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益智ISSR-PCR反应体系建立与优化 总被引:7,自引:1,他引:6
目的:获得适合的益智ISSR-PCR扩增反应体系。方法:利用正交设计L46(4^5)和单因素试验对益智ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg^2+,模板DNA.dNTPs,引物)在4个水平上进行优化试验,将二者所得结果进行综合比较分析。结果:最终扶得益智ISSR-PCR反应的最优体系(20μl)为:模板DNA 100ng,Mg^2+ 3.0mmol/L,引物0.8μmol/L,dNTPs0.25mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U。最后,对益智ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为50℃。结论:这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究分析益智遗传多样性奠定基础。 相似文献