牛传染性鼻气管炎病毒的形态结构及其在细胞内发生的研究

用负染法和超薄切片法研究了我国首次分离的IBR病毒的形态结构及其在犊牛肾细胞内发育的基本过程。病毒直径为1 60--230nm,成熟病毒由直径为50—60nm的核心、直径为100—110nm的衣壳和囊膜三部分构成。在负染的样品中,可以观察到呈三重对称和二重对称的核壳体及其衣粒的构型,从而推算出病毒衣壳由162个农粒构成。该病毒具有典型疱疹病毒科的发育与成熟方式。此外,它可能与鸭瘟病毒一样,还具有一条细胞质内的发生途径。     

连续4次(每次间隔36h)部分肝切除对大鼠肝ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的影响

在分析了连续 3次 (每次间隔 4h)部分肝切除对肝细胞生化和增殖的影响后 ,本文又以连续 4次 (每次间隔 3 6h)部分肝切除 (shortintervalsuccessivepartialhepatectomy ,SISPH)大鼠为模型 ,分析了SISPH对肝脏酸性磷酸酶 (ACP)、碱性磷酸酶 (AKP)、构成性热休克蛋白 70 /诱导性热休克蛋白 68(HSC70 /HSP68)和增殖细胞核抗原 (PCNA)活性和含量的影响。结果表明 ,第 1次切除肝的左外叶后恢复 3 6h ,ACP和AKP活性及HSC70 /HSP68和PCNA表达量均增加 ;第 2、 3、 4次分别切除左中叶和中叶、右叶、尾状叶 (每次间隔 3 6h)后 ,AP活性和PCNA含量与AKP活性和HSC70 /HSP68含量呈负相关性 ;间隔 3 6h的连续部分肝切除延缓了细胞分化时间。根据上述实验中ACP和AKP在细胞内位置和活性变化推测 :AKP和ACP可能共同参与了细胞的增殖启动 ;PCNA和AKP可能参与了DNA合成和细胞增殖 ;ACP和HSC70 /HSP68可能在蛋白质转运、选择性降解和细胞结构、功能重建中起重要作用。     

HSP70单克隆抗体的制备

利用DEAE 离子交换和ATP 亲和层析法从热休克的大鼠肝脏中分离纯化了热休克蛋白 70 (HSP70 )。用它做抗原免疫小鼠 ,通过分离脾淋巴细胞和细胞融合技术 ,得到了杂交瘤细胞 ;用酶联免疫吸附测定法筛选出了阳性克隆 ;经过多次亚克隆、抗体的大量制备及分离纯化 ,得到了抗HSP70的单克隆抗体。用此一抗和Western免疫印迹技术分析了C6 大鼠神经胶质瘤细胞中HSP70的表达。     

人CD147的克隆表达及其对成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,与肿瘤的生长和浸润有关。为了研究CD147在大肠癌中的作用,利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因,测序发现该基因存在两个碱基突变,其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F。分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统,在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达。Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小,说明原核CD147缺乏糖基化。荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜,表明突变L212F不影响CD147的膜定位。用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响,结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调,而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调,说明糖基化对于CD147活性是必需的,真核系统能够表达具有生物功能的CD147,并且突变L212F不会影响蛋白质的活性。     

注射用转移因子不同生产方法比较

比较从猪脾中提取活性转移因子的不同生产方法,以建立适合产业化的制造工艺。将猪脾匀浆后,分别冻融0、3、5次,再以超滤法或Lawence法提取转移因子。与lawrence法相比,经5次冻融并超滤制备的产品收率高,符合国家标准。匀浆冻融次数对转移因子的收率和质量有一定的影响,超滤法适合于转移因子的大规模生产。     

不同CO_2浓度条件下灰飞虱体内RSV的定量检测

灰飞虱的群体带毒率及体内条纹病毒(rice stripe virus,RSV)的准确检测是预测水稻条纹叶枯病在CO2浓度升高背景下能否大发生的重要参考依据之一。本研究应用quali-fiedRT-PCR(qRT-PCR)测定不同CO2浓度条件下灰飞虱体内的RSV含量。结果表明:在试验的3个CO2浓度梯度(370、470和570μl.L-1)下,470μl.L-1的CO2浓度最适合RSV在灰飞虱体内的增殖,此方法与现已普遍应用的酶联免疫检测法(enzyme-linkedi mmu-nosorbnent assay,ELISA)和斑点免疫结合检测法(dotimmunobinding assay,DIBA)相比,具有快速、灵敏和特异性强的优点,且不需制备抗血清,适于普及应用。     

黄瓜 CsCCD7 基因的克隆及表达研究

使用RACE技术克隆黄瓜(Cucumis sativus L.)腋芽生长抑制基因并进行生物信息学和半定量RT-PCR分析。结果表明:从黄瓜腋芽中成功克隆了拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtCCD7/MAX3同源基因,命名为CsCCD7(GenBank登录号:HQ005419);CsCCD7基因序列含有1665 bp的开放阅读框(ORF),编码554个氨基酸;编码的蛋白质命名为CsCCD7,隶属于CCD蛋白家族成员,蛋白质的二级结构和三级结构预测显示其富含β折叠和β转角以及无规卷曲,是不稳定蛋白。CsCCD7在根中的表达量最高,在多分枝、矮化黄瓜D0462中的表达量最低,这说明CsCCD7蛋白可能参与调控植物分枝信号的转导及分枝相关基因的表达调控。     

黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建

以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8.该质粒通过E.coil ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接舍转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3.通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点.以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高迭1 000 μg/mL以上.     

蝎毒耐热蛋白对MPTP诱导的帕金森病小鼠脑内小胶质细胞的影响

目的：进一步探讨蝎毒耐热蛋白（SVHRP）改善MPTP（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）小鼠伴有空间学习记忆障碍的机制。方法：给予C57BL／6小鼠颈部皮下注射MPTP（20mg／kg）,连续8d,同时设立SVHRP治疗纽,观察小胶质细胞免疫反应活性的改变。结果：与盐水对照组相比,MPTP小鼠脑区OX-42免疫反应阳性小胶质细胞免疫反应活性明显增强。模型给药组与模型组相比OX-42免疫反应阳性小胶质细胞免疫反应活性明显降低。结论：SVHRP可以抑制MPTP诱发的小鼠脑内小胶质细胞的激活以减轻脑内神经炎症。     

高冰草中高分子量麦谷蛋白亚基的编码基因

通过SDS-PAGE法分析了高冰草(Agropyron elongatum(Host)Nevski)种子麦谷蛋白亚基,发现高冰草的麦谷蛋白亚基种类比普通小麦更加丰富.通过基因组PCR法用高分子量麦谷蛋白亚基基因的特异引物从高冰草核基因组中分离出了7条麦谷蛋白亚基的全编码序列,分别命名为AgeloGl～AgeloG7.其中的5条已进行全序列测定,对AgeloGl和AgeloG4进行了末端测序.尽管其中的4条基因的编码序列(AgeloG4,AgeloG5,AgeloG6和AgeloG7)小于1.8kb,但是对从克隆到的序列推导出的氨基酸序列与已经发表的小麦高分子量麦谷蛋白亚基序列进行对比分析发现,这些亚基与来自小麦的高分子量麦谷蛋白亚基具有很高的同源性.并且对信号肽、N-、C-末端的氨基酸序列分析显示,这7条序列编码的亚基皆为y-型亚基.用5条全部测序的编码序列与普通小麦的A、B、D、粗山羊草的D、圆柱山羊草的C、伞穗山羊草的U、黑麦的R染色体的编码高分子量麦谷蛋白的序列进行了聚类分析.表明,AgeloG2与小麦lDy,AgeloG3与小麦1By,AgeloG5、AgeloG6和AgeloG7与小麦1Ay在起源和进化上有较高的相似性.