靶向Ang2的RNAi慢病毒载体的构建及其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的影响

目的 构建携带促血管生成素2-小干扰RNA（Ang2-siRNA）慢病毒载体,观察其对恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因表达的干扰作用.方法 将经XbaⅠ酶切电泳鉴定的带有加强绿色荧光蛋白的转移质粒（pNL-EGFP）载体与pSilencer 1.0-U6启动子-促血管生成素2-小干扰RNA（pSilencer 1.0-U6-Ang2-siRNA）重组质粒连接,产生加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅰ（pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ）、加强绿色荧光蛋白的转移质粒-U6启动子-促血管生成素2-Ⅱ（pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ）慢病毒转移质粒,电泳筛选阳性克隆,测序鉴定.用连接成功的慢病毒转移质粒、水疱性口炎病毒G蛋白（pVSVG）包膜质粒和pHelper包装质粒共转染293T细胞,产生pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅰ、pNL-EGFP-U6-Ang2-Ⅱ慢病毒.收集病毒上清,测定病毒滴度.将收集的病毒上清感染恶性黑色素瘤细胞,通过实时荧光定量RT-PCR测定抑制Ang2基因表达的效率.结果 酶切电泳与测序鉴定证实成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,293T细胞测定病毒原液滴度为8.0×103/ml.实时荧光定量RT-PCR结果显示：Ang2-siRNA慢病毒载体感染恶性黑色素瘤细胞,抑制了恶性黑色素瘤细胞中Ang2基因的表达（P＜0.05）.结论 成功构建了Ang2-SiRNA慢病毒载体,体外研究显示Ang2-SiRNA慢病毒载体能抑制恶性黑色素瘤细胞中Ang2 mRNA的表达,为下一步进行裸鼠恶性黑色素瘤移植瘤生长的干预实验奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据.     

细菌素的制备及其应用

近年来,具有抑菌活性的细菌素被发现在食品防腐保鲜、疾病治疗和其他许多相关方面有着广泛的应用价值,各种制备细菌素的方法也被广泛报道。本文概述了细菌素的制备方法以及其在诸多领域中的应用。     

海南岛吊罗山热带山地雨林两个演替阶段的种间联结性

种间联结一直是群落演替理论研究的焦点之一, 关于物种间相互作用与群落演替之间的动态关系仍然存在争议。本文中, 作者通过出现-不出现数据的方差比例、基于2×2列联表的种间联结分析和 ²检验, 对海南岛吊罗山热带山地雨林演替前期和演替后期群落的种间联结性进行了研究, 以揭示种间联结与群落演替的相互作用。结果表明: (1)在演替前期, 群落内所有树种间总体呈正联结, 但不显著; 发展至演替后期达到显著正联结。群落内所有物种间正、负联结种对数占总种对数的比例随演替进程呈现下降趋势, 而无联结种对数的比例则大幅上升; 优势种和伴生种间呈现相同的趋势。这表明群落演替正朝着有利于物种稳定共存的方向发展。(2)演替前期建群种和后期侵入种间正联结与无联结种对数的比例(分别为37.8%与41.5%)远大于负联结的比例(20.7%), 但正联结均不显著; 前期定居树种和后期侵入种通过分割资源而共存, 而且也趋于独立存在。(3)后期侵入种间不存在负联结, 所有正联结(占总对数的33.3%)均达显著水平, 显示它们对生境有相似的适应和相互重叠的生态位。     

宁夏沙湖几种主要荒漠植物成丛性分析

该文对宁夏沙湖地区几种主要荒漠植物成丛或聚集分布的空间特征进行了研究,提出应用成丛性表征植物丛聚水平,并以丛生植物的丛径或散生植物的聚集分布尺度范围衡量植物成丛性的发育程度。其中散生植物的聚集尺度以Riplay's K点格局法进行计算。结果表明,植物的丛聚水平与生境条件密切相关,强日照、干热风、空旷的立地、较高土壤含水率、强透水蓄水能力等生境条件会促进植物成丛性的发育,而蒸腾胁迫低、土壤供水能力较差的生境条件下植物成丛性发育较弱。荒漠植物通过成丛或聚集分布可以形成局部微生境,减少地上部分的水分胁迫,是植物在群落水平适应环境的重要途径。     

海南热带山地雨林幼苗幼树的光合能力与水分利用效率

应用Li-6400光合测定系统研究了海南岛热带山地雨林林内幼苗、幼树的最大光合能力及其水分利用效率.结果表明:150个树种中,大戟科中平树的最大光合速率(Pmax)和山毛榉科竹叶栎的水分利用效率(WUE)最高,分别为13.27μmol.m-2.s-1和5.99mmol.mol-1;桃金娘科柬埔寨子楝树的Pmax和大戟科山乌桕的WUE最低,分别为1.35μmol.m-2.s-1和2.4mmol.mol-1.其中,Pmax以桑科的平均值最高,桃金娘科最低;WUE以山矾科的平均值最高,桑科最低;但各科间的差异均不显著(P>0.05).乔木和灌木之间的Pmax和WUE也无显著差异(P>0.05).Pmax随着科分布区的扩大而增大,为宽分布科>中分布科>窄分布科,且差异显著(P<0.05);WUE无显著差异.在种的层次上,随着物种分布区的扩大,植物Pmax逐渐增大,为热带亚热带温带种>热带亚热带种>热带种>海南特有种.而WUE则相反,为海南特有种>热带亚热带种>热带种>热带亚热带温带种.     

虫草素对786-O和ACHN肾癌细胞系增殖、迁移和凋亡机制探究

探究肾癌细胞系经虫草素给药刺激后,细胞凋亡及迁移的机制。体外培养肾癌786-O细胞系和肾癌ACHN细胞系,采用MTT法、细胞迁移实验、HE染色、免疫荧光染色及蛋白免疫印记法;检验不同浓度虫草素处理肾癌细胞系增殖抑制率、细胞迁移情况、细胞形态变化和细胞核形态差异,检验凋亡相关基因蛋白表达情况,探究虫草素诱导肾癌细胞的凋亡机制。随着浓度剂量提高,虫草素能够显著促进肾癌细胞系凋亡,抑制迁移。形态学研究表明,HE染色观察发现癌细胞数量明显降低,并且细胞核明显变大。免疫荧光染色发现MMP-2、MMP-9和BCL-2蛋白表达显著降低,Bax、Casepase-3和Casepase-7蛋白表达显著增加,肾癌细胞可通过AKT/mTOR信号通路诱导肾癌细胞凋亡。     

外源褪黑素对苏打盐碱胁迫大豆幼苗的缓解效应

褪黑素是缓解逆境胁迫对大豆损伤的有效途径之一。研究苏打盐碱胁迫下喷施褪黑素对大豆幼苗生长的调控效应，为大豆幼苗缓解苏打盐碱胁迫提供理论基础和技术支撑。以合农71为试验材料，采用砂培试验方法，设置常规+喷施清水处理(CK)、常规+喷施褪黑素处理(CKM)、苏打盐碱胁迫+喷施清水处理(S)、苏打盐碱胁迫+喷施褪黑素处理(SM)4个处理，研究大豆苗期不同生理指标对苏打盐碱胁迫的响应。结果表明，与常规处理(CK和CKM)相比，苏打盐碱胁迫下(S和SM)大豆幼苗生长均受到抑制；与S处理相比，SM处理大豆叶片PSII反应初始荧光(F₀)与最大荧光产量(F_m)显著增加，非光化学淬灭系数(NPQ)升高，作物光合机构过剩光能的耗散增强，PSII反应中心光保护能力提升，净光合速率(P_n)显著增加，叶片抗氧化酶活性(SOD、POD、APX)和清除ROS能力显著增强，根系和茎秆可溶性糖和可溶性蛋白含量显著增加，叶片和根系中MDA产生速率显著下降，根系干物质积累量、总表面积、总体积和根平均直径显著增加，维持了叶片细胞内激素水平，叶片IAA、CTK...     

A549肺癌细胞株中癌睾丸抗原的表达及生物学意义研究

目的:癌睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)是一类主要表达于睾丸组织和癌组织,并具有较强诱导体液和细胞免疫应答能力的抗原,可以作为抗肿瘤的理想靶分子。本研究探讨了A549肺癌细胞系中CTA的表达情况及其生物学意义。方法:本研究中选取了A549肺癌细胞株,运用RT-PCR的方法检测了其中九种常见CTA的表达情况,进一步通过AV-PI双染法观察了表柔比星,紫杉醇,卡铂,伊立替康,依托泊苷五种化疗药物对A549细胞的凋亡作用及其调控CTA表达的情况。另外用转化生长因子β1(TGF-β1)处理A549细胞,验证了TGF-β1促进细胞生长的作用,进一步检测此时CTA的表达调控。结果:结果显示MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1,HCA661在A549细胞系中稳定表达,表柔比星能够强烈诱导细胞发生凋亡,其诱导作用岁浓度增高而增强。表柔比星下调了MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1的表达,对HCA661的表达无影响。TGF-β1增强了肿瘤细胞增殖能力,与此同时下调HCA661的表达,对MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1的表达无影响。结论:MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1,HCA661在肺癌细胞系A549中稳定表达。TGF-β1作用48小时,使HCA661的表达下调,MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1的表达无变化。表柔比星作用48小时,使MAGEA1,MAGEA3,MAGEC1的表达下调,HCA661表达无影响,卡铂,紫杉醇,伊立替康,依托泊苷对CTA的表达无调控,为进一步明确CTA的表达调控机制奠定了研究基础,同时为将HCA661作为临床中诊断与治疗的新靶点提供了可行性。     

藏中联网工程生态系统服务功能重要性评价

对电网工程沿线区域的生态系统服务功能进行评价是规避和降低工程对沿线区域生态破坏的重要前提。本研究选取水源涵养、水土保持、防风固沙、生物多样性保护等4项生态系统服务功能为主体,基于遥感与GIS技术对藏东南地区生态系统服务功能的重要性进行评价,在此基础上分析了不同电网工程标段影响区的生态系统服务功能重要性。结果表明:藏东南地区生态系统服务功能重要性总体上呈现出"东西部高、中部低"的空间分布格局,极重要区面积为74843 km²,占区域总面积的18.47%,主要分布在藏东南的森林区,包括澜沧江沿线及其以东地区、雅鲁藏布江沿线及错那县、墨脱县南部。藏中联网工程东、西两端标段影响区内的生态系统服务功能重要性相对较高,在施工过程中应根据影响区内主导的生态系统服务功能分布状况采取相应措施加强生态环境保护。本研究方法可为其他输电工程的设计和施工提供生态标准及科学依据。     

槐花散白头翁汤合用对急性放射性直肠炎大鼠的治疗作用及其机制研究

目的: 观察槐花散合白头翁汤对大鼠急性放射性直肠炎(ARP)的疗效。方法: 选用清洁级SD大鼠40只,随机分为空白组(Control)、模型组(Model)、美沙拉嗪组(Mesalazine)、槐花散合白头翁汤组(Formula),每组10只。除Control组外其他三组大鼠盆腔均接受6MV-X射线20 GY剂量照射,制作大鼠急性放射性直肠炎模型。大鼠成模后每天给予相应药物灌胃治疗,按成人临床等效剂量(体表面积法折算), Control组、Model组均给予生理盐水灌胃每天10 ml/kg,Mesalazine组给予美沙拉嗪溶液 0.27 g/kg 灌胃,Formular组分别给予(0.91 g/kg) 灌胃,连续14 d。灌胃后第14日处死所有大鼠,评估大鼠一般情况,HE染色观察大鼠直肠组织的病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的含量,免疫印迹法(Western blot)检测组织中核转录因子- kappaB(NF-κB)的表达。结果: 与Control组比较,Model组大鼠出现严重腹泻症状,直肠黏膜组织出血、溃烂,坏死严重,NF-κB、、ICAM-1 、VCAM-1表达明显增高(P＜0.01)。与Model组比较,Mesalazine组和Formular组明显改善大鼠临床症状和肠粘膜愈合,下调了直肠组织中NF-κB P65蛋白表达,血清中ICAM-1、VCAM-1的含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论: 槐花散合白头翁汤可以通过降低NF-κB 、ICAM-1 、VCAM-1表达,改善ARP大鼠症状和直肠粘膜损伤。