表达CCRSDelta32基因对人外周血单核细胞增殖功能的影响

目的:在人外周血单核细胞(PBMC)内表达CCR5Delta32基因,研究是否对该细胞增殖功能产生影响.方法:构建pLenti-CCRSDelta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒,将其转染PBMC,荧光显微镜观察转染情况,Western blot鉴定目的蛋白的表达;分别用植物血凝素(PHA)及破伤风类毒素(TTD)刺激培养经转染的靶细胞,采用M1tr比色法测定其增殖功能是否受影响.结果:构建了pLenti-CCRSDelta32慢病毒载体,经包装后产生重组慢病毒,滴度约为5×106TU/mL.将其转染PBMC,观察到约半数PBMC胞浆内有绿色荧光蛋白表达,经Westem blot进一步鉴定为目的蛋白;转染的靶细胞经PHA或TTD刺激培养后,有着与正常PBMC相似的增殖功能.结论:构建了重组慢病毒并将其转染PBMC靶细胞,为获得性免疫缺陷综合征的基因治疗研究奠定了基础.     

小鼠RHOX5蛋白两种截短型突变体的原核表达及其与MDFIC互作的鉴定

目的：表达和纯化两种小鼠RHOX5蛋白的截短型突变体,确定完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。方法：生物信息学分析小鼠同源异型框蛋白RHOX5的cDNA序列,分别对RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C进行PCR、分别扩增RHOX5的两种截短型片段RHOX5 N和RHOX5 C并将其克隆至pGEX4T3原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒分别转化大肠杆菌RosettaTM2(DE3)菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione-Sepherase 4B颗粒对融合蛋白进行小批量亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳分离目标蛋白,确定融合蛋白的表达。进行GST-pull down实验,检测完整的RHOX5蛋白及其两种截短型突变体与MDFIC蛋白结合的能力。 结果：在大肠杆菌RosettaTM2(DE3)中有效地实现了GST-RHOX5、GST-RHOX5 N和GST-RHOX5-C-3种融合蛋白的可溶性表达;经Glutathione Sepherase 4B颗粒亲和纯化后,获得了纯化后GST融合蛋白;GST-pull down实验证实,含有homeodomain的RHOX5蛋白和RHOX5C截短型突变体可以与MDFIC蛋白相结合,而RHOX5N截短型突变体则丧失了与MDFIC蛋白结合的能力。 结论：实现了RHOX5及其两种截短型突变体的原核表达和纯化,证实RHOX5蛋白的homeodomain结构域是其与MDFIC结合的关键部位。     

灵芝多糖对顺铂引起的呕吐具抑制作用

以雄性昆明小鼠为实验材料,研究灵芝多糖对顺铂引起呕吐的抑制作用。实验分为5组,生理盐水+生理盐水组:腹腔注射0.9% NaCl两次,格拉司琼+顺铂组:腹腔注射格拉司琼和顺铂,生理盐水+顺铂组:腹腔注射0.9% NaCl和顺铂,灵芝多糖+生理盐水组:腹腔注射灵芝多糖和0.9% NaCl,灵芝多糖+顺铂组:腹腔注射灵芝多糖和顺铂,两种成分的注射间隔为30min。上述处理每天1次,连续5d,比较各组小鼠对高岭土的摄取量和脑内Fos蛋白表达水平。结果显示:顺铂可增加小鼠高岭土摄取量和脑内Fos蛋白表达水平,而格拉司琼和灵芝多糖可减少小鼠对高岭土的摄取量并降低脑内Fos蛋白表达水平。因此认为灵芝多糖可有效抑制顺铂引起的恶心呕吐。     

通过发掘潜在需求止吐药市场不断扩大

以前止吐药的市场基本是以5-羟色胺（Serotonin）受体拮抗药为中心的。以消除抗癌药物使用后的呕吐为目标的新药开发进程加速,出现了如Aprepitant等具有新作用机理的药物。通过发掘潜在的需求止吐药市场将有望进一步扩大。[编者按]     

简单INDEL编码与其它空位编码方法的比较

不同的系统发育重建算法以不同的方式编码空位,但是不同的编码方式对系统发育分析结果的影响并不清楚.介绍了一种新的空位编码方式--简单indel编码,并将它与将空位编码成丢失的数据和编码成第5性状作了比较.统计分析表明,简单indel编码的确比将空位编码成丢失的数据更有效,但是与将空位编码成第5性状相比两者结果差异不大.而且,随着空位含量的降低,简单indel编码发挥的作用也减少.     

5-氨基乙酰丙酸对秋冬季大棚西瓜叶片光合作用及抗氧化酶活性的影响

以秋冬季塑料大棚中盆栽西瓜幼苗为材料,研究了50~200 mg/L 5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理对低温弱光条件下西瓜植株光合特性、碳水化合物积累、抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,外源ALA处理显著提高了西瓜幼苗叶片净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)。ALA处理还显著提高了叶片SOD和POD等抗氧化酶活性,但对CAT及APX活性影响不大,暗示ALA处理可能主要通过提高植株SOD和POD活性来促进西瓜幼苗活性氧代谢,从而保护细胞光合性能。处理后30 d分析表明,ALA处理植株干物质重量比对照高出42%~54%,淀粉含量增加62.2%~207.0%,可溶性糖含量也增加32.0%~87.1%。以上结果说明,ALA处理可以增强低温弱光条件下西瓜幼苗抗氧化系统活性,促进光合作用与光合产物积累,并促进植株生长。     

抑制剂尿素施用对芹菜生长和品质的影响

在盆栽条件下,研究了添加硝化抑制剂双氰胺、硝化抑制剂3,5-二甲基吡唑、硝化抑制剂双氰胺与脲酶抑制剂氢醌组合的尿素(D-U、DMP-U、H-D-U)对芹菜生长及硝酸盐含量等影响。结果表明,施用抑制剂尿素能提高芹菜的地上部干重及其占总生物量的比例,降低芹菜叶、茎中的硝酸盐含量,提高芹菜叶、茎中的维生素C、氨基酸和粗蛋白的含量。H-D-U对减少芹菜体内的硝酸盐累积具有最明显的效果。     

苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及stat3、stat5基因的影响

观察苦参碱对SMMC-7721细胞增殖、凋亡及stat3s、tat5基因的影响。用MTT法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,双荧光染色观察细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测stat3s、tat5基因的表达。结果发现苦参碱有抑制细胞增殖促进凋亡的作用,并呈时间剂量依赖性;不同浓度苦参碱作用于SMMC-7721细胞后stat3s、tat5的mRNA水平明显下调(P<0.01),其中高浓度苦参碱的作用更强。苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与下调stat3s、tat5的基因表达有关。     

逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒配基因的真核表达

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在PK-15细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的PK-15细胞腹腔免疫Balb/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。     

5'-核苷酸的合成方法比较

5'-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途.比较了目前5'-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法.