丝状真菌高效表达异源蛋白研究进展

丝状真菌是具有高效分泌蛋白质潜力的真核表达系统, 能对蛋白质进行翻译后修饰, 如蛋白质糖基化等; 并且比植物、昆虫和哺乳动物细胞具有更快的生长速率。近年来, 随着真菌分子遗传技术和菌种改良策略的进步, 尤其是真菌基因组学的发展, 利用丝状真菌生产异源蛋白越来越受到关注。综述了丝状真菌作为细胞工厂生产异源蛋白的最新探索与进展, 其中包括功能基因组学在蛋白表达与分泌研究中的应用, 同时探讨了异源蛋白表达和生产的改进策略。     

类橡胶蛋白AbAMP1的重组表达及其抑菌活性研究

将类橡胶蛋白AbAMP1基因克隆至pPIC9,获得重组载体pPIC9-Ab,线性化后转化Pichia pastoris SMD1163,筛选获得阳性转化子.取表型为Mut*的转化子AS16进行诱导表达,上清经Tricine-SDS-PAGE分析,在约4.7 kD处有一条较强主带,与AbAMP1的预期大小相符,表明获得高效表达.上清经酸性非变性电泳后,用凝胶琼脂糖弥散法测定其抑菌活性,在含Bacillus thuringiensis琼脂糖平板AbAMP1对应处有一明显抑菌带,说明重组表达的AbAMP1具有天然活性.上清液抑菌活性试验显示,AbAMP1对Fusarium oxysporum f.sp.cubense以及B.thuringiensis,B.subtilis,Staphylococcus aureus等G 细菌均有显著的抑制作用,而对其它供试丝状真菌、酵母菌以及G-细菌无明显抑制作用.     

一种改进的丝状真菌DNA提取方法

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA.改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需茵体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高,纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA.这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等.     

产真菌毒素真菌的PCR检测和定量技术

真菌毒素是丝状真菌产生的次级代谢物,脊椎动物通过自然途径即使吸入少量也会中毒。为了提高食品的安全性,使消费者免遭有害污染,就必须对可能产生这类有毒物质的真菌进行严格的检测,这种检测要贯穿于农产品生产以及粮食和饲料加工的各个重要环节。基于聚合酶链式反应的诊断技术已经应用于最严重的毒素产生菌（诸如镰刀霉菌、曲霉菌和青霉菌等）的检测和鉴定,     

丝状真菌次级代谢产物的研究现状与发展趋势

近年来,丝状真菌次级代谢产物的研究在国内外受到了极高的重视,同时也取得了较大的进展。本文对丝状真菌次级代谢产物的生物合成和调控机制以及隐性次级代谢产物生物合成基因簇的激活等方面进行了简述,同时对组合生物学给真菌次级代谢产物研究带来的机遇和挑战进行了讨论。     

贵州小孢子菌——小孢子菌属一新种

从我国贵州省的土壤中分离到1株小孢子菌,菌株GZUIFR-EB2001M在小孢子属系统发育树中独立为一亚分支,明显区别于其他供试种,为该属一新种,命名为贵州小孢子菌。形态学与近似种的主要鉴别特征为:无球拍状菌丝;大分生孢子光滑或粗糙,梭形,细长;小孢子棒状至柱状。     

外生菌根真菌与丝状真菌混合对红松凋落物降解效能的影响

实验以原始红松林中高频出现的丝状真菌(链格孢Alternarria sp.)和两种外生菌根真菌(细粉绒牛肝菌.Xerocomus Pulverulentus、大杯伞Clitocybe maxima)为供试菌株,以粉碎的新鲜红松凋落物为分解底物,发酵培养后测定底物的质量损失率,酶活性以及营养元素的变化情况。结果表明,AX处理(Alternaria sp.和X.Pulve Rrulentus混合菌株组合)在60天内质量损失率最高,为18.33%,而混合菌AC处理(Alternaria sp.和C.maxima混合菌株组合)由于产生拮抗作用质量损失较低,为13.27%;20天时,X处理(X.Pulverulentus)产生漆酶活性较高为0.093 U·mL^-1,C(C.maxima)和AX处理的酶活性的最高值分别为0.063 U·mL^-1和0.047 U·mL^-1,而A(Alternaria sp.)处理的纤维素酶活性为0.59 U·mL^-1,AC处理为0.57 U·mL^-1,AX为0.53 U·mL^-1,但是AX处理在50天时再次出现高峰,为0.48 U·mL^-1:AX处理底物的营养元素N含量减少幅度最为明显,减少百分率为12.21%,同时,P元素的减少幅度也最大,减少百分率25.82%。研究结果进一步揭示了森林生态系统中不同功能真菌类群对林木有机凋落物降解过程中的作用机制,及真菌类群间的相互作用关系。     

纳木措春季水体可培养丝状真菌优势种生态位分析

为探明纳木措春季水体可培养丝状真菌的群落特征,研究在分离纯化丝状真菌的基础上,结合经典分类法、rRNA-ITS转录间隔区测序法确定丝状真菌的群落组成及丰度;同时对水体理化因子进行分析,揭示丝状真菌优势类群生态分化与理化因子的相关性。结果在纳木措水体中共分离纯化出921株丝状真菌,归为20属62种,真菌资源较为丰富。其中,主要优势种(Y>0.02)包括:普通青霉Penicillium commune、酒色青霉Penicillium vinaceum、波兰青霉Penicillium polonicum、青霉菌Penicillium goetzii、灰玫瑰青霉Penicillium griseoroseum、冻土毛霉Mucor hiemalis、总状毛霉Mucor racemosus、格孢腔菌Pleosporales sp.2和壳青霉Penicillium crustosum。优势种生态位指数显示,优势种间生态响应速率之和为负数,低度重叠的种对占比较大(56.94%),总体上呈正关联,但未达到显著水平(χ²>3.841),表明群落正处于衰退阶段。优势种间竞争...     

真菌发酵有效提升秸秆炭有机污染物吸附性能

【背景】我国农业废弃秸秆存量大，微生物发酵无法实现其彻底转化，仍造成二次污染和资源浪费的问题。秸秆发酵废弃物可经热解炭化制备吸附剂用于水体有机污染物的高效去除。【目的】探究以秸秆发酵废弃物为原料所制备秸秆炭对有机污染物的去除效率，明确发酵过程对秸秆炭吸附性能的影响及机制，为水体有机污染物的高效去除和秸秆发酵废弃物的再利用提供参考。【方法】以丝状真菌里氏木霉QM6a和棘孢木霉T-1为发酵菌株，分别对小麦和水稻秸秆进行固态发酵，发酵残渣经热解炭化后用于吸附典型有机偶氮染料亚甲基蓝(methylene blue, MB)。【结果】发酵处理可缩短吸附平衡时间，有效提高小麦秸秆炭对MB的吸附效率，但对水稻秸秆炭吸附性能无明显提升作用。棘孢木霉T-1发酵的小麦秸秆经600℃热解所得秸秆炭(BaWS600)对MB(50mg/L)的吸附效率较天然秸秆炭(BWS600)提高53.6%。准二级动力学模型可有效模拟吸附过程，BaWS 600的平衡吸附量比BWS 600和BWS 800高119.4%和299.4%。Freundlich模型可较好描述等温吸附过程，表明MB在秸秆炭表面的吸附为多分子层吸附。秸秆发...     

丝状真菌遗传转化体系的研究进展

随着现代测序技术的飞速发展,主要丝状真菌的基因组序列相继公布,对丝状真菌基因水平的研究也不断深入,发展高效的遗传转化技术是真菌基因功能研究以及定向改良菌种的前提。近年来,尽管研究者不断优化并开发新的遗传转化方法,然而在丝状真菌中仍然存在转化效率较低、阳性转化子筛选困难等问题。适宜的转化方法和筛选标记对丝状真菌的遗传转化有至关重要的作用。该文综述了丝状真菌遗传转化系统的研究进展,主要从受体细胞的处理、外源基因的整合与表达、常用转化方法和阳性转化子的筛选鉴定等方面进行概述,旨在为今后丝状真菌遗传转化体系的构建提供思路。