Herpud1对后肾间充质细胞的作用及其机制的探讨

为初步探讨Herpud1在肾脏发育中的生物学作用,过表达Herpud1载体及敲低Herpud1载体被构建。载体被转染进后肾间充质细胞,通过RT-PCR和蛋白质免疫印迹检测了上皮间质的转换过程(EMT)的标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail蛋白及内质网应力的标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、真核起始因子2α(e IF2α)的表达变化,通过EDU细胞增殖实验检测了Herpud1对细胞增殖的作用,同时利用细胞划痕实验验证了细胞的迁移能力。结果显示,与空白对照组相比,在Herpud1过表达的实验组中,E-cadherin的表达在mRNA和蛋白质水平均是降低的,而Snail和Vimentin的表达则是上升的,并伴随着细胞增殖活性的降低和细胞迁移能力增加,同时内质网应力相关蛋白GRP78和e IF2α是升高的。在Herpud1敲低的实验组,E-cadherin的表达在mRNA和蛋白质水平均是升高的,而Snail和Vimentin的表达下降,细胞迁移能力是降低并且细胞增殖活性升高,同时内质网应力相关蛋白GRP78和e IF2α也是降低的。这些结果证明Herpud1可以促进MK3细胞EMT过程,提高细胞的迁移能力,抑制细胞的增殖活性,其机制可能与细胞的内质网应力相关。     

周期性张应力对面颌肌细胞Na~＋/K~＋-ATPase的影响

目的：研究周期性张应力对Na＋/K＋-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na＋/K＋-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制。方法：构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型;应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同时段的张应力刺激,测定Na＋/K＋-ATPase的功能活性;运用实时荧光定量PCR研究周期性张应力刺激对Na＋/K＋-ATPase功能亚基α亚单位mRNA的影响。结果：Na＋/K＋-ATPaseα1,α2亚单位随着加力时间延长,表达增强,同对照组比较,呈一致性上调（P〈0.001）;细胞加力1小时,α1的mRNA表达不受影响;加力2小时后,α1和α2的mRNA表达呈现逐渐增强趋势,48 h时达到最大值。张应力刺激对α2亚单位的mRNA表达似乎更为敏感,加力1 h时α2亚单位的mRNA表达水平即增加,增加量约为对照组的37.74%,具有显著的统计学意义。结论：周期性的机械牵张作用于培养的骨骼肌细胞,可诱导α1和α2亚单位mRNA的表达量增加;α1和α2亚单位对周期性张应力刺激的作用时间反应不同,α2亚单位的反应可能更为敏感。周期性张力刺激的增加所产生的压力可能是转录调节的主要因素;周期性张应力对骨骼肌细胞Na＋/K＋-ATPase水解亚的调节作用不同,可能在面颌肌肉对功能矫形力的适应性改建中具有重要作用。     

TGF-β1在应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用及其机制

目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β1(TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响.方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加载系统,对细胞分别施加2、6、12与24 h的周期性张应力,以不加力组为对照组,观察各组细胞形态变化,利用细胞计数试剂8检测细胞增殖活性,并利用ELISA试剂盒检测加力后各组TGF-β1的表达,并对加力12h组加入TGF-β1抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测对I型胶原基因表达的影响.结果:与对照组比较,加力2h细胞增殖稍降低,6h增殖活性增强,12h达到峰值,24h增殖活性明显受到抑制;TGF-β1的表达与细胞增殖成正相关;TGF-β1受到抑制后细胞增殖受到影响,I型胶原的表达也受到影响.结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖在一定时间的周期性张应力作用下先增加然后再抑制,其中TGF-β1参与细胞增殖,并且TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞I型胶原的表达起促进作用.     

周期性张应力刺激下成肌细胞钙网蛋白的表达及变化

目的：检测成肌细胞钙网蛋白（CRT）在循环拉伸应力刺激下的表达变化。方法：体外构建面颌部成肌细胞力学刺激模型。加力组以0．5赫兹的加载频率和10％细胞拉伸变形幅度对细胞进行加力培养1h,6h,12h,24h,运用实时荧光定量PCR技术跟Westem Blot技术分别检测在周期性张应力作用下成肌细胞CRT在基因水平及蛋白水平的表达变化。结果：当对细胞加力6h后,CRTmRNA及蛋白表达量开始增多,加力12h后CRTmRNA及蛋白表达量到达最多（P〈0．01）,加力0h组与加力12h组之间差异有显著的统计学意义（P〈0．01）。结论：持续的周期性张应力刺激下CRTmRNA及蛋白表达增加。     

纤维桩树脂核修复老年残根残冠的疗效及对炎性因子的影响

目的:探讨纤维桩树脂核修复老年残根残冠的疗效及对炎性因子的影响。方法:抽取2012年1月至2013年4月期间行老年残根残冠修复的患者80例,共92颗患牙,按随机数字表法分为研究组和对照组各40例,其中研究组患牙47颗,采用纤维桩树脂核修复;对照组患牙45颗,采用金属铸造桩核修复。收集两组患者的血清和龈沟液样本,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)分别检测两组的IL-8、IL-6及TNF-α水平。对比两组疗效及炎性因子水平。结果:研究组治疗患牙总体成功率明显高于对照组,失败率明显低于对照组(P0.05);研究组不同牙位的治疗成功率均较对照组高,但差异不明显(P0.05);修复前两组的IL-8、IL-6及TNF-α的水平差异不明显;研究组修复后1周、1个月及1年的IL-8和IL-6水平均明显低于对照组(P0.05),研究组修复后1年的TNF-α水平明显低于对照组(P0.05),两组患者修复后1周和修复后1月的TNF-α水平相差不大(P0.05);重复测量方差分析结果显示,两组IL-8、IL-6及TNF-α的水平均随着修复时间的延长而降低(P0.05)。结论:纤维桩树脂核修复老年残根残冠具有更好的疗效,对降低牙龈沟液中炎性因子水平的作用明显,值得在临床上应用和推广。     

脊柱-骨盆固定系统的生物力学研究

目的:研究髂骨钉在脊柱-骨盆固定系统中对腰骶稳定性及螺钉应力分布的影响。方法:6具成人腰椎-骨盆防腐标本,分别按照三种不同的固定方式完成置钉连接操作,制成3个实验组:单纯腰椎后路长节段固定组(L2-L5组)、腰骶固定组(L2-S1组)、髂骨钉固定组(L2-S1-I组)。生物力学测试采用8 N·m纯力矩执行前屈、后伸、左右侧弯、左右旋转6个工况运动,比较各固定组L2、L5水平活动度以及L5椎弓根钉、S1螺钉应力。结果:L2-S1组、L2-S1-I组内固定系统以及腰骶关节活动度均明显降低(P0.05),L2-S1-I组的优势更加显著,尤其在抵抗固定系统旋转活动以及腰骶关节前屈活动时作用更明显。L2-S1-I组、L2-S1组L5椎弓根钉应力均较L2-L5组明显减小(P0.05);L2-S1-I组S1螺钉应力较L2-S1组显著减小(P0.05)。结论:髂骨钉技术能够提供良好的脊柱-骨盆固定效果,在维持腰骶稳定性方面优势明显;对近端固定螺钉有保护作用,在与S1螺钉联合使用时,能有效分担S1螺钉所受应力,显著降低螺钉松动、拔出的风险。     

中国黄藻纲植物新记录属和种

报道了采自中国山西、黑龙江、上海、浙江等地的中国黄藻纲植物新记录14种,隶属于7个属,其中椭球藻(属Ellipsoidion)、拟杆藻属(Bumilleriopsis)、异毛藻属(Heterotrichella)和异丝藻属(Heterothtix)4个属在中国是首次报道。     

多仪器联合分析尿液的应用价值

目的:探讨干化学分析、UF-100尿有形成分分析与DIASYS沉渣镜检分析联合检测尿液的应用价值。方法:用尿干化学分析仪MiditronM、UF-100型尿液分析仪、DIASYS R/S 2003沉渣分析仪分别对390例随机尿液标本进行检测。结果:以DIASYSR/S 2003沉渣分析结果为标准,干化学法与DIASYS镜检法相比,测定红细胞阳性符合率为92.68%,假阳性为13.96%,假阴性为7.32%;测定白细胞阳性符合率为58.91%,假阳性为9.58%,假阴性为41.09%;UF-100与DIASYS相比,检测红细胞阳性符合率为82.93%,假阳性为7.47%,假阴性为17.07%;测定白细胞阳性符合率为81.40%,假阳性为12.26%,假阴性为18.60%;检测上皮细胞、小园上皮细胞、管型、结晶和类酵母菌阳性符合率较低,分别为69.09%、60.53%、68.18%、78.95%、57.14%。390例尿标本中干化学法白细胞、红细胞、蛋白及亚硝酸盐均阴性的176例标本中,UF-100检测红细胞阳性14例,白细胞阳性19例,DIASYS检出红细胞阳性5例,白细胞阳性11例。结论:UF-100型尿沉...     

间歇式轴向压应力对组织工程骨种子细胞的黏附增殖与成骨分化促进作用的研究

目的探究间歇式轴向压应力对组织工程骨种子细胞黏附、增殖与成骨分化能力的影响。 方法构建表达绿色荧光蛋白的兔骨髓间充质干细胞（rBMSCs）作为示踪种子细胞,运用旋转细胞培养仪将松质骨支架和种子细胞共培养7 d获得组织工程骨（TEB）,实验组在第7 ~ 14天施加大小10 N、频率1 Hz、4 h/d的间歇式轴向压应力刺激,对照组常规培养,14 d后胰酶消化法获取两组种子细胞并比较其黏附、增殖和成骨分化能力。采用两组独立样本t检验进行统计学分析。 结果（1）流式细胞术显示rBMSCs被成功提取分离。（2）倒置荧光显微镜及扫描电镜显示TEB中种子细胞与支架相容性良好。（3）活体荧光成像系统及扫描电镜显示应力刺激组种子细胞的生长状况要优于非应力刺激组,前者平均荧光密度及细胞数/500倍视野均大于后者,差异均具有统计学意义（平均荧光密度：（3.75±0.34）×10⁸ vs （2.91±0.22）×10⁸,t = 2.90,P = 0.04;细胞数/500倍视野：30.50±4.43 vs 21.00±5.13,t = 3.14,P = 0.01）。（4）细胞黏附实验显示,应力刺激组种子细胞的75%细胞贴壁时间短于非应力刺激组,两组时间分别为（3.00±0.41）h、（13.33±1.70）h,差异具有统计学意义（t = 8.20,P < 0.01）,前者的最终细胞贴壁率高于后者（99.97%±0.34% vs 85.83%±1.18%）,差异具有统计学意义（t = 11.31,P < 0.01）。（5）CCK-8检测显示,在培养第48 ~ 96 h,应力刺激组种子细胞的增殖能力优于非应力刺激组,将两者的450 nm吸光度值在第48小时（0.49±0.02、0.40±0.02）、72 h（0.76±0.07、0.64±0.04）和96 h（1.58±0.07、1.34±0.13）分别进行比较,差异均具有统计学意义（t = 5.15、2.57、2.86,P均< 0.01）。（6）在成骨诱导14 d后,应力刺激组种子细胞的ALP和Ca结节染色阳性率要强于非应力刺激组：两组ALP染色阳性率分别为26.73%±4.56%、16.68% ± 3.89%,差异具有统计学意义（t =3.33,P = 0.03）;两组Ca结节染色阳性率分别为41.81%±3.56%、27.40% ± 2.35%,差异具有统计学意义（t = 3.68,P = 0.02）。 结论间歇性轴向压应力可促进组织工程骨种子细胞的黏附、增殖与成骨分化。     

牵张应力刺激介导间充质干细胞的信使RNA和长链非编码RNA表达谱变化

目的探讨信使RNA和长链非编码RNA在牵张应力刺激间充质干细胞（MSC）成骨分化中的作用。 方法分离培养正常人骨髓MSC,分为应力组与无应力组,应力组通过FlexCell应力系统对其施加外源性应力（5﹪形变、频率0.1 Hz、作用时间4 h/d）,无应力组不予以外源性应力刺激,通过茜素红实验和碱性磷酸酶实验检测其成骨分化能力改变。提取应力刺激下第7天RNA,进行全基因组及长链非编码芯片表达谱检测,通过生物信息学方法分析和鉴定关键长链非编码RNA。采用两样本t检验进行统计学分析。 结果成骨第14天应力组MSC茜素红定量OD值为1.46±0.19,高于无应力组MSC 0.62±0.08,差异具有统计学意义（t?= -1.99,P < 0.05）。此外,成骨第14天应力组MSC碱性磷酸酶结果（265.3±31.2）U/L,较无应力组（121.2±21.2）U/L升高（t = -12.23,P < 0.05）。通过芯片表达谱检测,牵张应力刺激下成骨第7天共有差异表达信使RNA 598个,差异表达长链非编码RNA 329个。通过KEGG分析提示WNT信号通路是差异表达最明显的信号通路,其中WNT5a表达变化最为明显（6.74倍,P?< 0.01）。通过共表达分析提示lnc-RNA-SSR是调控WNT5a表达的主要长链非编码RNA。 结论牵张应力刺激下MSC的信使RNA和长链非编码RNA表达谱明显改变,其中lnc-RNA-SSR可能通过WNT5a影响MSC成骨分化能力。