、电离辐射和干燥胁迫条件下公共的差异表达基因。构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络；对蛋白质互作网络中的枢纽基因和主要模块进行了鉴定；对这些枢纽基因和模块进行了功能富集分析。结果 紫外辐照后的恢复早期，上调基因数量是下调基因数量的2倍以上，且多数与应激反应和DNA修复有关。恢复早期的修复途径主要有单链退火（SSA）途径（涉及基因：ddr A-D）、非同源端连接（NHEJ）途径（涉及基因：lig B、ppr A）和核苷酸切除修复（NER）途径（涉及基因：uvr A-C），前两种途径为同源重组（HR）做准备，而NER途径去除紫外线照射带来的嘧啶二聚体。通过比较紫外辐照、电离辐...     

视网膜周边视野人工成像研究

目的 对于中心视力受损的人群，新型人工视觉系统可以将简化后的图像投射到视网膜上黄斑区以外的区域，从而帮助他们利用周边视觉感知信息。本文探究周边视野的感知特征，为植入式光学人工视觉系统的图形编码设计提供依据。方法 设计了探索周边视野感知特征的实验环境，向被试施加符号、数字、汉字的图案刺激，并控制刺激的大小、颜色组合、偏离角度、运动情况。用图形化的方法分析感知能力与各变量的关系。结果 周边视野的感知能力随偏离角度增大而下降，其趋势分为两个阶段，且受颜色组合、大小的影响明显。结论 研究结果提供了感知识别率较高的变量组合，为人工视觉系统的光学投影、眼内光学植入装置、特殊通信彩色符号编码开发等“人机结合”新技术提供重要的实验依据。     

126例家族性甲状腺机能亢进患者分析

本文分析了126例家族甲状腺机能亢进患者发病情况，一级亲属发病99例（74.4%），二级亲属26例（19.6%），(6.0%)。其中一、二级亲属均发病者7例，故各级亲属发病总数为133例，符合一级亲属>二级亲属>三级亲属的发病规律。根据本组资料算得家族性甲亢遗传度为83%。此外，还分析了甲亢发病诱因，有诱因者占84.1%，其中家族、工作纠纷及工作紧张为主要诱因，占63.5%。     

四川贡嘎山中华斑羚和中华鬣羚的时空分布及重叠性

明确同域近缘物种在时空生态位上的分布格局及重叠性关系，对理解物种行为和多物种栖息地的整合管理均具有重要意义。本研究基于四川贡嘎山国家级自然保护区2012—2021年红外相机监测数据，对保护区内分布的国家级二级重点野生保护动物——中华斑羚和中华鬣羚的时空分布开展研究。基于2016—2021年红外相机获得的72个中华斑羚和108个中华鬣羚分布点位，结合可能影响其空间分布的12个重要环境因子，利用MaxEnt模型对贡嘎山保护区内的中华斑羚和中华鬣羚的空间分布格局进行研究。基于2012—2021年1312条中华斑羚和1889条中华鬣羚的有效红外相机记录数据，利用核密度估计原理测算中华斑羚和中华鬣羚的日活动节律，了解两物种在时间生态位上的分布格局及重叠性。结果表明：中华斑羚和中华鬣羚适宜栖息地分别为731.95和1220.46 km²,分布区重叠面积为697.17 km²,且主要环境因子对两物种栖息地选择具有相似影响。两物种的日活动高峰均出现在清晨和黄昏，但两物种对晨昏时间段的利用区间和强度存在差异，中华鬣羚的早、晚活动高峰分别先于和迟于中华斑羚，且对...     

绝经后脂质代谢紊乱诱导小鼠抑郁症状的形成

目的 初步探讨绝经后脂质代谢紊乱是否参与抑郁症状的形成。方法 24只LDLR^-/-和16只WT C57BL/6J雌鼠，分为5组(n=8),分别为：WT+普通饮食组(WT)、WT+高脂饮食组(WT-H)、LDLR^-/-去卵巢+普通饮食组(LDLR^-/-)、LDLR^-/-去卵巢+高脂饮食组(LDLR^-/--H)、LDLR^-/-去卵巢+高脂饮食+辛伐他汀组(XF),连续喂养3个月。LDLR^-/-雌鼠双侧卵巢摘除联合高脂饮食建立绝经后脂质代谢紊乱模型。检测小鼠体重、脑总胆固醇(TC)及海马ERα、ERβ水平、抑郁行为、脑内5-HT水平；对脑TC水平和抑郁相关指标进行相关性分析。结果 (1)LDLR^-/--H组可复制绝经后脂质代谢紊乱特征，表现为小鼠体重显著增加、脑TC水平显著升高、海马ERβ表达明显下降；(2)LDLR^-/--H组小鼠水平和垂直运动均显著降低，TST静止时间显著增加，脑5-HT水平显...     

H7N9亚型禽流感假病毒的制备与验证

根据A/Anhui/1/2013(H7N9)病毒株HA和NA基因序列研究H7N9禽流感病毒的结构并制备相应的假病毒，并对此假病毒进行初步验证。将H7N9病毒株的HA和NA基因序列经公司优化合成后，经过接菌、提取质粒、假病毒构建等步骤来制备假病毒，并通过假病毒感染实验、透射电镜以及血清中和实验来验证假病毒制备是否成功。成功制备滴度均超过标准值104的A/Anhui/1/2013(H7N9)假病毒，在电镜下可观察到典型的流感病毒形态，并进一步使用本科室保存的29份血清样本（含4份H7N9阳性血清样本）、国家流感中心制备的四种不同亚型免疫组分（H1型、H3型、BV型和BY型）的抗血清以及商品化H7N9特异性抗体进行中和试验，结果显示4份阳性血清中和活性明显高于25份阴性血清，四种不同亚型抗血清的中和效率均低于40%，且商品化H7N9特异性抗体能够与其有效结合。本研究成功构建了H7N9假病毒并有效筛选出阳性血清，且具有良好的特异性，为流感大流行或疫苗免疫后人群血清学监测建立了科学有效的技术手段。     

上海地表热环境演变趋势城乡分异及其对城市更新的响应

快速而广泛的城市化过程对城市热环境产生了深刻影响，全面了解城市化进程如何影响城市热环境演变及其趋势差异对于城市生态安全、环境质量及居民健康等具有重要意义。本研究基于MODIS Aqua卫星2002—2020年夏季逐日白天地表温度产品，结合遥感植被指数和不透水面覆盖信息，使用归一化地表温度和热岛比例系数作为地表热环境衡量指标，利用M-K趋势检验和解释度分析，探究上海市城市化进程中夏季地表热环境演变趋势的城乡差异及其对城市空间更新的响应。结果表明：2002—2020年，上海市地表温度线性增长率为0.09℃·a^-1,热岛比例系数呈先上升(2002—2010年)后下降(2010—2020年)的变化趋势。上海市夏季平均地表温度总体呈现中心城区>新城区>农郊区的特征。2002—2020年，1.6%的区域表现出显著降温趋势，其中54.0%分布在中心城区；39.5%的区域表现为显著增温趋势，其中77.6%分布在新城区。上海高度城市化的中心城区出现集中的显著降温区域，而在其他区域尤其是新城区表现为显著增温趋势。上海从城市扩张向城市空间更新的转变是中心城区出现集中显著降温...