基于CRISPR/Cas系统的DNA碱基编辑技术及其在生物医学和农业中的应用

近年来,基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关系统(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)的基因编辑技术飞速发展,该系统可以利用同源定向重组(Homology directed repair,HDR)来完成其介导的精准编辑,但效率极低,限制了其在农业和生物医学等领域上的推广应用。基于CRISPR/Cas系统的DNA碱基编辑技术作为一种新兴的基因组编辑技术,能在不产生双链断裂的情况下实现碱基的定向突变,相对于CRISPR/Cas介导的HDR编辑具有更高的编辑效率和特异性。目前,已开发出了可将C碱基突变为T碱基的胞嘧啶碱基编辑器(Cytidine base editors,CBE),将A碱基突变为G碱基的腺嘌呤碱基编辑器(Adenine base editors,ABE),以及可实现碱基任意变换和小片段精准插入和缺失的Prime编辑器(Prime editors,PE)。另外,能实现C到G颠换的糖基化酶碱基编辑器(Glycosylase base editors,GBE)以及能同时编辑A和C两种底物的双碱基编辑器也已被开发出来。文中主要综述了几种DNA碱基编辑器的开发历程、研究进展及各自优点和局限性;介绍了DNA碱基编辑技术在生物医学以及农业中的成功应用案例,以期为DNA碱基编辑器的进一步优化和选择应用提供借鉴。     

蕙兰SSR引物开发及渝贵川地区兰属遗传多样性研究

采用磁珠富集法对野生蕙兰DNA进行SSR引物开发,并以开发出的多态性引物为研究工具,选取来自渝、贵、川3省(市)的9个野生兰属居群为研究对象,探讨遗传多样性与其地理位置分布的关系,从而在分子水平上为如何保护兰属植物提供有利参考。结果显示:8对SSR引物共扩增出53个等位基因,平均每个位点的等位基因为6.6250个,平均多态性位点百分率为98.6%。兰属植株个体间存在交配不平衡现象,Nei′s多样性指数范围为0.3158~0.8661,Shannon信息多样性指数变化范围为0.8833~1.3557。重庆黔江野生兰属居群的遗传多样性最高,79.97%的遗传分化存在于居群内,20.03%的遗传分化存在于居群间,居群内的变异高于居群间,基因流Nm<1,遗传漂变在兰属的遗传分化中起一定的作用。通过比较居群间遗传聚类结果与兰属植株采集地理位置的关系,发现野生兰花居群的划分在分子遗传学水平受其地理因素的影响较大。     

先天性心脏病患儿术后并发医院感染的危险因素及其病原菌分布和药敏实验分析

目的:统计先天性心脏病(CHD)患儿术后医院感染的病原菌分布及细菌耐药性情况,分析影响CHD患儿术后医院感染的危险因素。方法:回顾性选取2010年3月-2017年10月我院行CHD手术治疗的患儿3800例,收集临床标本进行致病菌培养并进行药敏试验,统计CHD术后医院感染患儿病原菌种类及主要致病菌的耐药情况,分析影响CHD患儿术后医院感染的危险因素。结果:3800例CHD患儿术后医院感染率为3.13%(119/3800),共分离出菌株172株,G^-菌、G⁺菌、真菌分别占55.81%(96/172)、26.74%(46/172)、17.44%(30/172)。肺炎克伯雷菌、大肠杆菌对头孢类抗生素高度耐药,鲍曼不动杆菌检出率逐年增高,且仅对多黏菌素B保持敏感;肺炎链球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌对大环内脂类抗生素、克林霉素、青霉素高度耐药,对万古霉素和替加环素保持敏感。术后医院感染与年龄、体重、病程、手术时间、体外循环时间、机械通气时间、ICU停留时间、住院时间、合并肺动脉高压、吸痰次数、静脉营养、应用丙种球蛋白或白蛋白有关(P<0.05),且合并肺动脉高压、体外循环时间≥100 min、机械通气时间≥120 h、吸痰次数≥5次/d是CHD患儿术后医院感染的危险因素(P<0.05)。结论:G^-菌、G⁺菌是CHD患儿术后医院感染的主要致病菌,且对常用抗生素高度耐药,此外鲍曼不动杆菌的检出率和耐药性上升极为明显,合并肺动脉高压、体外循环时间及机械通气时间过长、吸痰次数多的CHD患儿医院感染风险升高。     

四乙铵离子对虾的肌肉牵张感受器神经元的作用

本文研究了季铵离子(四乙铵、四甲铵和胆碱)对沼虾和对虾的慢适应牵张感受器神经元的胞体和轴突电活动的作用。当外液的钠离子完全被四乙铵、四甲铵或胆碱离子取代时,和甲壳类的肌肉不同,牵张感受器神经元很快就失掉兴奋性,用正常含钠溶液冲洗后,立即就恢复正常。在四乙铵离子部分取代外液的钠离子的情况下,细胞内记录的动作电位的下降相延长,而在高浓度的四乙铵离子作用下,则下降相进一步被延长而成平台,在平台上尚有许多波动,这期间在轴突上可记录到重复发放。单个逆流刺激也会产生多个顺流重复发放,它们的发放频率与四乙铵离子浓度是成比例的。相同浓度的四甲铵或胆碱溶液则无上述效应。     

浙西江山晚奥陶世三分贝族—新属——Costitrimerella*

Costitrimerella gen. nov. 属于无铰纲腕足动物中的三分贝族.模式种Costitrimerella costellata gen. et sp. nov. 的模式标本采自浙江江山城西约5km的坛二村北和(土弄)里上奥陶统黄泥岗组的硅质结核中.因发育良好放射状壳线、背肌台前部强烈高隆又缺失台穹构造而与本族其它15属(壳表均光滑仅饰同心生长线纹)有重要的差别,它可能代表奥陶纪晚期三分贝族的一个奇特支系.志留纪三分贝族大都被认为是浅水产物.江山黄泥岗组紫红色泥岩中含深水的叶月贝(Foliomena)腕足动物群,但未寻获三分贝族化石,而夹于泥岩中的硅质结核未见叶月贝动物群的成员,却产三分贝族的代表,其生存环境尚待深入探查.     

浙西江山晚奥陶世三分贝族—新属——Costitrimerella

Costitrimerella gen. nov. 属于无铰纲腕足动物中的三分贝族.模式种Costitrimerella costellata gen. et sp. nov. 的模式标本采自浙江江山城西约5km的坛二村北和(土弄)里上奥陶统黄泥岗组的硅质结核中.因发育良好放射状壳线、背肌台前部强烈高隆又缺失台穹构造而与本族其它15属(壳表均光滑仅饰同心生长线纹)有重要的差别,它可能代表奥陶纪晚期三分贝族的一个奇特支系.志留纪三分贝族大都被认为是浅水产物.江山黄泥岗组紫红色泥岩中含深水的叶月贝(Foliomena)腕足动物群,但未寻获三分贝族化石,而夹于泥岩中的硅质结核未见叶月贝动物群的成员,却产三分贝族的代表,其生存环境尚待深入探查.     

一种转移非特异性蛋白带的染色方法

考马斯亮蓝是常用的聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳的染料,利用硝酸纤维素膜(NCF)对染料的吸附作用,将低浓度的考马斯亮蓝(0.025%)染色液直接对NCF上的转移蛋白带进行染色,经实验反复验证.它是一种较好的NCF上转移非特异性蛋白带的染色方法.     

脑源神经营养因子基因转染神经断端促进切断坐骨神经再生

为了研究体内表达的脑源神经营养因子（Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＢＤＮＦ）对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用,我们将人ＢＤＮＦｃＤＮＡ克隆到真核表达载体ｐＣＢ６中,使ＢＤＮＦ基因在ＣＭＶ启动子控制下表达。在雏鸡出生后３小时内及第二天直接将ｐＣＢ－ＢＤＮＦｃＤＮＡ·ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经,神经切断１０天后进行实验检测,观察到,ＢＤＮＦｃＤＮＡ转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内（Ｌ４－Ｌ６）运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含ＢＤＮＦｃＤＮＡ的质粒对损伤的神经进行基因治疗,具有良好的前景;ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。     

安徽蜱类名录

蜱是蜱螨亚纲中一个专性寄生的类群．在虫媒疾病中,由蜱传播的病原件种类最多,不仅对人、畜疾病的传播作用大,在自然界还能起到贮存宿主的作用．1981年夏立照等初步报道安徽蜱类计2科,3属,5种,经过12年断续的野外工作,整理标本鉴定,安徽蜱类累计为2科,