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目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性。之后,通过荧光定量PCR检测猪Mx1和牛Mx1在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度。结果:成功克隆了猪Mx1和牛Mx1基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达。从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P0.001)。结论:猪Mx1和牛Mx1基因在PK-15细胞中表达的Mx1蛋白能够抑制PRV在胞内的复制。 相似文献
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对分课堂在生物教学中的效果反馈分析 总被引：1，自引：1，他引：0
PAD(Presentation-Assimilation-Discussion)课堂即对分课堂,是一种突破传统课堂、但又区别于翻转课堂和研讨式教学的新模式,已被列入上海市教委新进教师培训内容和教育部网培中心"卓越教学法"系列,正在被广大教师采用。笔者2015年首次将对分课堂引入高等生物学教学,迄今已分别在专业必修课"微生物学"和通识选修课"改变生活的生物技术"中全程实践,共4个学期。本文分析了关于PAD教学模式的106份有效问卷,给读者呈示出该模式在生物学教学中的应用效果,希望为同行提高课堂教学质量提供一种思路,推荐一种新模式。 相似文献
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目的 为了从一系列旨在降解靶蛋白的化合物中筛选出高效的蛋白质水解靶向嵌合体（PROTAC），本文建立了一个稳定的高通量PROTAC筛选方法。方法 Nanoluc荧光素酶有LgBiT和HiBiT两个亚基组成，通过将HiBiT标签与mCherry（红色荧光蛋白）、目的蛋白、Halo标签融合表达，LgBiT与GFP （绿色荧光蛋白）融合表达，利用GFP与mCherry的共定位情况可直观评价Nanoluc荧光素酶的组装情况，而通过监测Nanoluc的活性可以指示目的蛋白的含量。利用慢病毒包装系统构建稳定过表达GFP-LgBiT和HiBiT-mCherry-Target-Halo的细胞系，使用可募集Halo标签融合蛋白被Cul2-Rbx1-Elo BCVHL复合体降解的Halo PROTAC3诱导HiBiT-mCherry-Target-Halo降解，进一步利用蛋白质免疫印迹（Westernblot）、Nanoluc荧光素酶活性分析系统和流式细胞术分别评价Halo PROTAC3诱导底物降解的效率。结果 Halo PROTAC3高效降解HiBiT-mCherry-Target-Halo，并呈现浓... 相似文献