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【目的】克隆药用真菌猪苓MAPK基因并进行生物信息学分析及表达模式研究。【方法】利用5′-RACE-PCR技术从猪苓菌丝中克隆得到MAPK基因全长,利用生物信息学软件推测蛋白的理化性质、结构域;DNA Star对氨基酸进行多序列比对;用MEGA 5.0做进化关系分析;借助实时定量PCR检测基因表达模式。【结果】猪苓MAPK基因的全长cDNA为1 293 bp,其中编码区占1 161 bp,共编码386个氨基酸,推测分子量为43.872 kD,理论等电点为6.68。猪苓的MAPK有MAPK中ERK1/2类型的保守区。系统进化树结果显示猪苓MAPK蛋白属于担子菌类群。实时荧光定量PCR分析结果表明猪苓菌核形成初期,菌核中的MAPK表达量显著高于菌丝组织,随着菌核的快速生长而减少。【结论】猪苓MAPK基因PuMAPK的分子特征为进一步研究其在猪苓菌丝形成菌核过程中的作用奠定基础。 相似文献
73.
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目的观察凋亡抑制因子Livin和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在乳腺癌组织中的表达,探讨其表达的临床意义。方法随机选取70例乳腺癌和对照组的30例癌旁组织蜡块标本,应用免疫组织化学技术检测Livin和p-p38MAPK蛋白的表达及细胞内定位,分析其表达与乳腺癌患者临床病理相关指标之间的关系。收集手术切除的20例新鲜乳腺癌和其相对应的癌旁组织标本,运用免疫印迹(Western blot)技术进一步定量检测Livin和p-p38MAPK蛋白的表达水平。并应用统计学软件Spearman等级相关检验分析Livin和p-p38MAPK蛋白表达的相关性。结果免疫组织化学结果显示,Livin、p-p38MAPK分别在64.3%(45/70)和57.1%(40/70)的乳腺癌组织中阳性表达,其阳性率均显著高于对照组的癌旁组织(P0.05)。并且Livin、p-p38MAPK蛋白表达均与乳腺癌患者的不同TNM分期、有或无腋窝淋巴结转移密切相关(P0.05)。Western blot亦进一步证实,Livin、p-p38MAPK蛋白在乳腺癌中的表达水平亦均高于其相对应的癌旁组织(P0.05)。此外,Livin与p-p38MAPK蛋白表达呈正向相关性(r=0.318,P=0.008)。结论 Livin、p-p38MAPK蛋白的表达在乳腺癌的发展演进过程中可能起着不可忽视的作用,并且两者可能存在一定的调控关系。 相似文献
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小麦TaMAPK2激酶基因的原核表达以及多克隆抗体制备 总被引:1,自引:0,他引:1
MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子.为了研究小麦MAPK基因的功能,苯试验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2.为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体,TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体 pET-28a-(+)上,表达融合蛋白His-antiMAPK2.在终浓度为1 mmol/L IPTG诱导1h的条件下,融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大.通过蛋白标记亲和层析柱(HisTrapTMHP)得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白.利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体,ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测,效价为1:80000,能满足后续试验要求的效价值,为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础. 相似文献
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目的:观察青藤碱对慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠炎症反应及P38Mapk信号通路的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组、青藤碱高、低剂量组。对照组组给予生理盐水灌胃,青藤碱低、中、高剂量组分别给予青藤碱40,80、160mg/kg灌胃,28天后处死。realtimeRT-PCR法和westernblot法检测肿瘤组织中TNF-、IL-6rnR_NA和TNF-、IL-6、P—P38MAPK蛋白的表达。结果:青藤碱能明显降低慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠前5,1腺组织中TNF-、IL-6mRNA和TNF-、IL-6、p-P38MAPK蛋白的表达。结论:青藤碱能抑制慢性非细菌性大鼠前列腺炎大鼠前列腺炎症反应,其机制可能与抑制P38MAP信号通路有关。 相似文献
77.
C-藻蓝蛋白具有抗癌、抗氧化、抗炎活性等多种功能,然而其对乳腺癌细胞的抗癌作用及机制尚不明确。本研究应用不同浓度(0~500μg/mL)的C-藻蓝蛋白处理人乳腺癌细胞系MDA-MB-468。研究显示,C-藻蓝蛋白以剂量依赖性方式抑制MDA-MB-468细胞的增殖并降低细胞的菌落形成能力。C-藻蓝蛋白通过上调了Fas和cleaved-caspase 3的表达并下调Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。C-藻蓝蛋白处理以剂量依赖性方式显著降低COX-2的表达并抑制细胞迁移能力。C-藻环蛋白以剂量依赖性方式促进p38 MAPK和JNK的磷酸化,p38 MAPK和JNK抑制剂处理可显著抑制C-藻红蛋白诱导的细胞死亡。本研究表明C-藻蓝蛋白能够抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移能力。C-藻蓝蛋白的抗癌机制可能与激活p38 MAPK和JNK信号传导有关。 相似文献
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中华哲水蚤(Calanus sinicus)对浮游植物和微型浮游动物的摄食速率估算 总被引:1,自引:0,他引:1
2005年4月27日至5月30日在东海有害藻华高发区的6个典型站位采样,结合稀释法实验和Frost的直接计量法研究了中型浮游动物对浮游植物和微型浮游动物群落的现场摄食速率,并对中华哲水蚤(Calanus sinicus)的食物组成、中型浮游动物和微型浮游动物对浮游植物群落的摄食压力进行了估算。研究结果表明春季调查区:中华哲水蚤对浮游植物的物种比摄食率介于0.01~8.43d-1,平均值为(2.72±2.14)d-1。中华哲水蚤对浮游植物的物种摄食速率介于0.05~838.23cells ind.-1d-1,平均值为(52.72±154.21)cells ind.-1d-1,对几种有害藻华原因生物的摄食速率较高。中华哲水蚤对浮游植物物种摄食速率具有食物密度依赖性,在低浮游植物丰度下,其摄食速率会随着浮游植物丰度的增加而增加,达到一定阈值后随着浮游植物丰度增加而逐渐降低。中型浮游动物群落对浮游植物群落碳摄食速率介于0.53~4.97ngC L-1d-1,平均值为(2.16±1.63)ngC L-1d-1。微型浮游动物对浮游植物群落物种平均碳摄食速率介于0.04~13.20ngC ind.-1d-1,平均值为(2.91±5.22)ngCind.-1d-1。微型浮游动物群落对浮游植物群落碳摄食速率介于61.07~8632.85ngC L-1d-1,平均值为(2801.01±4198.46)ngC L-1d-1。分析比较中型浮游动物和微型浮游动物对浮游植物现存量摄食压力表明,海区中微型浮游动物的摄食压力要远高于中型浮游动物,介于95.59%~99.98%,平均值为97.88%±2.33%。调查海区中型浮游动物还通过对微型浮游动物的摄食影响浮游植物生长。 相似文献
80.
基于酵母S.cerevisiae的生物学实验数据,建立了由Scaffold介导的酵母交配、侵入生长和应力-应答的MAPK(mitogen activated protein kinase,丝裂原活化蛋白激酶)级联信号转导网络的数学模型.利用简化的包含交配和侵入生长两条通路的非线性动力学模型,定量分析了三个关键性的特性:信号的专一性、信号的振幅和信号的延迟;考查scaffold及其复合物的反应率如何影响信号转导的效率,研究表明:Scaffold蛋白对信号专一性和信号振幅有较大的影响,而信号的延迟(特别是平衡状态时)主要由去磷酸化或降解反应率来控制. 相似文献