二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,进行原核表达。表达产物经阳离子层析柱和抗Etag亲和层析柱分离纯化,还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FCM)检测生物学活性。将改造前后的两种抗体分别置37oC含0.2%人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种把抗原的结合能力。基因重组质粒经测序证实序列正确。向抗Pgp轻重链引入突变的diabody(dsPgp-diabody)在原核表达系统中,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键不能配对。而向抗CD3轻重链引入突变的diabody(dsCD3-diabody)能够在原核表达系统中进行可溶性表达,二硫键能够正确配对。并且与改造前的diabody相比,dsCD3-diabody的抗原结合特异性...     

抗HIV—1活性的大环多胺类化合物与RNA的识别作用及其对细胞凋亡的影响

研究了具有抗HIV－1活性的大环多胺类化合物与RNA的识别作用,以及其对cos-7细胞凋亡的影响,以进一步探讨其抗HIV－1的作用机理。实验采用琼脂糖凝胶电泳方法。观察化合物与RNA的识别作用。通过流式细胞计数法探讨其对cos-7细胞凋亡的影响。运用计算机分子模型,从理论上Docking计算化合物与TAR RNA结合的可能性。结果表明,大环多胺类化合物MP－1、MP－2和MP－3不仅具有断裂RNA的作用,并可抑制Tat-RNA的相互作用,还可影响cos-7细胞亚二倍体的含量;理论化学计算数据与实验结果基本一致,这一结果提示合物的抗HIV－1活性可能通过作用于病毒基因组RNA而发挥作用,是多靶作用的结果。     

关于微生物修复有机污染土壤的探究

微生物修复是一种利用自然或人工方式培育微生物群落，通过提高其代谢能力来去除毒性污染物或将其转化为无毒物质的一种生物修复技术。有机土壤污染是较为普遍的一种土壤污染，因此应选用恰当的微生物修复方法对其进行修复。故开展微生物修复有机污染土壤的研究很有必要。     

基于灰色关联度的海坛岛野生灌木资源综合评价

以海坛岛102种野生灌木为研究对象, 采用灰色关联度分析法对其进行了综合评价, 根据关联度大小划分了开发利用等级。旨在合理开发利用海坛岛野生灌木资源, 为滨海城市的园林绿化材料提供参考。结果表明: 1)海坛岛野生灌木资源种类丰富, 分布于41科72属102种, 桑科Moraceae为优势科, 榕属Ficus为优势属; 2)海坛岛野生灌木区系地理成分多样, 热带成分丰富; 3)该类资源适应性强, 原生境以海岸林、山坡灌丛为主(59.80%); 有63.73%的灌木耐干旱、耐贫瘠, 部分耐盐碱(51.96%); 灌木的观赏价值较高, 在观赏部位、观赏期、观赏色彩指标得分均≥2; 4)参评的102种野生灌木中有54 种与理想种关联度≥0.7, 其中海桐(Pittosporum tobira)、雀梅藤(Sageretia thea)、车桑子(Dodonaea viscosa)、草海桐(Scaevola sericea)、滨柃(Eurya emarginata)、柞木(Xylosma racemosum)、黑面神(Breynia fruticosa)等17种野生灌木综合评价高(关联度≥0.8), 可优先应用于园林绿化, 并引种推广。