蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备

蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。     

无距虾脊兰营养器官解剖结构及其生态适应性

采用石蜡切片法对无距虾脊兰(Calanthe tsoongiana T.TangetF.T.Wang)营养器官解剖结构进行研究。结果显示,无距虾脊兰叶为等面叶,与一般植物相比,表皮毛和气孔器较少,均分布在下表皮,气孔器稍外凸,叶片维管束分化程度不一,木质部厚度远大于韧皮部。假鳞茎由表皮、基本组织和维管束组成,基本组织发达,含有丰富的内含物。维管束散生于基本组织中;根主要由根被、皮层和中柱组成,根被通常可见4层,皮层由8~10层薄壁细胞组成,菌丝体通过破坏根被细胞侵入皮层。除正对木质部脊的中柱鞘细胞外,其余中柱鞘通道细胞全面增厚,维管束类型为辐射维管束,中柱中央为薄壁细胞组成的髓。无距虾脊兰营养器官的解剖特征表现出阴生植物的特点,引种栽培过程中应注意适当遮荫和通风。     

珍稀植物扇脉杓兰营养器官的解剖学研究

采用石蜡切片技术对扇脉杓兰营养器官的解剖结构进行了研究。结果表明：根状茎的薄壁细胞中含丰富的淀粉粒,维管柱中分布着排列紧凑的周木维管束;根的皮层发达,有的皮层细胞中存在真菌菌丝团,木质部与韧皮部呈辐射状相间排列,根和根状茎的内皮层细胞都形成马蹄形加厚结构。茎的表面分布气孔,皮层面积较小,皮层内部的基本组织发达,外韧维管束散生分布其中,茎和叶上都附有非腺性毛;叶为等面叶,叶肉细胞排列疏松,气孔主要分布于远轴面,略外凸,保卫细胞中含有叶绿体,叶缘处的叶肉组织中含有气腔结构。扇脉杓兰营养器官的这些特征与其荫蔽湿润的生境是相适应的。     

不同栽培条件下南方红豆杉生长特性研究

以4～6年生南方红豆杉为材料,对其不同栽培条件下地径、冠幅、株高、当年抽高、当年侧枝数及总侧枝数等生长特性进行了研究。结果表明:南方红豆杉4～6年生幼林生长量随年龄增大而增加,但其增加的趋势变缓,生长速度变慢;耕作农田中南方红豆杉生长最好,土壤板结未耕作农田生长较差,去除上层20cm耕作土的农田最差;南方红豆杉纯林生长好于落叶阔叶林下(林分郁闭度0.6～0.7),且种植密度越大差异越明显;南方红豆杉落叶阔叶林下套种及纯林生长量均随栽培密度减小而增大,不同栽培密度相差越大,生长量差异越明显。     

矫正的病床综合工作效率指标的研制与应用

目的 针对传统的病床工作效率评价方法的缺陷,提出矫正的病床工作效率指标,为医院病床资源的合理配置提供技术支持。方法 资料来源于唐山市某综合医院2008年的医疗统计报表和绩效考核方案。用标准住院天数对病床综合效率指标进行矫正,并测算各科室的开放床位的可信区间。结果 各科室的病床工作效率存在较大差异,口腔科、ICU和儿科的效率最高。20个科室中病床设置合理的有6个科室,14个科室需要调整,其中需增加床位的有6个科室,需减少床位的有8个科室。结论 矫正的病床工作效率指标具有更广泛的适用范围,应探索应用单病种或病例分型的标准平均住院天数矫正病床工作效率。     

无蹼壁虎的繁殖习性

本文报道了无蹼壁虎（Ｇｅｋｋｅｓｗｉｎｈｏｎｉｓ） 的繁殖习性。雌雄体在外形上存在一定差别。雌雄体性腺具有季节性变化。６—７ 月产卵, 每产２ 枚, 年产卵一次, 卵径１３－４５ （１２－０ —１５－６） ×９－４３ （７－８—１０－７） ｍ ｍ ; 卵产在各种缝隙中。７ 月中旬开始出现当年孵化出的幼体。     

文心兰花芽分化过程中糖类和蛋白质的组织化学定位

以文心兰‘milliongolds’不同发育阶段的花芽为试材,研究糖类和蛋白质在文心兰花芽分化过程中的变化。经石蜡切片高碘酸席夫反应法（PAS法）和汞溴酚蓝组织化学染色观察发现,糖类和蛋白质主要以颗粒状分布在各器官的原基顶端及其周围。在花序原基分化期,细胞中糖含量较少,而蛋白质含量丰富且整体分布均匀。随着花芽的继续分化,糖和蛋白质含量在花萼原基分化期最为丰富,在花瓣原基时期含量明显减少;进入合蕊柱及花粉块分化期时,糖和蛋白质在合蕊柱及花粉块着生处最为集中。在文心兰花发育过程中,对不同分化时期中花芽的糖和蛋白质含量进行测定,表明糖和蛋白质含量的变化趋势与组织化学定位相一致。     

扇脉杓兰果实生长动态及胚胎发育过程观察

对授粉后不同发育阶段扇脉杓兰(Cypripedium japonicum Thunb.)果实的生长动态进行了观察和分析,并分别采用TrC法和常规石蜡切片法研究了种子生活力及其胚胎发育过程.观察结果湿示:扇脉杓兰果实形态成熟时间约为110 d,其中,授粉后0～20 d为第1次迅速生长期,授粉后20～30 d为第1次缓慢生长期,授粉后30～50 d为第2次迅速生长期,授粉后50～110 d为第2次缓慢生长期;果实纵径和横径的生长动态变化过程相似,但横径的生长动态曲线较纵径平缓,形态成熟时果实的纵径和横径分别为48.87和13.59 mm.成熟种子由内外2层种皮和球形胚构成,不具胚乳,内外种皮间具空气腔;败育种子只具有内种皮和外种皮而无种胚.胚胎发育类型为石竹型,种胚自受精形成合子到发育为成熟球形胚约需95 d.种胚发育时合子第1次不均衡横裂形成基细胞和顶细胞;基细胞发育为胚柄细胞,胚柄细胞高度液泡化,在胚胎发育的过程中不进行分裂并逐渐退化消失;顶细胞不参与胚柄形成,并且经过有丝分裂最终形成球形胚;内珠被在种子成熟时发育成为1层致密的紧贴胚体的内种皮.种胚纵径和横径的生长动态变化相似,成熟球形胚的纵径和横径分别为208.71和106.19 μm.扇脉杓兰种子生活力较高,有生活力的种子占56％.根据研究结果推测:自然状态下扇脉杓兰种子萌发率较低,可能与致密的种皮、种子中较小的胚体以及无胚乳导致的营养成分不足有关.     

浙江省蜡梅野生种群种实表型性状变异及其与土壤相关因子的关系

测定了浙江省(富阳的龙王坎、碧东山和五尖山以及临安的方山)4个蜡梅[Chimonanthus praecox(Linn.)Link]野生种群种实11个表型性状及土壤元素含量和p H值;在此基础上,对表型性状进行相关性分析和主成分分析,对供试种群进行聚类分析,并进行了表型性状与土壤相关因子的灰色关联度分析。结果表明:在11个表型性状中,除种子千粒质量外,种群间其他表型性状均有显著或极显著差异,其中,富阳碧东山种群的多项指标值均最大;各表型性状的变异系数差异明显(6.97%~45.72%,均值为19.98%),按变异程度由大到小依次排序为单果种子数、单果质量、单果果壳质量、果实长、果实宽、果形系数、果口直径、种形系数、种子宽、种子长、种子千粒质量;种群间表型分化系数均值为14.83%;11个表型性状中,种形系数和种子千粒质量与其他表型性状的相关性均较小,而果实长、果实宽、果口直径、单果质量、单果果壳质量和单果种子数间均存在极显著相关性。4个种群的土壤元素含量差异明显,土壤均呈弱碱性;各表型性状与同一土壤因子的关联度系数差异较小,但不同土壤因子与同一表型性状的关联度系数差异明显,关联度系数均值从大到小依次为p H值、Na含量、K含量、Cu含量、Mn含量、Ca含量、Mg含量、N含量、Fe含量、P含量、Zn含量。主成分分析结果表明:单果果壳质量、果实宽、单果质量、果实长、种子长、种形系数和种子千粒质量对蜡梅野生种群种实表型性状变异起主要作用。通过聚类分析,可将供试4个蜡梅野生种群分为3组,其中,临安方山和富阳龙王坎2个种群归为一组,另2个种群各自独立成组,聚类分析结果与种群间的地理距离无关。研究结果表明:浙江省蜡梅野生种群种实表型性状变异丰富,以种群内变异占主导地位,遗传特性是其表型性状变异的主要因子,且表型性状变异与多个土壤因子的综合作用相关。     

无距虾脊兰营养器官解剖结构及其生态适应性

采用石蜡切片法对无距虾脊兰（Calanthe tsoongiana T.Tang et F.T.Wang）营养器官解剖结构进行研究。结果显示,无距虾脊兰叶为等面叶,与一般植物相比,表皮毛和气孔器较少,均分布在下表皮,气孔器稍外凸,叶片维管束分化程度不一,木质部厚度远大于韧皮部。假鳞茎由表皮、基本组织和维管束组成,基本组织发达,含有丰富的内含物。维管束散生于基本组织中;根主要由根被、皮层和中柱组成,根被通常可见4层,皮层由8~10层薄壁细胞组成,菌丝体通过破坏根被细胞侵入皮层。除正对木质部脊的中柱鞘细胞外,其余中柱鞘通道细胞全面增厚,维管束类型为辐射维管束,中柱中央为薄壁细胞组成的髓。无距虾脊兰营养器官的解剖特征表现出阴生植物的特点,引种栽培过程中应注意适当遮荫和通风。