淫羊藿苷促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化活性强于蛇床子素

比较研究蛇床子素与淫羊藿苷处理对体外培养的大鼠骨髓间充质细胞(rat bone marrow stromal cell, rBMSC)成骨性分化的影响.从体外分离培养的大鼠骨髓间充质细胞,筛选出最佳的蛇床子素和淫羊藿苷处理的浓度为1×10-5 mol/L, 然后用最佳的浓度对体外培养的大鼠骨髓间充质细胞进行药物干预;在药物干预后的第3、6、9、12和15 d后测定碱性磷酸酶活性（alkaline phosphatase,ALP）和钙含量;第12 d 进行钙化结节茜素红染色;第12 h、24 h、48 h、72 h和96 h 对OXS、Runx-2、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和collagen-I mRNA 表达水平进行real-time RT-PCR检测.结果显示,浓度为1×10-5 mol/L蛇床子素和淫羊藿苷干预均可提高体外培养的骨髓间充质细胞ALP活性,增加Ca含量,提高Runx、OXS、BMP-2和collagen-1 mRNA的表达水平.同时,淫羊藿苷在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化活性强于蛇床子素.     

施氮对空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)和莲子草(Alternanthera sessilis)种间关系的影响

自然界的氮素释放总是呈现出空间和时间上的异质性,但关于异质性氮释放对于入侵植物和本地植物种间关系影响的研究相对较少。将入侵植物空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)和同属本地植物莲子草(Alternanthera sessilis)分别进行单种种植(12株,无种间竞争)和混种种植(每种6株,有种间竞争),模拟大气氮湿沉降设置由两种不同施氮总量(15g N m~(-2)a~(-1)和30g N m~(-2)a~(-1))和两种不同施氮频率(每5天1次和每15天1次)交叉组成的4种施氮处理,并以不施氮为对照。施氮总量的增加显著促进了两种植物的生长,但对两种植物的种间竞争关系没有显著影响。施氮频率对两种植物的生长以及种间竞争关系都没有显著影响。两种植物在面对竞争时表现出不同的生物量分配策略,空心莲子草将更多的生物量分配到茎,而莲子草将更多的生物量分配到根。在全球变化的背景下,大气氮湿沉降可能会改变两种植物的种群结构和动态,但可能对这两种植物的种间关系影响较小。     

脉冲电磁场促进大鼠成骨细胞成熟与矿化依赖于NO/cGMP信号途径

脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields, PEMFs)能够促进大鼠成骨细胞（rat osteoblast cells, ROB）成熟矿化,但是其作用机制并不明确。本实验主要研究PEMFs促进大鼠成骨细胞成熟矿化与NO/cGMP信号途径的关系,进而阐明PEMFs促进成骨细胞成熟矿化的机理。首先将成骨细胞经50Hz、0.6mT脉冲电磁场作用不同时间后,检测细胞培养液中一氧化氮(Nitric Oxide, NO)和细胞内3?-5?-环鸟苷一磷酸(3?-5?-cyclic-GMP, cGMP)的含量,以探明电磁场是否影响NO和cGMP的合成;其次,提取总蛋白,应用蛋白质印迹检测细胞内eNOS、iNOS和PKG-1的蛋白表达量;最后,利用NOS的阻断剂L-NAME抑制NO信号通路后,检测成骨性相关指标,包括碱性磷酸酶（ALP）活性、钙化结节数量、成骨性基因Bmp-2、Collagen-1、Osterix及破骨细胞调节因子Rankl基因的表达量。结果发现经PEMFs处理后,NO含量及cGMP含量均有明显升高;细胞内eNOS、iNOS和PKG-1蛋白表达量较空白对照组均有显著升高,说明PEMFs能够激活NO/cGMP信号途径。且经PEMFs处理的成骨细胞,ALP活性升高,BMP-2、Collagen-1和Osterix基因表达量显著增加,Rankl基因表达量下降,成骨细胞形成钙化结节的能力增强,当加入L-NAME,PEMFs引起的ALP活性增加、成骨性基因表达升高和钙化结节形成能力增强的趋势均被显著抑制。上述结果表明,经PEMFs处理成骨细胞成熟矿化过程中 NO/cGMP信号通路被激活;如该通路被抑制,则电磁场促成骨作用被抵消。说明脉冲电磁场促进成骨细胞成熟矿化依赖于NO/cGMP信号通路。     

50Hz 1．8mT电磁场对成骨细胞增殖与分化成熟影响的波形比较研究

在50 Hz 1.8 mT的4种不同波形电磁场(electromagnetic fields,EMFs)中筛选促进体外培养大鼠成骨细胞(rat osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的最佳波形.体外分离培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为5组,分别用频率50 Hz,EMFs强度为0 mT(对照组)和1.8 mT的正弦波、三角波、方波和锯齿波处理ROB,30 min/(次.天).在磁场处理后4～8天细胞呈现特征样分布.方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.三角波和正弦波增加ALP活性,其中ALP染色、茜素红钙化结节染色和胶原Ⅰ(collagen-Ⅰ)免疫组织化学检测结果与ALP活性一致.在EMFs处理后的24 h、96 h和72 h后EMFs分别提高Runx-2、Opg和Igf基因表达水平,其中尤以正弦波和三角波作用最为显著.上述结果表明:50 Hz 1.8 mT方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.50 Hz 1.8 mT EMFs能促进体外培养成骨细胞分化成熟,其中尤以正弦波和三角波促进成骨细胞分化成熟作用最为显著.     

正弦波电磁场激活一氧化氮信号通路促进大鼠成骨细胞成熟与矿化

研究正弦波电磁场(SEMF)促进成骨细胞成熟矿化是否与一氧化氮(NO)信号通路相关.首先检测成骨细胞经正弦电磁场作用0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h和4h后一氧化氮合酶(NOS)的活性,以探明电磁场是否影响NO的合成;其次,在细胞培养液中加入NOS的阻断剂L-NAME以阻断NO信号通路,观察电磁场促进骨形成作用是否受到影响.结果发现,经正弦波电磁场处理后,NOS活性升高,在0.5h达到峰值,与空白对照组差异极显著(P<0.01),Osterix基因的表达量、碱性磷酸酶活性和钙化结节数等均显著高于对照组.L-NAME组各项指标均低于空白对照组,SEMF+L-NAME组则略高于空白对照组而低于SEMF组.以上结果表明SEMF促进成骨细胞成熟矿化过程中NO信号通路被激活,如该通路被抑制,则SEMF的促成骨作用被抵消.     

糖皮质激素对肥大细胞胞膜流动性的影响

目的:研究糖皮质激素(皮质酮)对肥大细胞胞膜流动性的快速作用。方法:采用荧光偏振法检测膜流动性,检测不同浓度皮质酮对肥大细胞膜流动性的快速影响以及加用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486看其是否影响皮质酮对肥大细胞膜流动性的快速作用。结果:与阴性对照组比较,皮质酮能够在7min内剂量依赖性地快速降低肥大细胞胞膜流动性,稳定肥大细胞胞膜(P0.01);加用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486后能部分阻断皮质酮对肥大细胞膜流动性的快速作用(P0.01)。结论:糖皮质激素能够快速降低肥大细胞胞膜流动性,稳定肥大细胞胞膜,这一作用可能是糖皮质激素快速抑制肥大细胞脱颗粒非基因组机制作用的靶点之一。     

高效表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌的发酵参数优化

运用正交试验对影响重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大肠杆菌DH5α中表达水平的因素进行了研究。结果表明,在培养阶段,培养温度是影响rhG-CSF表达的显著性因素;在诱导阶段,诱导pH是影响rhG-CSF表达的显著性因素。将实验得到的优化参数运用到NBS MPP-40发酵罐进行工程菌株的发酵培养,结果表明rhG-CSF表达量可占细菌总蛋白量的25.83％。     

甘氨酸偶联皮质醇抗Compound 48/80刺激大鼠急性过敏反应的作用研究

目的:观察甘氨酸偶联皮质醇(HG)对Compound 48/80(C48/80)刺激大鼠急性过敏反应的影响,以期为后期深入探讨糖皮质激素非基因组机制建立有效研究工具。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为4组:急性过敏模型组(腹腔注射C48/80+对照溶剂,n=15)、皮质醇(GC)干预组(腹腔注射C48/80+GC,n=15)、HG干预组(腹腔注射C48/80+HG,n=15)、空白对照组(腹腔注射等量生理盐水,n=15)。造模组及各干预组分别在腹腔注射C48/80 5 min后分别给予腹腔注射对照溶剂(等量无水乙醇,为GC及HG的稀释溶剂)、GC或HG,之后每5 min监测大鼠肛温及平均动脉压(MAP),腹腔注射C48/80后30 min时处死大鼠,取大鼠咽喉组织及肺组织,多聚甲醛固定切片后观察组织形态;同时摘眼球取血,分离血清,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中组胺含量。结果:与空白对照组相比,造模组大鼠肛温及平均动脉压呈持续降低趋势,C48/80刺激可诱发大鼠咽喉及肺组织水肿、肺泡损坏及炎性细胞浸润,大鼠血清中组胺水平较对照组显著升高(P0.05);较造模组各干预组均可减轻造模诱发的上述过敏反应(P0.05),但HG干预组较GC干预组促进大鼠肛温降低恢复起效时间快、复温效率高(P0.05),HG干预组减弱大鼠平均动脉压持续性降低趋势较GC干预组效果明显(P0.05);HG干预组显著减轻C48/80刺激导致的咽喉及肺组织水肿、肺泡损坏及炎性细胞浸润;HG干预组能显著抑制C48/80刺激导致的血清组胺升高水平(P0.05),但HG干预组与GC干预组抑制效果无明显差异(P0.05)。结论:HG能够快速抑制C48/80刺激诱导的大鼠急性过敏反应;能够显著抑制肥大细胞组胺的释放;HG可能通过非基因组作用快速抑制肥大细胞的脱颗粒,抑制炎性介质组胺的释放,从而抑制免疫炎症反应,发挥抗过敏及抗炎症效应,从而为研究糖皮质激素非基因组机制提供了有效的研究工具。     

兔脑皮质静脉闭塞后脑组织Caspase-3活性的变化

目的观察兔脑皮质静脉闭塞后Caspase-3活性的变化。方法采用电凝法制作兔脑皮质引流静脉急性闭塞模型,琼脂糖凝胶电泳、荧光实时定量PCR和Western印迹检测Caspase-3表达。结果脑皮质静脉闭塞后8hCaspase-3活性已升高,24h达高峰,48h明显下降。结论细胞凋亡是脑缺血后脑损伤发生机制,Caspase-3蛋白参与了皮质静脉闭塞后脑缺血后神经元损伤的病理过程。     

喜树内生真菌抗水稻纹枯病菌活性的研究

从喜树健康组织叶、茎以及果实中经过分离、纯化共得到26株内生菌株。利用生长速率法测定这26株菌株对植物病原菌——水稻纹枯病病原菌的抑制作用。抑菌试验结果显示：26株菌株中有22株喜树内生真菌的发酵液对植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用;其中,菌株XSY10的发酵液抑菌效果最强,达到了74.97%。水稻盆栽试验结果表明：喷施菌株XSY10次生代谢产物7d后,对水稻纹枯病的防治效果为34.77%。以上试验结果说明喜树内生真菌XSY10对植物病害的防治具有一定的功效。