透射电镜观察p21-（HBsAg/HBsAg）转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡。方法用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变。结果细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体。结论p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型。     

TGF-β在骨关节炎发生中的可能作用

转化生长因子TGF-β具有广泛的生理效应,对于维持关节软骨正常有重要意义。软骨细胞外基质降解和关节软骨损坏是骨关节炎的重要特征,研究表明TGF-β一方面通过调节细胞外基质成分含量维持基质的正常更新,另一方面通过调节关节软骨细胞的形成、增殖和分化来保持正常数量和正常生理状态的软骨细胞。本文就这两个方面综述了最新研究进展,以探讨TGF-β在骨关节炎发生中的可能调节机制。     

TGF—β在骨关节炎发生中的可能作用

转化生长因子TGF－β具有广泛的生理效应,对于维持关节软骨正常有重要意义。软骨细胞外基质降解和关节软骨损坏是骨关节炎的重要特征,研究表明TGF－β－方面通过调节细胞外基质成分含量维持基质的正常更新,另一方面通过调节关节软骨细胞的形成,增殖和分化来保持正常数量和正常生理状态的软骨细胞,本文就这两个方面综述了最新研究进展,以探讨TGF－β在骨关节炎发生中的可能调节机制。     

牛α—sl酪蛋白基因序列指导htPA突变体小基因在小鼠乳腺中的表达

将包括α－sl酪蛋白基因的启动子、LAtPA小基因、α－sl酪蛋白基因下游调控序列的融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中,获得了5只转基因阳性鼠,其中1只转基因阳性雌鼠乳清中LAtPA的含量为0．18αg/ml,说明构建的LAtPA小基因能够正确表达出有生物活性的LAtPA, 在酪蛋白基因调控序列的指导下在小鼠乳汁中表达。     

用酵母双杂交系统研究Smad3和Smad4的相互作用

Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 是将 Ｔ Ｇ Ｆ β的信号从细胞外传递到细胞核内的重要的信号传导蛋白． Ｔ Ｇ Ｆ β与其受体结合后,激活受体的磷酸激酶,使 Ｓｍ ａｄ３ 发生磷酸化,活化的 Ｓｍ ａｄ３ 与 Ｓｍ ａｄ４ 结合,形成异源复合物,进入到核中．然后 Ｓｍ ａｄ４ 以 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白的形式与特定的 Ｄ Ｎ Ａ 结合,将 Ｔ Ｇ Ｆ β的信号传到核内．激活转录,诱导背中胚层的形成,抑制细胞的分化等．经研究利用酵母双杂交试验,鉴定了 Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 相互作用的功能区域．构建 Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 的 Ｃ 端、 Ｎ 端和中间连接区的突变体,将这些突变体克隆到 ｐ Ｇ Ａ Ｄ４２４ 和 ｐ Ｇ Ｂ Ｔ９ 载体中,并转化到 Ｈ Ｆ７ Ｃ 酵母中．通过 Ｌｅｕ－ ／ Ｔｒｐ－ ／ Ｈｉｓ－ Ｓ Ｄ 平板上菌落的形成,和 Ｘ－ ｇａｌ显色反应鉴定转化到酵母中的两个克隆质粒的相互作用．结果显示 Ｓｍ ａｄ４ 与 Ｓｍ ａｄ３ 异源相五作用时,主要是通过 Ｓｍ ａｄ４ 的中间连接区．在同源作用时, Ｓｍ ａｄ３ 是通过 Ｃ 端,而 Ｓｍ ａｄ４ 是通过中间连接区进行的．     

达氏鲟生长激素基因cDNA克隆、表达及免疫荧光定位研究

为研究达氏鲟(Acipenser dabryanus)生长激素(Growth Hormone, GH)基因的功能, 合成了达氏鲟垂体SMART cDNA, 克隆得到GH全长cDNA序列。达氏鲟GH全长cDNA序列为1008 bp, 由52 bp的5'端非编码区(Untranslated region, UTR)、编码214个氨基酸的645 bp开放阅读框(Open reading frame, ORF)和311 bp的3'UTR构成。运用GH氨基酸序列构建进化树分析发现, 达氏鲟与两栖类、爬行类和哺乳类的一致性要高于真骨鱼类。实时荧光定量PCR结果表明, 达氏鲟GH mRNA主要在垂体和下丘脑中表达, 且垂体中GH的表达量约为下丘脑的110倍; Western-blot研究结果与qRT-PCR一致, 仅在垂体和下丘脑中检测到生长激素蛋白, 且垂体中GH的表达量远高于下丘脑。免疫荧光定位结果显示, GH主要定位于垂体中部, 下丘脑中也有少量荧光信号; 苏木精-伊红组织切片染色研究表明, GH主要是由嗜酸性的生长激素分泌细胞分泌。研究为深入研究脊椎动物生长激素基因的进化和人工养殖达氏鲟的生长调控提供了基础。       

基因打靶技术在现代生物学研究中的应用

尽管基因打靶技术的先驱者2007年才获得诺贝尔生物学或医学奖,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用却已经有25年的时间.基因打靶技术的发明和应用革命性地改变了现代生物医学研究的面貌,催生了许多生物医学和药物研发领域的前沿研究,并直接导致了生物医学研究领域中的许多突破性进展.基因打靶技术的发明使得科学家第一次能对关于特定基因生理功能的假设进行实验验证,并通过基因打靶研究真正建立基因和疾病间的因果关系.近年来,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用日益深入和广泛.     

HAV病毒液的3种浓缩方法比较

目的：对HAV病毒液的3种常见浓缩方法进行分析比较,为HAV病毒研究及规模化疫苗生产提供参考。方法：使用MILLIPOREPELLICON超滤、PEG6000沉淀、蔗糖．甘油垫三种方法对纯化HAV病毒液进行浓缩,用ELISA方法对浓缩液进行抗原滴度检测,计算不同浓缩方法的回收率。结果：HAV病毒液经过7次超滤循环浓缩,平均回收率为86％;PEG浓缩方法回收率平均72．5％;蔗糖．甘油离心浓缩方法平均回收率53．3％。结论：蔗糖／甘油超离心法,集纯化浓缩一体,适用于样品量较少,需要高浓度样品的试验;PEG浓缩得率适中,操作简单,应用范围较广;超滤膜浓缩在大规模疫苗生产或样品量较大时适用,但需控制样品浓度及浓缩倍数不能太高。以免样品损失。     

稻瘟病菌组蛋白脱乙酰化酶SIR2 HDACs的功能初探

利用生物信息学方法对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)组蛋白脱乙酰化酶SIR2家族成员(SRT3001、SRT3002、SRT3003、SRT3004、SRT3005、SRT3006和SRT3007)的生物学功能进行研究.结果表明,SIR2 HDACs家族成员位于不同的染色体上,分布于细胞的不同部位;它们编码的蛋白均含有蛋白激酶C磷酸化、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化、N-糖基化、N-豆蔻酰化4个相同的位点;它们均无跨膜区,且为亲水蛋白质,都无信号肽.多序列比对发现稻瘟病菌SIR2 HDACs家族结构域高度保守,均含有SIR2结构域;这些蛋白可能参与病原菌的转录调节、能量代谢和染色质沉默等过程.     

小单孢菌40027菌株质粒pJTU112复制区的克隆与序列特性

福堤霉素A产生菌——小单孢菌40027菌株含有两个质粒pJTU101和pJTU 112.[目的]对质粒pJTU 112复制区进行克隆,并对质粒pJTU 112复制区序列进行测定和分析.[方法]克隆质粒pJTU 112的不同DNA片段导入消除质粒的小单孢菌40027菌株,通过复制功能的测定,确定质粒pJTU 112的复制区,并进行测序和生物信息学分析.[结果]质粒pJTU 112的复制区定位在约4.7 kb的SacI-KpnI DNA片段上,测序和生物信息学分析表明:4.7 kb的SacI-KpnI DNA片段包含5个ORFs(open reading frames),其中pJTU 112.1和pJTU 112.2与质粒接合转移有关,pJTU112.3、pJTU112.4和pJTU112.5与质粒复制有关.[结论] 质粒pJTU112的复制区定位在约4.7 kb的SacI-KpnI DNA片段上.