MGMT研究进展

DNA修复酶O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）是机体修复烷基加合物的关键酶,它可以对抗烷化剂造成的DNA损伤,其在肿瘤发生和化疗中所起的作用对于研究肿瘤的发生及治疗均有十分重要的意义。MGMT在不同个体及组织间的表达具有极大的多样性,其表达调控机制是目前人们研究的热点。     

一株受二噁英类化学物质诱导表达的萤光素酶肝癌细胞系

 构建了一对二英类化学物质敏感的人肝癌细胞株 ,用于二英类化学物质生物筛选和快速半定量检测 .首先构建一在二英增强子调控下的萤光素酶报告基因质粒 ,该质粒转染入人肝癌细胞株HepG2 ,筛选稳定转染细胞株 .2 ,3,7,8 四氯代二苯并二英 (TCDD)诱导稳定转染细胞株萤光素酶表达 ,发光检测萤光素酶活性 .该细胞株用于TCDD检测 ,检测下限为 1 1pmol L ,线性范围为 1～ 10 0pmol L .该细胞系的建立可用于二英类化学物质的生物筛选和快速半定量检测     

重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究

采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件.结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光,对非分枝杆菌发光值很低,两者差异有显著性;不同的分枝杆菌发光值有差异：卡介苗的发光值最高,结核分枝杆菌的发光值最低;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40,差异显著.因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌,但Phage 88的效果优于Phage 40.     

原癌蛋白c-Cbl促进受体酪氨酸激酶EphA2的降解

c Cbl最近被证明是泛素 蛋白酶体 (ubiquitin proteasome)通路中的一个新的RINGFinger型泛素连接酶 (ubiquitinligase ,E3) .c Cbl可以介导受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸受体激酶的降解 .利用内源性表达较高EphA2的大肠癌细胞株HCT1 1 6 ,通过转染野生型c Cbl和显性负变异体(dominantnegativemutant)c Cbl 70Z ,探讨c Cbl在EphA2降解中的作用 .结果显示 ,c Cbl可促进磷酸化EphA2的降解 ,EphA2的降解必须依赖其配体ephrin A1的刺激 ;利用蛋白酶体 (proteasome)抑制剂MG1 32可抑制磷酸化的EphA2降解 ,提示EphA2的最终降解部位是在蛋白酶体 .研究的结果提示 ,c Cbl作为泛素连接酶诱导磷酸化后的EphA2在蛋白酶体中降解     

核苷酸切除修复基因XPA反义RNA表达载体的构建及其抑瘤功能

采用RT PCR方法扩增出 4 2 6bp着色性干皮病A(xerodermapigmentosumgroupA ,XPA)cDNA片段 (2～ 4 2 7bp) ,反向插入pcDNA3 1质粒构建XPA反义RNA表达载体 .经测序证实 ,该片段序列与XPAmRNA对应片段完全互补 .通过脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒转染肺癌A5 4 9细胞 ,RT PCR检测表明转染XPA反义RNA重组质粒能够抑制肺癌细胞XPAmRNA表达 ;MTT实验表明转染XPA反义RNA的肺癌细胞对顺铂敏感性增强 .本研究为深入探讨NER途径基因功能及临床克服肿瘤耐药提出了一个新的思路     

固定化酶一化学发光分析法测定葡萄糖和一种新型葡萄糖传感器的研制

本文提出用固定化酶－化学发光分析法测定葡萄糖并在此基础上构建了一种新型葡萄糖传感器。这种传感器系由固定化酶膜,光敏二极管及醋酸纤维滤膜构成。与其他类型的葡萄糖传惑器相比,它具有灵敏度高、响应速度快、工作稳定等特点,其线性工作范围可达4个数量级,检测下限为O．5ppm,可连续测定200个样品,测定结果与邻甲苯胺法所得结果相一致。