基于活性氧自由基水平评价蔬菜重金属污染

蔬菜细胞中活性氧自由基水平处于一定范围内,而蔬菜一旦受重金属污染,活性氧自由基水平将发生改变.本文采用2＇,7＇-二氯荧光黄双乙酸酯标记蔬菜叶片细胞内活性氧自由基,激光扫描共聚焦显微镜技术分析蔬菜受重金属污染后活性氧自由基荧光强度的变化.结果表明,不同浓度镉、铅、汞离子（0、25、50、100 mg/L）作用芹菜、菠菜和油菜后,蔬菜叶片中活性氧自由基荧光强度均呈上升趋势,基于活性氧自由基水平的升高可判断蔬菜是否受重金属污染.本研究建立了基于活性氧自由基水平的蔬菜重金属污染评价方法,进一步为蔬菜的监管提供方法学和技术理论基础.     

葛根素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞分泌TGF-β1的影响

目的:了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养人腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组(葛根素终浓度为50μg/mL)、B组(葛根素终浓度为100μg/mL)、C组(葛根素终浓度为200μg/mL)五组观察.检测各组上清液中TGF-β1的含量并比较.结果:腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降.结论:葛根素对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞分泌致纤维化因子TGF-β1具有抑制作用.     

促红细胞生成素对腹膜间皮细胞凋亡的保护作用

目的:观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对腹膜间皮细胞(PMCs)的抗凋亡作用及其机制.方法:体外分离小鼠PMCs并给予rHuEPO干预,观察起对JAK2,STAT5,ERK1/2和P38磷酸化的影响.体内试验采用5000U/kg的rHuEPO顸处理后再予以4.25%的腹透液腹腔内注射后4小时,取小鼠脏层腹膜组织检测活性凋亡蛋白酶-3表达.结果:小鼠PMCs上表达EPO受体mRNA和蛋白,5 U/mL的rHuEPO可诱导PMCs的JAK2,STAT5和ERK1/2磷酸化上调.rHuEPO预处理1小时后再予腹透液处理的PMCs较单独予腹透液处理的PMCs,凋亡蛋白酶-3活化降低,DNA碎裂减少.rHuEPO干预可提高ERK1/2磷酸化水平而抑制腹透液诱导的P38磷酸化.特异性的ERK活化抑制剂PD98059可完全阻断rHuEPO的保护作用.通过检测凋亡蛋白酶-3证实rHuEPO可在小鼠体内降低腹透液引起的PMCs凋亡水平.结论:本研究为rHuEPO在腹透临床治疗中的临床应用开辟了新途径,rHuEPO可通过ERK1/2依赖途径减少PMCs的凋亡发挥保护性作用.rHuEPO及其衍生物可能成为维护腹膜完整性的新治疗手段.     

利用Tn5型转座突变系统筛选高产阿维菌素菌株*

目的: 转座突变技术是发现新功能基因和获得高产天然产物菌株的一种有效策略。通过理性设计和构建Tn5型转座突变系统,并将其应用于阿维链霉菌,筛选高产阿维菌素的工程菌株。方法: 在转座突变载体pUCTN转座插入片段的上游和下游分别引入链霉菌常用的强启动子kasOp*和P21,强化插入位置上游和下游基因的转录表达;在插入片段两端分别添加双向转录终止子T1和T2,有效终止插入序列两端靶基因的转录,引入强启动子和终止子的目的在于增强对转座突变株生理代谢活动的扰动。结果: 通过优化供体菌和受体菌的比例,转座效率显著提高。随机选择500株转座突变株进行发酵和阿维菌素产量测试,筛选到3株突变株的阿维菌素产量明显高于出发菌株产量的50%以上。结论: Tn5转座突变系统为研究阿维链霉菌的基因功能和生理代谢提供了有效的分子遗传工具。     

黄芪对白介素1β诱导的大鼠系膜细胞增殖和细胞外基质产生的影响

目的:观察黄芪(Astragalus Membranaceus,AM)注射剂对5/6肾切除大鼠模型的疗效,及体外对系膜细胞(Mesangial cells,MCs)增殖和细胞外基质(Intracellular Matrix,ECM)产生的影响。方法:建立5/6肾切除大鼠模型后,将大鼠分为四组:对照组、未治疗组、低剂量/高剂量AM治疗组。观察比较16周后各组大鼠肾功能和尿蛋白排泄量情况。体外以白介素1β(IL-1β)作为刺激物,诱导MCs增殖,给予不同剂量AM干预。二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测MCs增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中纤连蛋白(fibronectin)含量,RT-PCR检测细胞p38 mRNA表达,Western免疫印迹法检测胶原Ⅳ、总p38MAPK、磷酸化p38MAPK、磷酸化MKK3/MKK6、磷酸化MKK4等蛋白水平。结果:在体外AM可显著抑制IL-1β诱导的MCs增殖和阻止细胞进入合成周期,显著降低fibronectin、胶原Ⅳ产生,磷酸化p38蛋白和磷酸化MKK3/MKK6的表达显著受抑;在体内AM治疗能显著改善5/6肾切除大鼠的肾功能情况,降低蛋白尿排泄量,延缓肾功能恶化。结论:AM治疗可通过抑制磷酸化MKK3/6和磷酸化p38 MAPK蛋白的表达,发挥抑制IL-1β诱导的MCs增殖作用,能抑制MCs的ECM积聚,有效的治疗进展性肾脏病,为慢性肾纤维化提供了有前景的治疗策略。     

奥美拉唑联合生长抑素对老年重症胰腺炎腹内压及肠道粘膜屏障功能的影响

目的:探讨奥美拉唑联合生长抑素对老年重症胰腺炎腹内压及肠道粘膜屏障功能的影响。方法:选择82例我院收治的高龄重症胰腺炎患者,分为研究组48例,对照组34例,其中对照组行基础治疗,研究组在对照组基础上行奥美拉唑联合生长抑素进行治疗。分析并对比两组患者临床疗效、肠道粘膜屏障功能以及症状指标。结果:(1)研究组患者临床疗效总有效率明显优于对照组,差异具有统计学意义(P=0.005);(2)治疗后,两组患者D-乳糖及二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)水平明显比治疗前低,差异具有统计学意义(均P0.001);且研究组患者治疗后D-乳糖及DAO水平明显比对照组低,差异具有统计学意义(均P0.001);(3)治疗后,研究组患者腹痛腹胀缓解时间,肠道恢复时间,住院时间及血淀粉酶指数均显著优于对照组,差异具有统计学意义(均P0.001);(4)两组患者治疗后腹内高压显著低于治疗前,差异具有统计学意义(均P0.001);且研究组患者治疗后腹内高压明显较对照组低,差异具有统计学意义(均P0.001)与文献雷同。结论:联合奥美拉唑以及生长抑素对老年重症胰腺炎患者能纠正患者腹内高压并改善患者肠道粘膜屏障功能,值得临床借鉴和推广。     

HBV-DNA试剂盒检测下限及线性范围下限精密度的性能评估

针对某厂家乙型肝炎病毒核酸（Hepatitis B virus nucleic acid,HBV-DNA）定量测定试剂盒声明的检测下限及线性范围下限的批内精密度进行补充评估，以保证检验结果的可重复性以及检验报告的准确性。参照CNASGL037《临床化学定量检验程序性能验证指南》、CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》以及中华人民共和国医药行业标准YY/T 1182-2010《核酸扩增检测用试剂（盒）》，基于ABI STEPONE PLUS实时荧光定量PCR仪检测某厂家HBV-DNA定量测定试剂盒声明的检测下限浓度（30 IU/mL）和线性范围下限浓度（100 IU/mL）的临床血清样本，进行相关性能评估。本次评估结果显示检测下限浓度为50 IU/mL(20次检测结果检出率≥90%)，线性范围内最低检测浓度水平为300 IU/mL（变异系数CV<5%），与某厂家HBV-DNA定量测定试剂盒申明的检测下限不相符，批内CV<5%不能覆盖整个线性范围，故本实验室根据评估结论完善了HBV-DNA定量测定结果的审核规则，以保证检验结果的可重复性以及检验报告的准确性，为临床...