腺相关病毒载体介导siRNA抑制HBV的表达与复制

目的：构建并制备能够有效抑制HBV mRNA表达的siRNA重组腺相关病毒。 方法：将筛选到的siRNA片段克隆入骨架质粒pAAVMCS中,与pAAVRC和pHelper质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组腺相关病毒,将纯化后的重组病毒直接感染Hep G 2.2.15细胞,通过酶联免疫法和荧光定量PCR法检测重组腺相关病毒的抑制效果。结果：重组腺相关病毒显著降低HBV 分泌的相关抗原蛋白以及DNA和RNA水平。结论：重组腺相关病毒载体介导的siRNA能够有效抑制HBV的表达与复制。     

酿酒酵母位点特异性DNA切离及定点整合的研究

酿酒酵母２μ环的ＦＬＰ－ＦＲＴ位点特异性重组系统由ＦＬＰ重组酶和ＦＲＴ重组位点所组成。将ＦＬＰ基因置于受半乳糖调控的酵母ＧＡＬ１０启动子控制下,在半乳糖诱导下实现了酿酒酵母染色体上两个顺向排列ＦＲＴ位点之间ＤＮＡ序列的切离;并将一个含有ＦＲＴ重组位点的环状质粒整合到酿酒酵母染色体上预先设置的一个ＦＲＴ重组位点上,实现了染色体定点整合。这个由ＦＬＰ重组酶催化的位点特异性重组过程具有重组效率高和重组位     

单克隆抗体制备的细胞工程学研究进展

单克隆抗体是近年来发展最快、最成功的大分子药物之一,哺乳动物细胞作为单抗大规模制备最适宜的宿主,在工业生产中仍然存在成本高、产率低等缺点。近年来,抗细胞凋亡、控制细胞周期、优化代谢过程等细胞工程学方面的研究极大地推动了抗体表达及翻译后修饰技术的发展。以下对近年来单克隆抗体制备在细胞工程学方面取得的进展作一综述,并探讨该领域未来可能的研究方向。     

多糖高级结构解析方法的研究进展

研究发现,多糖的生物活性不仅与其一级结构（如分支度、单糖组成及糖苷键连接方式等）有关,而且与其空间结构也密不可分。 因此,对多糖高级结构的研究将有助于阐释其构效关系,为寻找具有生物活性的多糖和开发多糖药物提供理论依据。传统的多糖结构分 析方法具有一定的局限性,已不能满足多糖研究的需求,而现代物理技术的发展则为多糖高级结构解析提供了新的手段。综述近年来多 糖高级结构解析方法的研究进展。     

脑淋巴引流阻滞加重蛛网膜下腔出血后大鼠皮层神经细胞的凋亡

本文旨在探讨在体脑淋巴引流阻滞(cerebral lymphatic blockage,CLB)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后大鼠皮层神经细胞凋亡的影响及机制。选用健康成年Wistar大鼠,随机分为正常对照组、SAH组、SAH+CLB组。采用枕大池二次注血法建立SAH模型。于第二次注血3d后,采用HE染色法及碘化丙啶(PI)染色法观察各组大鼠皮层神经细胞形态结构变化;TUNEL荧光标记法检测原位凋亡情况;免疫组织化学激光共聚焦检测大鼠皮层神经细胞Caspase-3和Bcl-2的蛋白表达。结果显示:(1)HE染色和PI染色可见SAH组大鼠部分皮层神经细胞皱缩,细胞核呈波纹状或折缝样,部分呈新月形;SAH+CLB组神经细胞分布稀疏,核碎裂,可见凋亡小体,周围有空泡形成;(2)SAH组和SAH+CLB组TUNEL阳性细胞的数量均高于正常对照组,而SAH+CLB组又显著高于SAH组;(3)SAH组和SAH+CLB组Caspase-3的表达量均高于正常对照组,而SAH+CLB组又显著高于SAH组;(4)SAH组和SAH+CLB组Bcl-2蛋白表达量均高于正常对照组,而SAH+CLB组显著低于SAH组。以上结果表明,CLB可以通过Caspase-3高表达和Bcl-2低表达加重SAH后大鼠皮层神经细胞的凋亡。     

木榄幼苗叶片cDNA文库的构建及其表达序列标签分析

应用SMART技术构建了25‰盐度下生长4个月的木榄叶片的cDNA文库,文库滴度为10~6 cfu mL~(-1),重组率为94.4%,插入片断长度为1～2 kb.从cDNA文库中随机挑选了96个重组克隆进行序列分析,共获得94个表达序列标签(ESTs),经质量控制和聚类拼接后得到81个unigenes,包括5个片断聚合群和76个单一序列.Blastx分析结果表明这些unigencs与GenBank的Nr数据库中已报道的基因具有较高的同源性(E<10~(-5)),它们参与呼吸代谢、光合作用、糖代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢以及不饱和脂肪酸生物合成等重要的生理过程,并与机体的损伤修复、胞吞作用以及PPAR信号途径等相关.     

RGD三肽的潜在作用靶标预测与计算机模拟分析

化学基因组技术是药物作用靶标确认、药物分子在通路中的作用的确证等方面有重要应用,可为新药研发和老药新用提供理论依据,并可降低药物发现中的高额成本.精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽被证明是与细胞粘附受体特异性结合的特征序列,在生理学上扮演者重要角色.本研究利用化学基因组学中的其中一种方法即基于反向对接和药效团反向匹配搜索技术来研究RGD三肽的潜在作用靶标,并进行计算机模拟分析.反向匹配搜索结果发现计算得到的关键性靶标及其涉及的相关疾病与实验报道的RGD的药理活性相吻合,包括具有抗凝血、抗肿瘤作用,与肾及心血管作用有关等,而且还发现RGD可能是一个潜在的神经氨酸酶的抑制剂.     

聚乙二醇定点修饰蛋白质药物的技术和临床研究进展

聚乙二醇(PEG)定点修饰蛋白药物是针对蛋白特定基团特定位点的修饰,相比于非定点随机修饰的特点是PEG修饰位点的单一与确定,避免了修饰异构体的干扰,能较好的保留药物体内外活性;修饰产物组成均一、性质稳定,便于质量控制,降低由修饰异构体引起的潜在的安全性风险,并很大程度上提高得率,降低成本。已有PEG定点修饰蛋白药物上市,还有部分处于临床试验阶段。本文综述了PEG定点修饰蛋白药物的技术研究与临床进展,包括PEG定点修饰剂、定点修饰方法、PEG定点修饰的上市和临床药物及面临的问题,并展望了PEG修饰技术未来的发展前景。     

信号肽在大肠杆菌分泌系统中的研究与应用进展

大肠杆菌以其明显的优势成为表达重组蛋白常用的系统,但是大肠杆菌本身不具备细胞内形成二硫键的氧化条件和分子机制,而且高水平表达时常容易聚集形成包涵体,限制了其使用,改善这一缺点的重要方法是通过信号肽实现蛋白质的分泌表达。信号肽一般存在于分泌蛋白的氨基端,能够引导蛋白质通过大肠杆菌中的Sec或/和Tat系统分泌至周质空间。简要概述了大肠杆菌中两种跨膜分泌系统和信号肽的结构,并结合近年来常用6种信号肽的研究与应用进展,阐述了信号肽在使用中存在的问题及改进措施。旨在为研究者合理选择信号肽、优化重组蛋白的表达提供更多可用的信息与策略。     

微针技术在透皮给药方向的研究进展

微针作为一种透皮给药技术,具有给药准确、快速、高效、操作简便、无痛等优点,十几年来发展迅速,随着研究的深入其应用范围逐渐扩大,目前微针可用于小分子、生物制剂、疫苗、细胞内DNA/RNA等透皮递送。疫苗、糖尿病、皮肤病是微针研究的主要方向,在此主要介绍微针在这3个领域的临床试验成果及最新研究进展。