天蓝色链霉菌胞内蓝色素提取方法研究

对天蓝色链霉菌— 10 0胞内蓝色素提取方法进行了研究 ,结果表明碱提取法、SDS法、研磨法的色素提取得率分别为 90 2 %、95 2 %和 54 6 % ;酶水解法的色素提取得率 <30 % ;细胞在pH9缓冲液中自溶 ,浓度为 1/4原发酵浓度 ,4 0℃保温搅拌 4 8h ,色素提取得率为 33 8%。     

可口革囊星虫的精子发生及精子结构

为了探究可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)精子发生过程及结构上的特殊性,用显微及亚显微技术研究了可口革囊星虫的精子发生和精子结构。可口革囊星虫的精巢位于收吻肌基部,为一曲折的带状组织。成熟精巢内可观察到精原细胞、精母细胞以及精细胞等各阶段的生精细胞。在精子形成早期,很多精细胞脱离精巢,以精细胞团的形式掉落到体腔中。精细胞团内的精细胞同步发育为精子后,脱离精子团进入肾管。成熟精子由头部和尾部组成。头部由钟形顶体与鼓形细胞核构成。顶体后段下包于精核的前端。顶体分内、中、外三层,外层有横隔;顶体下腔内有颗粒状物质不均匀分布,中央有一束丝状纤维组成的顶体棒。核物质电子密度高,核内含空泡。无核前窝,具浅的核后窝。尾部分中段和末段,中段由6个(偶见5个或7个)线粒体围绕近、远端中心粒构成;末段细长鞭状,由轴丝及包绕轴丝的质膜组成,轴丝为典型的"9 2"结构。分析认为:可口革囊星虫精子发生过程以及超微结构上存在特殊的结构与机制:①精细胞团保证了精子形成的同步性;②顶体后段下包于精核的前端使精子头部小而灵巧,利于快速运动;③顶体的横隔使精子顶体的牢固性增强,确保受精时顶体反应的正常进行;④中段较多的线粒体使精子具有更强的环境适应性,有利于有效的受精。     

草莓中蜡样芽孢杆菌的VITEK快速检测

采用形态、生理生化以及生物分子等多种手段开展了草莓中芽孢杆菌的鉴定研究,结果确认草莓携带的芽孢菌为蜡样芽孢杆菌。实验表明了VITEK微生物自动鉴定系统可快速检测草莓中的芽孢菌,结果可靠,为开发草莓杀菌抑菌技术提供了参考。     

全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究

以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。     

一种胆固醇氧化酶高产菌株筛选方法的建立

用亚硝基胍(1 mg/mL)与超声波(200 W, 50 kHz)复合诱变的方法, 对产胆固醇氧化酶短杆菌Brevibacterium sp. DGCDC-82进行诱变处理, 得到一株桔红色突变株其产胆固醇氧化酶能力提高140%, 酶活达到1.24 U/mL, 又用同样的方法对桔红色突变株进行回复突变处理, 得到一株白色回复突变株和一株淡粉色回复突变株, 两株回复突变株产胆固醇氧化酶的能力又明显下降, 酶活分别为0.17 U/mL和0.69 U/mL。说明短杆菌Brevibacterium sp.产胆固醇氧化酶能力与其产红色素成正相关偶联关系, 这种相关性模型的建立可以作为以后诱变或定向进化研究的筛子。     

饥饿和再投喂对鲇血液生理生化指标的影响

在室内可控条件下,对鲇（Silurus asotusLinnaeus）进行7d、14d和21d的饥饿处理,随后各组恢复投喂20d,研究饥饿和再投喂对鲇血液生理生化指标的影响。结果显示：饥饿过程中,鲇血液红细胞数和血红蛋白14d内上升,血红蛋白上升显著（p〈0.05）,21d后两项生理指标开始下降;饥饿7d后血糖浓度显著下降（p〈0.05）,饥饿14d和21d后趋于相对稳定;总蛋白、白蛋白和球蛋白均呈下降趋势,分别在饥饿的14d、7d和21d后与饥饿前达到显著性差异（p〈0.05）;甘油三酯和总胆固醇分别在饥饿7d和21d后显著下降（p〈0.05）;饥饿14d后Na＋和Cl-浓度显著下降（p〈0.05）,21d后Na＋浓度却又显著上升（p〈0.05）,Cl-浓度有所回升;Ca2＋浓度在饥饿过程中逐渐下降,且差异显著（p〈0.05）。饥饿对K＋浓度和碱性磷酸酶活力没有明显影响。恢复投喂20d后,测定的血液指标均有不同程度的恢复。采用二元三次方程（CUB类型）就各项生理生化指标对饥饿时间（d）进行的回归分析表明,Ca2＋与饥饿时间的决定系数（R2）最大,为0.964,因此将鲇血液的Ca2＋浓度作为其饥饿的评价指标则相对可信。     

水温与光照对瓦氏黄颡鱼幼鱼行为的影响

实验观察了水温和光照强度对水槽中的瓦氏黄颡鱼(Pseudobagrus vachelli)个体行为和群体行为的影响.结果表明:瓦氏黄颡鱼个体对黑白底质具有选择性;当水温为30℃和20℃,水面光照强度低于15 lx时,瓦氏黄颡鱼的游动增加;光照强度高于15 lx,游动减少;光照强度低于5 lx,在白色底质所处的时间减少;水温30℃时,瓦氏黄颡鱼在白色底质所处时间的降幅大于水温20℃的降幅;当光照强度高于5 lx,在白色底质所处的时间趋于平稳;瓦氏黄颡鱼的集群可以分为紧密集群、分散集群、休息集群和游泳集群4种类型;造成休息集群的主要原因是低水温(7.0℃～9.0℃);造成紧密集群的主要原因是较高的光照强度;通常在较弱的光照强度下(1.2～209.0 lx),瓦氏黄颡鱼表现出游泳集群;在微弱的光照强度下(0～1.6 lx)时,表现出分散集群.     

宇佐美曲霉木聚糖酶基因xynⅡ在不同毕赤酵母中的分泌表达

将宇佐美曲霉E001的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPXY-NII,将其经SalⅠ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和KM71,xynⅡ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌PXGL98(Mut+)和PXKL29(Muts)。该木聚糖酶基因在2株毕赤酵母中均实现了分泌表达。同时对工程菌的发酵条件进行了优化,在甲醇诱导下,PXGL98与PXKL29培养物上清液中的酶活力分别可达1156.92 U/mL和1646.03 U/mL。     

植物乳杆菌RS2-2发酵法生产乳酸脱氢酶

筛选到一株产乳酸脱氢酶的植物乳杆菌RS2-2（Lactobacillus plantarum RS2-2）。产酶条件研究表明,以蔗糖为碳源,酵母膏为氮源,起始pH6．5左右,30℃发酵,接种量为10％,产酶量最高。在25L发酵罐放大实验,并通过流加NaOH控制发酵过程中的pH,所产乳酸脱氢酶比活力为18．73U／mg,菌重量为lg／L以上。粗酶液经分离纯化得到成品酶液,比酶活提高了51．7倍,达到1210、7U／mg,总收率为30、2％。用凝胶过滤检测其分子量分布,分子量约为85,000Da,酶纯度为88％。     

木聚糖酶Xyn Ⅱ的D37N突变、表达及酶学性质变化

对来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的木聚糖酶Xyn Ⅱ进行同源建模和序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存在一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关,据此设计了Xyn Ⅱ的D37N定点突变.酵母表达的Xyn ⅡD37N 经纯化后与原酶Xyn Ⅱ(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,Xyn ⅡD37N 的最适pH由4.2升高到5.3,pH稳定范围由3.0～7.5缩减为3.0～5.5,但最适温度和热稳定性基本保持不变.结果证实,木聚糖酶Xyn Ⅱ的第37位Asp与最适pH相关,为进一步的结构与功能研究提供了理论基础.