大豆种皮过氧化物酶的制备及其在ELISA中的应用

对大豆种皮过氧化物酶(SBP)进行了部分纯化,并对其标记的抗体的效价和稳定性进行了初步测定。大豆种皮用自来水提取,提取液经pH4.5沉淀去杂蛋白、DEAE-cellulose离子交换柱层析以及SephadexG-75分子筛柱层析,最后冻干得SBP制品。用SBP冻干品标记羊抗人IgG,于-20℃和室温保存2周,前者稀释8000倍、后者稀释2000倍可产生较强的信号。结果表明SBP可以用于酶联免疫检测。     

热稳定高比活纤维素酶在Pichia pastoris中的表达研究

Bacillus amyoliquefaciens DL-3纤维素酶具有热稳定高比活多功能的酶学特性,本文根据该酶的氨基酸序列合成了其编码基因(cel),构建了pPIC9K-cel表达载体,并用P.pastoris进行了表达。工程菌株三角瓶发酵酶活性达0.50 U/mL,酶解滤纸的产物为低聚糖,表明人工合成的热稳定高比活纤维素酶基因在P.pastoris中可以正常表达、加工及分泌,重组酶的分子量由天然酶的53 kDa增加至68 kDa,糖基化严重。     

玉米赤霉烯酮降解酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达

通过密码子优化、体外多拷贝构建实现玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)降解酶基因(zlhy-6)在毕赤酵母GS115菌株中的高效表达。按酵母密码子偏好性优化zlhy-6基因的密码子,与α因子信号肽编码序列一起合成,插入到pAO815质粒中,通过酶切酶连构建含1–6个表达盒的表达质粒,将其转入毕赤酵母GS115菌中,获得ZEN降解酶重组菌株。重组蛋白分子量为28.9 kDa,与预期一致。重组菌用甲醇诱导3 d,蛋白浓度达最高,之后下降;在pH 5.0、4.5条件下诱导培养,表达量最高;每天添加0.8%的甲醇、接种量10%表达水平最高;4拷贝的转化子表达水平最高,三角瓶发酵3 d,酶活性达到10 U/mL。在1 g玉米渣中添加0.1–0.5 mL发酵上清液,水解24 h,玉米渣中ZEN的降解率为44.08%–75.51%。研究结果为ZEN降解酶工业生产及在食品饲料中的应用奠定了基础。