SSR标记对不同黄子甘蓝型油菜亲本材料的遗传分析

杂交育种中,亲本选配是育种成败的关键.本研究以重庆市油菜工程技术研究中心提供的180份甘蓝型黄子油菜亲本种质为材料,应用分布于不同连锁群的60对SSR标记进行了分析,共检测出308个标记位点,每对引物在不同素本材料之间的等位基因数在1～11个之间,平均位点为5.1个.其中多态性位点207个,多态率达67.2％.对SSR扩增结果进行UPGMA分析,在遗传距离0.566处,180个品种(系)分为3个类群,聚类结果与种质来源比较一致,本研究为甘蓝型油菜黄子杂交育种和优势组合的选配提供了理论依据.     

一株产生糖脂菌种的初步鉴定及发酵条件的考察

对从炼油厂附近的油污土样中分离纯化出的 1株杆菌进行了鉴定。该细菌为革兰氏阳性 ,有芽孢 ,可运动、不抗酸 ,能发酵豆油、色拉油形成稳定的乳化液。其细胞形态、培养特征和生理生化特性 ,基本上与凝结芽孢杆菌一致。研究了该菌株生产糖脂的摇瓶发酵工艺条件 ,进行了 10L罐发酵实验 ,糖脂产量达到 7.0 73g/L。     

亚麻脱胶新工艺的初步研究

研究了温水浸渍亚麻脱胶过程中的产果胶酶的微生物数量、种类和果胶酶活力变化规律,分离筛选出了产果胶酶活力较高的厌氧和兼性厌氧菌各l株,研究了这2个菌株的种子培养条件,用正交实验法优化了接入厌氧和兼性厌氧菌的亚麻脱胶工艺.实验结果表明亚麻脱胶周期缩短35%,可改善麻纤维质量.     

玉米蛋白粉DNA提取方法比较研究

饲料样本本身的复杂性给进出口产品转基因（genetically modified,GM）成分的检测工作带来了巨大的压力和挑战。玉米蛋白粉主要包含蛋白质、淀粉和脂类等成分,从中提取高品质的DNA比较困难,而高品质的DNA是转基因检测研究的关键,能够大大降低进出口检验中的“假阴性”结果。采用市售主流品牌常用的7种试剂盒（Promega公司、Biotecon公司、天根生化科技有限公司、Invitrogen公司、Qiagen公司、TaKaRa公司）、CTAB法以及改良SDS?CTAB法提取玉米蛋白粉中的DNA。通过对玉米内源基因进行实时荧光PCR检测,发现改良SDS?CTAB法提取的玉米蛋白粉DNA质量明显优于其他方法,改良SDS?CTAB法内源基因zSSIIb的C_t值为28.14,较CTAB法提高了27%。研究建立的改良SDS?CTAB法在国内外尚属首次应用于饲料转基因产品中,并对7批次实验室送检样品进行转基因成分检测,成功检出2批次阳性样品。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清NE、α1-AT、CRP、PCT的表达及与肺功能的关系研究

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)的表达水平及其与肺功能的相关性。方法:选取2013年3月-2015年6月河北北方学院附属第一医院呼吸内科收治的COPD患者87例作为研究对象,其中急性加重期(急性组)患者49例,稳定期(稳定组)患者38例,另选取同时期在本院进行健康体检的志愿者30例为对照组,检测并对比急性组、稳定组和对照组受试者的血清NE、α1-AT、CRP、PCT水平及肺功能指标,并分析COPD患者NE、α1-AT、CRP、PCT水平与肺功能的相关性。结果:与对照组对比,急性组与稳定组患者的NE、CRP、PCT水平均明显升高,α1-AT水平明显降低(P0.05),且急性组患者的NE、CRP、PCT水平高于稳定组,α1-AT水平低于稳定组(P0.05);急性组与稳定组患者的第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)均低于对照组,且急性组FEV1%、FEV1/FVC低于稳定组(P0.05);经Spearman相关性分析显示,NE、CRP、PCT与FEV1%及FEV1/FVC均呈负相关,α1-AT与FEV1%及FEV1/FVC呈正相关(P0.05)。结论:COPD患者血清NE、CRP、PCT表达水平均明显升高,α1-AT表达水平明显降低,且NE、α1-AT、CRP、PCT均与肺功能存在一定相关性,加强对此类指标的监测有助于对COPD患者病情判断及治疗指导。     

亚麻脱胶菌种的选育及脱胶过程的初步研究

从沤麻主生物期的水中分离产果胶酶的菌株经初筛、复筛获得了三株专性厌氧细菌,初步鉴定为费氏芽孢杆菌,对其亚麻脱胶性能进行了初步研究,确定人工加菌沤麻的最适工艺条件为：加菌量2％,加菌时间：沤麻进入主生物期零时,菌株A优于其它菌株．结果表明：采用上述工艺进行沤麻实验,可缩短沤麻时间30％,并可提高麻纤维质量。     

蛹虫草无性型深层培养液中纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究

【目的】确立蛹拟青霉深层培养液中高纯度、高纤溶活性纤溶酶的分离纯化方法并测定其酶学性质。【方法】采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对蛹拟青霉纤溶酶进行分离。用Lowry法测定蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,SDS-PAGE鉴定其纯度并确定其分子量,IEF法测定其等电点。【结果】研究发现,以蔗糖和豆饼为培养基主要基质时,蛹拟青霉深层培养可以产生至少两种纤溶酶。提纯后的纤溶酶Ⅱ比活力达到800.46 U/mg,总纯化倍数为30.07倍。纤溶酶Ⅱ的相对分子量和等电点分别为32 kD和9.3±0.2。纤溶酶Ⅱ是一种糖蛋白,总含糖量为0.98%(W/V)。该酶可以顺次降解人血纤维蛋白(原)的α、β和γ链。其最适作用pH及温度分别为7.4和41°C。Aprotinine与PMSF对该纤溶酶的活性完全抑制,推测此纤溶酶可能是一种丝氨酸蛋白酶。【结论】单一的高纤溶活性纤溶酶的获得和酶学性质的确定,为该酶开发成为新型溶栓药物提供了理论依据。     

纤溶酶产生菌中华根霉12~#的诱变选育

以产纤溶酶菌中华根霉12~#为出发菌株,以SDS为抗性因子,紫外线为诱变剂,通过液体发酵的方式筛选高产菌株。共得到48株SDS抗性突变株,命名为LH-系列。经过筛选,得到了1株遗传稳定、酶活力提高了120%左右的高产菌株LH-45,以及2株具有潜在高产能力的突变株LH-15和LH-28。     

冰冻切片制作体会及常见问题

目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高切片质量,确保实验结果科学性、稳定性及可靠性.方法:从标本的取材、制片以及固定等多个环节阐述冰冻切片常见问题.结果:通过调整切片机的相应设置并且在冰冻切片多个环节中采取了相应措施,使切片更完整,厚薄均匀,无脱片和冰晶空洞现象产生,切片质量优良.结论:制作出高质量的冰冻切片需在取材处理、切片、固定等诸多环节上精益求精,这对冰冻切片这一专业性很强的实验技术的质控有着重大意义.     

根霉12#发酵产生纤溶酶的酶学性质

溶栓疗法是血栓性疾病安全有效的治疗手段 ,开发新型纤溶酶具有实际应用意义。分离自南方小酒药的根霉 12^#以豆粕和麸皮为原料可产生纤溶酶。已采用盐析 ,疏水层析、离子交换层析和凝胶层析方法对纤溶酶分离提纯。提纯的纤溶酶比活力 2143u/mg(尿激酶单位 ) ,有直接溶解血栓和激活纤溶酶原的双重溶栓作用 ,降解纤维蛋白α、β和γ肽链速度快 ;最适作用温度 4 5℃ ,适宜作用pH范围 6.8～8.8;等电聚焦方法测定该酶等电点 8.5± 0.1;只分解生色底物N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA ,其米氏常数K_m 为 0.23mmol/L ,酶转换数K_cat为 16.36s^-1;Molish实验和甲苯胺蓝实验均证明该酶为糖蛋白 ,地衣酚_硫酸法测得该酶含糖量 470% ;EDTA、PMSF、PCMB对该纤溶酶有抑制作用 ,说明活性中心含有巯基、金属和丝氨酸 ;N端12个氨基酸序列为NH2-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly,与其它生物来源的纤溶酶相比较没有同源性。根霉 12^#产生的纤溶酶为新型纤溶酶,有希望开发成溶栓药物。