柑橘基因组原位杂交(GISH)技术体系的建立

通过改进实验方法,建立起柑橘基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)分析技术,并成功地应用于属间有性杂种鉴定,为进一步分析柑橘体细胞杂种核基因组组成奠定了基础。柑橘的染色体制片以去壁低渗-火焰干燥法较好,容易获得大量清晰、分散的有丝分裂中期相,且杂质较少。切刻平移法生物素(Biotin)标记探针,标记基因组总DNA与封阻基因组总DNA的浓度比例为1：50时,能有效分开属间杂种枳橙中来自双亲的染色体。     

采用倍性分析仪鉴定柑橘愈伤组织的遗传变异

使用倍性分析仪,对48种培养多年不同基因型的柑橘愈伤组织的细胞NDA含量进行了测定。结果发现,除了路比葡萄柚,尾张和金诺橘等3种愈伤组织变异较小,未出现第二个峰以外,有93.8%的基因型的愈伤组织的细胞均出现了DNA含量加倍的细胞,通过DPAC分析软件分析得知,凤梨甜橙三倍体,宁波金钳,长沙橘,鲁斯脐橙,国庆4号和卡特夏橙等6愈伤组织的细胞DNA含量还出现了三倍增加及非整倍增加的现象。在待测的48种愈伤组织中,DNA含量变异细胞的百分率最大者为凤梨甜橙三倍体,达18.51%,最小者为暗柳橙,为4.70%,通过取肯氏新复极差分析得知,不同基因型的DNA含量变异细胞的百分率之间存在差异显著性,在相同继代培养基和相同继代周期的条件下,培养时期对愈伤组织变异大小影响不显著。     

伏令夏橙愈伤组织体细胞胚发生中多胺水平的变化

以继代培养8年的伏令夏橙愈伤组织为材料,研究了不同类型愈伤组织体细胞胚发生能力的差异和多胺水平的变化及两者之间的关系.结果表明,胚性愈伤组织的多胺含量高于非胚性愈伤组织,体细胞胚发生能力与多胺水平呈正相关.体细胞胚发生早期Put含量的增加有利于体细胞胚发生.球形胚大量形成时,Spd达到最高值;球形胚发育后期并有少量心形胚形成时Spm达到峰值.随着倍性的增加,伏令夏橙体细胞胚发生能力降低.精氨酸脱羧酶的活性变化与Put水平呈正相关,表明它是调节伏令夏橙体细胞胚发生中多胺水平的重要因子.     

晚熟芽变脐橙在果实成熟阶段与原品种在糖酸代谢的差异

奉节晚橙(Citrus sinensis) (FW)为奉节72-1脐橙(FJ)的一个晚熟芽变品种, 比原品种成熟期推迟1个月以上. 测定了两个品种在成熟阶段果肉和果皮的糖组分(蔗糖、葡萄糖和果糖)和酸组分(苹果酸和柠檬酸)的含量, 并分析了相关代谢酶基因的转录情况. 结果表明, FW中的糖分和酸代谢受到芽变的影响. FW果肉组织中的各糖分含量在花后227天前显著低于FJ, 不过在花后263天则显著高于后者. FW果肉中的蔗糖合成酶基因(CitSS1)的表达比原品种延迟, 而酸性转化酶基因(CitAI)的表达水平在花后207和263天高于原品种. 在FW果皮组织中, 仅有蔗糖含量在果实成熟早期(花后165和187天)显著低于FJ, 不过蔗糖相关裂解酶基因与后者相比在成熟时期不同阶段表现出较高的表达水平. 分析两品种酸代谢变化发现, 芽变品种果肉中苹果酸含量在整个果实成熟期都显著低于原品种, 不过在果皮中则显著低于后者; FW 果皮和果肉中柠檬酸的含量在果实成熟前期高于FJ, 但是在果实成熟后期则低于后者. 柠檬酸含量差异部分与柑橘线粒体柠檬酸合成酶基因高量表达及柑橘质体乌头酸酶基因的低水平表达相关. 明确了芽变品种在果实成熟过程中糖酸代谢相关指标的差异变化, 可以认为发生在FW中的突变影响了其糖酸代谢, 这种代谢的变化可能与其他晚熟特征相关.     

柑桔胚性愈伤组织的诱导、保存和利用

对近３０年来柑桔胚性愈伤组织诱导及其影响因素,保存,利用和存在的问题以及今后的研究方向进行了概述。     

果树遗传转化及基因组转移研究进展

果树遗传转化及基因组转移研究进展邓秀新,刘继红（武汉华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉４３００７０）关键词果树,遗传转化,原生质体融合,体细胞杂种ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＧＥＮＥＴＩＣＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＡＮＤＧＥＮＯＭＥＴＲＡＮＳＦＥＲ...     

原生质体融合获得柑桔种间体细胞杂种

粗柠檬(Citrus jambhiri Lush)叶肉原生质体与哈姆林甜橙(C.sinensis L.Osbeck)胚性悬浮细胞系原生质体经PEG诱导融合,培养7天时原生质体恢复分裂。再生的胚状体在含有GA_3的培养基中萌发出茎芽。茎芽经生根诱导成为完整植株。对首批再生的5棵植株进行染色体检查,结果表明,全为四倍体,2n=4x=36。淀粉胶电泳分析过氧化物酶同工酶,结果显示这5棵植株为体细咆杂种。粗柠檬和哈姆林甜橙在该位点上均为同质结合,基因型分别是MM和FF。体细胞杂种含有双亲的酶带,基因型为MMFF。杂种植株生长旺盛,根系发达,叶片及植株形态介于双亲之间。本文对其作为砧木品种的可能性等问题作了讨论。     

宽皮柑橘品种的胚性愈伤组织诱导

以宽皮橘3个品种的幼嫩胚珠和8个品种成熟果实中未发育胚珠为试材,采用EME(MT 500mg/L麦芽浸出物)、MKT(EME 10mg/L KT)、MGS(EME 1mg/L GA3 40mg/L硫酸腺嘌呤)和MDB (EME 0.01mg/L 2,4-D 0.1mg/L BA)4种培养基进行胚性愈伤组织诱导,结果表明EME与MKT培养基配合使用有利于从幼嫩胚珠获得胚性愈伤组织;MGS比MDB更有利于成熟果未发育胚珠胚性愈伤组织的诱导;暗培养有利于此诱导过程。经两种途径获得的胚性愈伤组织,染色体数目稳定,均为二倍体2n=2x=18。     

银杏雌配子体发育及原生质体分离与培养的研究

经观察,银杏雌配子体在4月下旬-5月下旬为游离核时期,5月上旬采集的雌配子体在0.5%纤维素酶(Onzuka R—10)与0.5%果胶酶(Serva)混合酶液中酶解4—5h,原生质体密度为6×10~5—8×10~5/ml,活性87.3%。原生质体在去掉NH_4NO_3的MT培养基中,附加BA1.0mg/L,NAA3.0mg/L,谷氨酰胺1000mg/L,Vc5mg/L,采用液体浅层培养获得了肉眼可见的多细胞团。     

柑桔种间体配融合及培养研究

“平户”文旦（柚）（Ｃｉｔｒｕｓｇｒａｎｄｉｓ）Ｏｓｂｅｃｋ的四分体经酶解,分离出原生质体。ＰＥＧ（聚乙二醇）诱导这类原生质体与二倍体“伏令夏”甜橙（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ）胚性悬浮细胞系的原生质体融合。融合后的原生质体培养于ＢＨ３／ＥＭＥ培养基中。２天后,观察到花粉管生长现象。不同处理的结果显示,这一现象来源于异核体细胞。这种具花粉管生长的细胞可进一步分裂,形成多细胞团及球形和心形胚状体。对再生的胚状体进行染色体数检查,证明１３．１％的胚状体为三倍体,２ｎ＝３ｘ＝２７。而起始悬浮细胞系为二倍体,检查的３９２个细胞,未发现有染色体倍性变异。