快速检测NDM-1基因的环介导恒温扩增技术的建立与评价

基于DNA环介导恒温扩增技术 (Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),探索建立一种应用于NDM-1基因 (New Metallo-β-Lactamase-1 Gene,NDM-1) 的快速检测方法,以适应临床实验室等的检测需求。利用LAMP技术,以NDM-1基因为靶序列,设计4组LAMP引物,并筛选最优引物组,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在灵敏度试验中,NDM-1基因的最低检测限为6 拷贝/反应。在特异性实验中,以4株病原菌 (肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌) 以及肠道菌群元基因组DNA、土壤菌群元基因组DNA为模板对NDM-1基因进行检测,结果显示均没有发生非特异性扩增反应。文中建立的LAMP检测方法能够快速检测NDM-1基因,且可直接观察到实验结果,实现了检测结果的可视化。具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求,具有良好的应用价值。     

喉癌患者合并抑郁症影响因素分析及对策

目的：探讨喉癌患者抑郁情绪的现状及其主要影响因素,并提出相应的护理对策。方法：采用抑郁自评量表（sos）、社会支持评定量表（SSRS）以及自行设计问卷,对96例经治的喉癌患者进行现况调查。采用SPSS13．0软件进行单因素和多因素累积logistic回归分析。结果：本研究实际有效测评96例患者,发现抑郁者54例,占56．25％;本组患者SDS为（37．59：1：8．74）分,与全国常模SDS（33．46±8．55,n=1340）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;单因素和多因素累积logistic回归表明性别、文化程度、医疗费用来源、病程、治疗方案及社会支持度与无抑郁症患者相比差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：喉癌患者抑郁情绪比较严重,护理人员应采取针对性的护理对策,提高患者的心理健康水平,促进躯体疾病康复。     

探讨喉癌患者围手术期的护理体会

目的:探讨喉癌患者围手术期合理的护理措施,为临床治疗与护理提供一定的理论依据。方法:对我院82例喉癌手术患者的临床资料进行回顾性分析,总结其护理经验,并制定相应的护理措施。结果:所实施的术后患者均达到预期的治疗效果,82例喉癌病人均痊愈出院。结论:做好喉癌术后护理,能提高手术成功率,减少术后并发症的发生,提高患者生存质量。     

合生元益生菌冲剂对提高儿童消化道黏膜免疫的作用

目的探讨健康儿童口服法国合生元益生菌冲剂后的唾液中sIgA(分泌型IgA)含量的变化,从而判定其对提高消化道黏膜免疫的作用。方法选择正常健康儿童28例,根据年龄分为4组,其中从每组随机抽出1或者2例作为对照组,对照组共为7例,而试验组则为21例。收集口服合生元益生菌冲剂前后正常健康儿童唾液标本经放射免疫分析法检测sIgA的含量。结果对照组儿童之间唾液sIgA分泌量差异较大,个体的唾液sIgA水平会随着身体健康状况和饮食条件等呈不稳定情况,而试验组儿童的唾液sIgA分泌量在连续口服益生菌冲剂6天后有了一个新的提高,并在继续服用益生菌冲剂的7天内获得比较高而稳定的水平。结论口服法国合生元益生菌冲剂可有效诱导消化道黏膜免疫应答,提高并维持儿童的免疫力。     

大蒜素对白色念珠菌生长的抑制作用

探讨大蒜素对白色念珠菌生长的抑制作用。以NCCLS方案检测了胡桃楸提取物和伊曲康唑(ICZ)、氟康唑(FCZ)、两性霉素B(AMB)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对133株白念珠菌体外生长抑制作用。标准菌株JC1A的M IC结果表明大蒜素提取物对白念珠菌的抗菌作用相当于FCZ,略低于ICZ、AMB和5-FC;临床分离株对ICZ和FCZ的耐药率很高,对大蒜素提取物的耐药率较低。大蒜素提取物对白色念珠菌生长有强力抑制作用。     

水位埋深和微地貌对金川泥炭土壤微生物活性及甲烷功能基因的影响

泥炭沼泽是长期储存碳最有效的陆地生态系统。水文特征和微地貌可能会通过调控微生物群落和功能影响泥炭地碳储存。本研究以长白山金川泥炭沼泽为研究对象,选取-10、-1、0、4、10、13、14和18 cm八个水位埋深,并在各水位埋深点采集臌囊薹草(Carexs chmidtii)草丘和丘间微地貌的土壤样品,以探究水位埋深和微地貌对土壤微生物量碳氮、酶活性及甲烷功能基因的影响。结果表明:微生物量碳氮受水位埋深影响因土壤层不同而不同,两者在草丘30~45 cm和丘间0~15 cm土壤层呈显著正相关。土壤碳氮循环相关的酶(β-1,4-葡萄糖苷酶和β-1,4-N-乙酰葡糖胺糖苷酶)活性与水位埋深呈显著正相关且受土壤层调控,磷酸酶活性与水位埋深无关。此外,水位埋深与甲烷还原菌丰度(每克干土的mcrA功能基因拷贝数)呈显著负相关,而与甲烷氧化菌丰度(每克干土的pmoA功能基因拷贝数)呈显著正相关,且水位埋深对甲烷还原菌丰度的影响更大。草丘微地貌显著影响微生物量碳,同为15~30 cm土壤层,其含量表现为草丘>丘间;处于相同海拔的草丘15~30 cm和丘间0~15 cm,其含量表现为丘间>草丘。草丘微地貌也显著影响甲烷氧化菌丰度,同为15~30 cm土壤层,甲烷氧化菌丰度表现为草丘>丘间。本研究表明,泥炭地空间异质性对微生物活性具有重要影响,从定点研究到大尺度估算的尺度放大过程中,应对这一现象充分考虑。     

长期强迫运动对布氏田鼠体重和血清瘦素浓度的影响

动物稳定体重的维持需要能量摄入和消耗之间的平衡.运动是影响动物能量平衡的重要因素之一.为了理解运动对布氏田鼠的生理学效应,我们在室内条件下,运用踏车测定了强迫运动训练6周后动物的体重、体脂含量、摄食量和瘦素浓度的变化.摄食量采用代谢笼法测定,体脂含量采用索氏提取法,血清瘦素含量采用放免试剂盒测定.结果发现强迫运动训练6周对布氏田鼠的体重和摄食量都无显著影响,与非运动训练组田鼠相比,运动训练组田鼠的身体脂肪重量降低了3.5 g,运动组田鼠的血清瘦素水平比对照组下降了30%.对照组田鼠的血清瘦素与体脂含量具有明显的相关性,但运动组则不具有相关性.这些结果表明在强迫运动训练期间布氏田鼠不是通过增加食物摄入,而可能是通过动员贮存的脂肪和减少非活动性能量消耗等方式来维持自身的能量平衡.瘦素在长期强迫运动训练过程中对身体脂肪含量的变化具有调节作用.     

生长抑素基因在不同性别和年龄黑线仓鼠哈氏腺的差异表达

哈氏腺作为“视网膜-松果体轴”的候补结构,介导了体外光信号与体内神经内分泌调控过程,具有多样性和复杂的生理功能,并受神经和体液因素的双重调控。生长抑素（somatostatin, SS）是调控动物生长发育的主要因子之一,检测SS基因在黑线仓鼠哈氏腺的差异表达模式,为光信号调控动物的生长发育机制提供理论依据。以野生黑线仓鼠（Cricetulus barabensis）为研究对象,测量了不同性别和年龄个体哈氏腺的形态学指标,克隆了哈氏腺SS cDNA序列,实时荧光定量PCR方法检测了哈氏腺中SS基因的表达变化。结果显示：（1）黑线仓鼠体重无性别差异,随年龄增长而增加;哈氏腺的长度和重量也随年龄增长而增加;调整体重影响后,哈氏腺的重量和长度没有年龄之间的差异,但哈氏腺重量存在性别间差异（P<0.05）。（2）克隆到黑线仓鼠哈氏腺SS cDNA序列489 bp ,并对序列结构进行分析,黑线仓鼠哈氏腺SS cDNA具有典型分泌蛋白cDNA的特征,并在进化上高度保守;（3）检测到SS mRNA在黑线仓鼠哈氏腺中均有表达,表达量存在年龄和性别差异（P<0.05）;（4）随着个体性成熟和衰老,黑线仓鼠哈氏腺中SS mRNA的相对表达量逐渐降低,其表达量分别与哈氏腺长度和重量的发育变化负相关（r=-0.557,P=0.022;r=-0.806,P＜0.001）。结果表明,黑线仓鼠哈氏腺重量和SS表达量均表现出两性异形,可能是对不同繁殖策略的适应;SS基因作为负调控因子参与野生黑线仓鼠哈氏腺的生长发育过程。     

海洋固氮微生物与环境因子关系综述

海洋微生物的固氮作用是海洋氮素循环中一个关键的环节,对海洋生态系统的氮素供给和初级生产力的提高有着重要的意义。本文从海洋生物固氮的研究历史着手,详述了海洋固氮微生物的多样性及固氮活性研究方法,同时从环境因子的角度,总结了CO2浓度、季节变化、营养盐浓度、污染物及生物物种等环境因子对固氮微生物固氮活性的影响,并对海洋固氮微生物的研究前景进行了展望。     

猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增殖特性

为了研究猪细小病毒不同接毒方式的增殖规律及在不同细胞的病毒含量差异。本实验利用PK-15细胞对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)分离株进行适应性培养。针对PPV的NS1基因设计特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法。利用该方法检测PPV分离株同步和分步接毒的病毒含量,绘制一步生长曲线;同时检测PPV在HeLa、MDBK、PK-15、ST、F81、BHK-21和Marc-145细胞上的增殖特性。结果显示,PPV分离株盲传至12代产生CPE,继续传代培养10代仍能产生稳定的细胞病变,成功培育出PK-15细胞适应株。一步生长曲线显示,分步接毒的病毒含量高于同步接毒,而增殖周期短于同步接毒;PPV在不同细胞的增殖结果显示,各细胞开始出现CPE的时间依次为PK-15、ST、HeLa和MDBK,病毒含量高低依次是ST、PK-15、MDBK和HeLa,而不能在F81、BHK-21和Marc-145细胞上增殖。本实验首次利用荧光定量PCR方法成功分析PPV不同接毒方式的增殖规律及不同细胞的增殖特性,为PPV基础研究和疫苗生产提供资料。