DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定

将DNA错配修复基因mutS（2.56kb）克隆于分泌型原核表达载体pET32a（+）上,以N端融合6个组氨酸的形式在E.coliAD494(DE3) 中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的35％左右,且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子（Ni²⁺）配体亲和层析柱纯化目的蛋白,其纯度为90％以上。与含有错配碱基DNA双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性。     

日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫cDNA文库的构建

用TRIZOL试剂盒分别提取日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第一链cDNA,完成第二链cDNA合成后,凝胶电泳回收500bp以上的片段并过柱纯化后,与载体λZipLox连接。体外包装后分别得到雌、雄成虫cDNA噬菌体表达文库。经测定雌、雄文库容量分别为3．74×106、3．28×106,重组比率均在96％以上,插入片段长度多在1kb左右。通过PCR技术,我们从文库中钓取到EGP、23kD膜蛋白、Actin和GCP的cDNA,其中GCP基因为低丰度表达基因。各项指标表明,我们成功构建了高质量的cDNA文库,可作为研究雌雄成虫基因差异及筛选保护性抗原基因的重要资源。     

MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制

为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础.     

扣针蛋白-5与疾病

扣针蛋白-5(fibulin-5,FBLN-5)是一个胞外基质糖蛋白,广泛分布于富含弹性蛋白的组织中,可通过与其它胞外蛋白相互作用而调节基质的结构.近期研究发现,该蛋白是一个内源性的血管生成抑制剂,在血管发育中发挥了重要的作用.同时,扣针蛋白-5与一些肿瘤的增殖、转移和侵袭等相关,其基因突变则会导致遗传性疾病的发生.本文就扣针蛋白-5与血管生成、血管发育、肿瘤及遗传性疾病的关系及当前的研究进展进行综述.     

重组福安泰-03抑制人脐静脉血管内皮细胞的迁移和增殖

研究重组福安泰-03(recombinant Fuantai-03,rFAT-03)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移和增殖的影响.聚碳酸酯膜小室趋化运动模型(transwell model)检测rFAT-03对HUVECs迁移能力的影响;MTT法检测rFAT-03对HUVECs和多种人癌细胞生长的影响;荧光显微镜观察rFAT-03作用下HUVECs的形态变化;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-fluorescein isothiocyanate,annexinV-FITC)双染检测rFAT-03对HUVECs早期凋亡的影响;流式细胞术分析rFAT-03对HUVECs周期及凋亡的影响;Western印迹检查rFAT-03对HUVECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bax和Bcl-2表达的影响.结果显示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,其抑制效果与剂量和作用时间相关.0.20mg/mL恩度(endostar),0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs24h,对细胞迁移的抑制率分别为32.0%、32.6%、57.1%(P0.01).0.20mg/mL恩度,0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs72h,其对细胞生长的抑制率分别为40.9%、63.7%、69.3%、87.0%.但rFAT-03对多种人癌细胞株的生长却无明显影响.rFAT-03处理HUVECs24h,细胞的早期凋亡率增加(P0.05).rFAT-03阻滞HUVECs于G0/G1期,并呈现典型的凋亡峰.终浓度为0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用于HUVECs24h,G0/G1期细胞指数分别为63.4%、67.5%和75.7%(对照组为62.1%),凋亡指数分别为4.2%、8.5%和10.3%.rFAT-03下调HUVECs的VEGF和抑调亡基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因Bax的表达,其效果与剂量相关.结果提示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,诱导其凋亡,它的这些作用与其下调VEGF、Bcl-2表达,上调Bax表达密切相关.     

聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原

对由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达的多聚亚基蛋白HBsAg在离子交换层析过程中容易因亚基解离而导致蛋白解聚和丧失生物活性的难题,实验中选择聚乙二醇（PEG）作为保护剂伴随式（Polyethylene Glycol-Accompanied）离子交换层析分离纯化HBsAg。实验表明,在流动相中加入1% PEG10000(W/V)作为纯化伴侣, HBsAg的回收率由55% 左右提高到80%以上,纯化倍数基本保持在12左右。对纯化产物进行SDS_PAGE分析表明,1% PEG10000的纯化伴侣伴随式离子交换层析能全部保留HBsAg的糖基化蛋白单体（27kD和30kD）,高效液相色谱联用多角度激光散射(High Performance Size Exclusion Chromatography_Multiangle Laser Light Scattering, HPSEC-MALLS )进一步分析阐明了PEG能促使HBsAg颗粒尺寸分布更均一,结构更接近天然乙肝表面抗原。     

甲状旁腺激素和转铁蛋白N端半分子融合蛋白在毕赤酵母中的表达

用重叠PCR技术将PTH（parathyroid hormone, 甲状旁腺激素）基因与TFN（transferrin N_terminal half_molecule, 转铁蛋白N端半分子）基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经 SP Sepharose F F阳离子交换层析、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析纯化获得了纯度大于95％的PTH_TFN样品。Western blot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。     

中国四川凤仙花属 一新种——凉山凤仙花

描述了四川凤仙花属一新种,凉山凤仙花。新种与黄麻叶凤仙花近缘,主要区别：花序2～6花,均垂于叶片下,囊状的唇瓣肿胀,在中部明显弯曲,翼瓣基部裂片先端长渐尖或尾尖,上部裂片背腹约120°～180°扭转。     

广西常绿阔叶林分类系统及特点

常绿阔叶林是广西分布最广泛、最为复杂多样的植被类型.遵循《中国植被》一书的植被分类原则,并参考宋永昌先生的《中国常绿阔叶林分类试行方案》.根据高级单位以生态外貌、中级单位以优势度类型、低级单位以特征种组的分类原则,将广西常绿阔叶林划分出5个植被亚型、11个群系组和102个群系.在5个植被亚型中,典型常绿阔叶林和季风常绿...     

珍稀濒危植物银鹊树体细胞胚时期同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对银鹊树体细胞胚胎发生过程中的酯酶(EST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和淀粉酶(AMY)进行了同工酶分析.结果表明:球形胚时期的EST、POD、SOD、AMY同工酶活性最强;在体细胞胚胎形态建成过程中,SOD同工酶有新酶的合成,而POD同工酶则表现为活性表达增加并有新酶合...