血管紧张素Ⅱ促进内皮细胞凋亡和NOX4表达

目的分析高浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）时细胞内活性氧（ROS）、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化。方法倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;免疫组化法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;RT—PCR检测HUVECs中NOX4的表达;流式细胞仪检测各组细胞内ROS生成量和细胞凋亡率,Hoechst染色分析细胞凋亡。结果高AngⅡ刺激HUVECs时,NOX4mRNA表达上调,细胞内ROS生成增加,细胞凋亡增加。结论高AngⅡ上调HUVCEs内NOX4mR—NA表达并促进细胞内ROS生成和细胞凋亡。     

siRNA下调FLAP的表达诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡

目的研究5-脂氧合酶激活蛋白（5’-lipoxygenase activating protein,FLAP或ALOXSAP）的表达抑制对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的诱导作用。方法通过siRNA抑制胰腺癌细胞FLAP的表达,用流式细胞仪检测Annexin—V标记的凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达和裂解水平。结果FLAPsiRNA有效抑制了胰腺癌细胞PANC-1中FLAP的表达。转染了FLAPsiRNA的胰腺癌细胞出现凋亡。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素C、caspase-3水平逐渐增高。结论FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和caspase-3途径发生凋亡。     

野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

IL-6通过Sirt1/p53/caspase-3通路介导胰岛β细胞凋亡

目的 探讨炎性因子IL-6是否通过Sirt1/p53/caspase-3通路介导胰岛β细胞凋亡.方法 Western 印迹检测Sirt1在小鼠各组织器官和胰岛β细胞系NIT-1细胞中的表达,免疫荧光法检测Sirt1在细胞中的定位.IL-6（10 ng/ml）处理NIT-1细胞48 h,Hoechst3334染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞内Sirt1、P53、乙酰化P53（acety-P53）、caspase-3和cleaved caspase-3的水平变化.结果 Sirt1在小鼠各组织器官和胰岛β细胞中均有表达,主要定位于细胞核.IL-6处理NIT-1细胞后,伴随Sirt1表达的显著减少,acety-P53明显上调,p53/caspase-3通路活化,NIT-1细胞凋亡增加.结论 IL-6通过下调Sirt1进而激活p53/caspase-3信号通路引起胰岛β细胞凋亡.     

2型糖尿病大鼠模型制备的影响因素及其特点

目的探讨高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)制备2型糖尿病大鼠模型的造模方法和影响因素。方法4周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠45只随机分为三组:(1)正常组(normal control,NC),9只,普通饲料喂养。(2)高脂组(high fat,HF),9只,高脂饲料喂养。(3)糖尿病模型组,根据高脂喂养时间差异和STZ剂量不同设计了3种模型制备方法:A组,9只,高脂喂养满4周,注射STZ 30 mg/kg;B组,9只,高脂喂养满8周,注射STZ 20 mg/kg;C组,9只,高脂喂养满8周,注射STZ 30 mg/kg。所有大鼠于48h、2周和4周后行灌胃葡萄糖耐量试验(OGTT)评价成模率和血糖波动情况。实验结束时测定血清胰岛素、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC),RT-PCR测定胰腺内胰岛素mRNA表达水平,免疫组化染色观察胰岛细胞形态学特点,用彩色图像分析系统进行定量比较。结果糖尿病C组血糖显著升高,成模后2周血糖下降,4周后又上升到基线水平,成模率100%。糖尿病A组、B组在4周后血糖逐渐降低到接近正常水平,成模率分别为55.6%、11.1%。C组与HF组相比,胰岛素敏感性显著下降(P<0.01)。β细胞内胰岛素水平下降39.3%(P<0.01),胰岛内β细胞所占比例下降了79.2%(P<0.01),胰腺内胰岛素mRNA表达水平减少19.2%(P<0.01),α细胞升高了1倍(P<0.01)。结论高脂喂养8周后腹腔注射低剂量STZ(30 mg/kg)制备的2型糖尿病大鼠模型,成模率高,模型稳定。     

人血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文应用超迷离心,盐酸胍处理、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析分离纯化了人血清载脂蛋白AⅡ。经等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳等鉴定,其纯度达到电泳纯和免疫纯。以此载脂蛋白AⅡ纯品免疫家兔产生的抗血清,效价较高,特异性强,与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E和白蛋白没有交叉反应。     

粪乳铁蛋白和C 反应蛋白对溃疡性结肠炎的评价

目的:研究粪乳铁蛋白(1actoferrin,LF)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对溃疡性结肠炎的严重程度、活动性和对治疗反应的评价作用。方法:选取我院2009-2010年43例特发性溃疡性结肠炎患者,同时进行对照平行研究。对患者进行临床评估、内镜和病理检查,了解疾病活动性、严重程度,并检测LF、CRP在治疗前后的水平。结果:与对照组相比较,病例组生物学标志都升高(P=0.000),特发性溃疡性结肠炎严重组粪LF和CRP更高,治疗后,生物学指标下降到与Mayo分数齐平,ROC曲线下面积分别为0.953和0.721,其灵敏度和特异性分别为:LF(90.7%,100%)和CRP(44.2%,100%)。结论:在对特发性溃疡性结肠炎的活动性、严重程度和对治疗反应的评价中,粪LF和CRP是非常有用的生物学指标。     

综述: 血管衰老及其机制

血管老化是一个古老而又年轻的课题.本文综述了血管衰老的主要结构特征、功能改变及其机制的新近研究进展,重点就血管基质变化、内皮细胞衰老/功能失调、内皮祖细胞衰竭以及细胞间通讯等方面进行了阐述.     

抗VacA+CagA+幽门螺杆菌IgY的抗感染作用研究

为研究抗VacA CagA 幽门螺杆菌(Hp)IgY的抗感染作用,以VacA CagA Hp为抗原免疫蛋鸡,聚乙二醇法和水稀释法从鸡卵黄中提取抗-VacA CagA Hp-IgY,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定IgY抗体效价。建立胃腔感染VacA CagAHp的昆明系小鼠模型,观察抗-VacA CagA Hp-IgY对小鼠胃腔感染VacA CagA Hp的防治效果。ELISA法测定IgY效价均为1∶20,480;抗-VacA CagA Hp-IgY防治小鼠胃腔感染VacA CagAHp效果较理想,IgY高、中剂量组效果优于阳性对照组(P<0.05);低剂量组效果等同于阳性对照组(P>0.05)。抗-VacA CagA Hp-IgY较好的体内抗感染作用,提示该IgY有望成为较理想的治疗VacA CagA Hp感染的生物制剂。     

Rb、P53调控平滑肌细胞c-fos和c-jun基因表达

为研究外源性Rb和P₅₃基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P₅₃基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P₅₃基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.