11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究

目的利用分子生物学方法,研究7株11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)。方法根据11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因设计合成5对特异性引物,以7株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定及基因序列比对,确定其血清型。多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术分析7株11群肺炎链球菌序列型(ST)。采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和cps基因分别绘制系统发育树。结果根据wcw C、gct和wcj E等3个基因产物确定5株原11A型肺炎链球菌为11A型,无11E型;根据wcwR和gct等2个基因产物确定2株原11B型肺炎链球菌为11B型。获得7株不包括4个合成调控基因(wzg、wzh、wzd和wze)的11群肺炎链球菌cps loci,长度为11～12 kb,11A型具有12个开放式阅读框(ORF),11B型具有11个ORF。5株11A型肺炎链球菌部分cps基因序列差异较大; 2株11B型肺炎链球菌部分cps基因序列相似性高于99%。根据MLST分析发现3种新的ST型。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树和cps基因绘制的系统发育树差异很大。结论从分子水平上确定了11A和11B血清型。获得了5株11A型和2株11B型肺炎链球菌ST型和部分荚膜多糖合成相关基因(cps loci),完善了11群肺炎链球菌的菌种档案。     

霍乱O139型菌苗的试制

对来自孟加拉、泰国、印度、中国四地区Ｏ１３９型霍乱菌株进行了毒力、免疫原性、免疫力与相互交叉保护力试验,结果显示不同地区分离的Ｏ１３９型霍乱弧菌其所试特性相互间无差异。用中国（９３－３）株试制的菌体菌苗,其抗原性、毒性、免疫力安全性等经检定符合霍乱菌苗规程要求。鉴于Ｏ１３９型霍乱弧菌存在荚膜的特性,而现有的几种荚膜多糖菌苗都显示有明显的保护作用,因而,使用Ｏ１３９型菌苗有可能在一定程度上达到控制Ｏ１３９型霍乱流行的目的。     

幽门螺杆菌致人胃病的小鼠模型研究

目的建立幽门螺杆菌致人胃病的小鼠模型.方法用Ⅰ型幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对三种SPF级小鼠(BALB/c、NIH、 KM)采用循环滴喂攻击等方法处理,从菌体定值、抗体水平、病理变化三个方面分14、39、69、105 d进行测试.结果 Hp可持续定植于各供试小鼠胃粘膜上,并刺激Hp抗体(IgG)维持一较高水平,Hp在小鼠上主要引起以胃粘膜变性坏死为主,伴有淋巴细胞浸润的炎症反应,这为Hp致人胃病的症状相似.结论为Hp的致病机理,治疗药物和疫苗研究提供了良好的小动物模型.     

逆向疫苗学及其应用

逆向疫苗学是一种新兴的疫苗研制方法,区别于传统的疫苗研制方法,逆向疫苗学运用了基因组学、生物信息学以及蛋白质组学等多种新型技术,建立抗原筛选库,筛选保护性抗原,制备常规方法很难或不可能生产的疫苗。该方法无需在体外培养微生物。目前,逆向疫苗学已经在多种疫苗的研制过程中取得了很大的进展。     

关于幽门螺杆菌疫苗及其相关性研究的报告

幽门螺杆菌感染是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素,并且与胃癌的发生有关。本文报告了幽门螺杆菌疫苗及其相关性研究的成果,包括细菌的分离培养、毒力基因分型、抗原的纯化及单克隆抗体的研制、动物模型的建立及其基因工程株的构建等。     

不同处理方法对肺炎链球菌基因组提取的影响

为了获得简便、高效的提取肺炎链球菌基因组DNA方法,分别采用不同处理方法(溶菌酶法和脱氧胆酸钠(DOC)法)、不同处理时间对8株不同血清型的肺炎链球菌进行破壁,同时菌株采用不同培养时间进行基因组的提取,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的质量。结果表明,菌株培养12~16 h、质量分数1%DOC处理2 h能提取出高质量的肺炎链球菌基因组DNA。该方法提取的肺炎链球菌基因组DNA具有质量高、完整性好的优点,为肺炎链球菌全基因组序列的测定提供了前提条件。     

O1/O139新型霍乱疫苗口服免疫动物后的自动免疫保护及被动保护试验研究

O1／O139霍乱口服疫苗是一种新型疫苗。本文通过2种不同途径免疫动物,检测血清抗菌抗体和肠道分泌性IgA抗体以及保护力试验,并探讨了它们之间的关系。通过家兔肠袢试验和细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测免疫后抗血清的被动保护作用。试验提示：在霍乱的保护性免疫应答中,除粘膜免疫可能占主导作用外,血清抗菌抗体也发挥了一定的作用。     

幽门螺杆菌疫苗的研究现状

幽门螺杆菌（ＨＨ）是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,并与胃癌的发生密切相关,其相关致病因子主要包括尿素酶、细胞粘附素、过氧化氢酶、脂酶、蛋白酶、细菌毒素和能导致炎症反应的物质。ＨＰ的致病机理与ＨＰ的致病性和宿主免疫应答有关,尤以细菌的毒性占主导地位。近年来国内外均关注ＨＰ的免疫预防和治疗。由于ＨＰ减毒活疫苗的研究条件尚不成熟,目前正重点进行全菌体死疫苗、组分疫苗及基因工程疫苗的研究,ＨＰ动物模型、疫苗的免疫途径、免疫佐剂的研究已取得了令人满意的进展,ＨＰ疫苗的治疗作用更引起了人们的关注。本文对ＨＰ的致病机理、疫苗的研究进展等做一综述。     

福氏志贺菌两种血清分型方法的比较

目的评价福氏志贺菌两种血清分型方法。方法使用传统血清分型方法和多重PCR血清分型方法对255株福氏志贺菌进行血清型分析。结果传统血清分型方法的分型率为98.4%(251/255),多重PCR血清分型方法分型率为96.1%(245/255),两种方法的分型率经卡方检验,差异无统计学意义(χ2=2.644,P>0.05)。有46株菌(18.0%,46/255)通过这两种血清分型得到的结果不一致。结论两种血清分型方法的分型率差异无统计学意义,但部分结果判断有不同。多重PCR更适用于大量样本的检测,传统血清分型方法可以与其互为补充。     

甘孜州炉霍县不同植被土壤微生物特性初步研究

研究了四川省甘孜州炉霍县不同植被条件下土壤微生物群落的分布状况及两种土壤酶活情况。结果表明,不同植被条件下,土壤微生物类群数量存在差异,草甸土壤微生物群落比森林覆盖土壤的微生物群落多。在同一土壤中,细菌、真菌、放线菌数量随土层深度的增加而降低,0~20cm土层微生物数量高于20~40cm的土层。土壤酶活在土壤剖面中的分布随深度增加而降低。