自发性高血压大鼠中枢5－HT_（1A）受体的特性

本文用放射性配基［３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ的结合实验显示,自发性高血大鼠（ＳＨＲ）海马、下丘脑及低位脑干的５－ＨＴ１Ａ受体结合位点数较正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠为多,其中以海马最为显著;脑干的５－ＨＴ１Ａ受体虽较正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠多,但不太明显。ＳＨＲ下丘脑中５－ＨＴ１Ａ受体除结合位点较正常Ｗｉｓｔａｒ鼠多外,亲和力也有增大。以上结果表明,ＳＨＲ与正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠之间各脑区中５－ＨＴ１Ａ受体的差别可能与高血压病的发生有关。     

神经氨酸酶茎部区域对流感病毒生物学特性的影响

为研究A/Anhui/1/05(H5N1)及A/Ohio/07/2009(H1N1)两株病毒神经氨酸酶(NA)茎部(stalk)区域和半胱氨酸(Cysteine,C)对流感病毒生物学特性的影响。A/Anhui/1/05(H5N1)NA(命名为AH N1)的stalk区域相对A/Ohio/07/2009(H1N1)NA存在20个氨基酸的缺失(其中包括一个半胱氨酸),将A/Ohio/07/2009(H1N1)NA(命名为09N1)的stalk区域的20个氨基酸(命名为s20)缺失构建09N1-s20,相应部分插入至H5N1的NA中构建AH N1+s20。同时为了研究stalk区域半胱氨酸对NA功能的影响,构建了AH N1+C和09N1-C(stalk区域加/减一个半胱氨酸)。运用假病毒颗粒系统研究stalk区域和半胱氨酸对病毒学特性的影响。09N1-C与09H1配对(09H1::09N1-C),其感染力比野生型09H1::09N1增强了8倍;AH N1+C与AH H5配对(AH H5::AH N1+C),其感染力比野生型AH H5::AH N1大幅度降低。09N1-s20与09H1配对(09H1::09N1-s20),其感染力为野生型09H1::09N1的4倍;AH N1+s20与AH H5配对(AH H5::AH N1+s20),感染力为野生型AH H5::AH N1的1/7。09N1-C与AH H5搭配,其感染力是AH H5::09N1的6倍;AH N1+C与09H1搭配其感染力相当低。蛋白聚合研究显示2009H1N1野生病毒的NA蛋白聚合体特征为:二聚体四聚体单体;09N1-C蛋白聚合体特征为:单体为主;09N1-s20蛋白聚合体特征为:单体二聚体。09N1中删除半胱氨酸或敲除s20片段没有改变其蛋白的正常表达。AH N1聚合体特征以单体为主;AH N1+s20蛋白聚合特点为:二聚体单体四聚体;而AH N1+C聚合体特征为二聚体多于四聚体。研究显示:2009H1N1NA茎部区域氨基酸缺失半胱氨酸后,感染力增强;安徽H5N1的NA茎部区域添加半胱氨酸后感染力大幅降低,半胱氨酸的缺失对流感假病毒感染力增强起了重要作用。     

基因体外诱变的一种新方法

在PCR的过程中,采用5溴脱氧尿苷三磷酸（BrdUTP）部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的方法,对克隆的野油菜黄单胞菌的α淀粉酶基因进行了体外诱变。结果表明,BrdUTP浓度越高,诱变越强;浓度越低,诱变越弱。当BrdUTP浓度为dTTP的0.1%时,可以得到最多的正诱变结果。用LBSP鉴别培养基初筛,然后用Yoo改良法测定酶活,仅一轮诱变就获得了其表达产物α-淀粉酶的酶活分别降低了5倍和提高了20倍的两个突变基因。再以后者为PCR模板进行第二轮诱变,从而筛选到了α-淀粉酶的酶活提高40倍的突变体。此诱变方法克服了用碱基类似物在体内诱变由于核酸复制酶等的校正作用而造成诱变无效的难题,并为基因的体外诱变找到了一条新途径。     

高效降解棉酚菌株的选育及脱毒条件的研究

From mildewed cottonseed cake and stock cultUres of mold and yeast We select more than ten strains of yeastS and molds which can degrade cotton Phenol. At last we got four strains which can degrade cotton phenol highly effeted after mutagenized by physical and chemical factors and induced by cotton Phenol. They belong to Candida tropicalis, Torulopsis candida, Aspergillus flavus and ASPergillus niger. By small and medium size fermenfations, the content of dissociated cottom Phenol all reach safe criterion (…     

人源核小体组装蛋白1类似蛋白5（NAP1L5）促进293T细胞增殖

人源NAP1L5为核小体组装蛋白（NAP-1）家族成员,目前功能未知。肝癌研究暗示Nap1l5可能为抑癌基因,抑制细胞增殖;但NAP-1家族其他功能已知的一些成员,可促进细胞增殖和加快周期进程。人源NAP1L5是促进还是抑制细胞增殖,目前未知。本研究里,我们发现过表达Nap1l5促进293T细胞增殖,抑制表达则降低293T细胞增殖速度。细胞周期分析表明：Nap1l5过表达增加G2期、减少G1期细胞比例;抑制Nap1l5表达,则增加G1期、减少G2期细胞比例。我们的研究表明：人源NAP1L5会加快293T细胞周期进程,促进增殖,并且提示原来关于Nap1l5是抑癌基因的推测是不对的。     

解淀粉芽孢杆菌诱变育种及其突变株在降低酱油中氨基甲酸乙酯的应用

【目的】通过诱变育种提高解淀粉芽孢杆菌JY06利用精氨酸的能力,并将其用于降低酱油中的氨基甲酸乙酯及前体,从而提高酿造酱油的安全性。【方法】采用等离子诱变和紫外诱变两种诱变育种方法对解淀粉芽孢杆菌JY06进行突变,应用高通量筛选手段获得具有高精氨酸利用能力的突变株,验证突变株降低酱油中氨基甲酸乙酯的能力。【结果】获得了12株精氨酸利用能力提高的突变株,与出发菌株JY06相比,突变株C12和E6可使酱油中瓜氨酸含量分别降低了15.6%和14.7%,EC的含量分别降低了19.3%和13.1%。【结论】通过等离子诱变和紫外诱变进一步提高了解淀粉芽孢杆菌JY06降低酱油中EC及其前体瓜氨酸的能力,具有控制或减少酱油中生物危害物的应用潜力。     

Beclin-1 shRNA对低氧诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响

目的：构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法：构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-SY5Y细胞;RT-PCR检测Beclin-1的mRNA表达;Western blot检测Beclin-1蛋白表达;CCK-8法测定Beclin-1 shRNA对SH-SY5Y细胞活力的影响。再将空白对照、阴性对照、转染型三种细胞分别以21%常氧及5%低氧培养,Western blot检测各组细胞LC3蛋白表达;电镜观察自噬小体。结果：Beclin-1 shRNA能明显抑制SH-SY5Y细胞Beclin-1的mRNA及蛋白的表达;沉默Beclin-1基因后,Beclin-1 shRNA组细胞存活率与阴性对照组相比无差异;成功建立了稳定表达Beclin-1 shRNA的SH-SY5Y细胞。5%低氧处理后,与阴性对照组相比较,Beclin-1 shRNA组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下调,细胞内自噬小体数量减少。结论：慢病毒介导的Beclin-1shRNA对SH-SY5Y细胞的活力无影响,但可以抑制低氧诱导的自噬。     

重组大肠杆菌全细胞催化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪

2,5-二甲基吡嗪(2,5-dimethylpyrazine,2,5-DMP)在食品香料与医药方面具有重要的经济价值,工业上普遍采用环境不友好且反应条件苛刻的化学合成法来生产.文中结合代谢工程和辅因子工程策略设计高效催化L-苏氨酸合成2,5-DMP的全细胞催化剂,实现微生物转化法合成2,5-DMP.本研究首先分析了不同...     

Sulfolobus acidocaldarius DHH超家族核酸酶Saci0542的酶学特征研究

【目的】以嗜酸嗜热硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius的DHH超家族核酸酶（Saci0542）为例,研究其核酸外切酶活性特点,为阐明其在DNA代谢中的具体功能提供生化基础。【方法】将嗜酸嗜热硫化叶菌DHH超家族核酸酶Saci0542基因在大肠杆菌中重组表达,经亲和层析纯化得到电泳纯的重组蛋白;利用荧光标记的寡核苷酸作为底物,用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,鉴定Saci0542的酶学特征。【结果】重组表达的DHH超家族核酸酶Saci0542具有典型的单链核酸特异性的3’-5’外切酶活性。进一步酶学特征表征结果如下:酶活性依赖于二价金属离子Mn²⁺,而Ca²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺等二价金属离子对活性没有明显的促进作用;Saci0542在pH5.5–10的广泛范围内均表现出较高酶活性;高于200 mmol/L的NaCl强烈抑制酶活性;最适反应温度为50–55℃;末端磷酸基团抑制3’-5’外切酶活性。【结论】本研究证实,Saci0542是一种Mn²⁺依赖型3’-...     

大鼠杏仁核5-HT_3受体参与免疫调制

实验通过大鼠侧脑室和杏仁核给予 5 HT3受体激动剂 1 phenylbiguanide (PBG) ,用 3H TdR掺入法测定脾细胞丝裂原 (concanavalinA ,ConA和lipopolysaccharide ,LPS)刺激增殖效应 ,用活化脾细胞增殖法测定IL 2生成 ,MTT法测定自然杀伤 (naturalkiller,NK)细胞活性和用放射免疫测定血浆皮质酮水平 ,以探讨大鼠杏仁核 5 HT3受体在免疫调控中的作用。结果表明 :5 HT3受体拮抗剂granisetron (GNT ,0 1～ 0 4mg/kgip)剂量依赖地增强ConA和LPS刺激的脾细胞增殖 ,作用在连续给药 5d最明显 ;双侧脑室给予PBG ( 5 μg/side)可增强ConA和LPS刺激的脾细胞增殖效应 ,作用在连续给药 3d最明显 ;双侧和单侧中央杏仁核给予PBG 0 5 μg均增强ConA刺激的脾细胞增殖和IL 2生成 ;底内侧杏仁核给予同剂量PBG仅增强LPS刺激的脾细胞增殖效应 ,不影响ConA刺激的脾细胞增殖和IL 2生成 ;中央杏仁核给予PBG升高血浆皮质酮的作用较底内侧杏仁核给予等量PBG引起的升高血浆皮质酮作用明显 (P <0 0 1)。侧脑室、中央杏仁核和底内杏仁核给予PBG对丝裂原刺激的脾细胞增殖效应影响不同 ,但均被同时同部位给予GNT所拮抗 ,提示杏仁核中央核和底内侧核的 5 HT3受体可能以不同方式参与ConA或LPS刺激的脾细胞增殖效应的调制