目的基因全长cDNA合成及克隆技术进展

在基因克隆、基因功能和表达调控研究中 ,获得目的基因尤其是表达丰度低的基因全长cDNA仍然是一个技术难题。本文对近年来有关反转录过程中影响全长cDNA合成的因素与对策的研究进行了总结 ,特别对消除mRNA二级结构阻碍的方法及其效果、较高反应温度和金属离子对模板mRNA完整性的影响、RNA分子伴侣在反应温度不变的情况下改善cDNA第一链质量的效果等作了较为详细的介绍。此外 ,还介绍了确保具有完整5′端的cDNA进入后续研究的几种新方法。     

两种包装市售冷却牛肉中微生物多样性的比较分析

本文比较分析了相同销售条件下的未包装冷却牛肉与保鲜膜包装冷却牛肉中的微生物群落结构。采用16S rDNA的V3区片段进行PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳), 同时利用16S rDNA全长序列, 通过克隆文库技术对两个样品的微生物群落结构进行研究。研究发现: 微生物群落结构表现出较大的差异。保鲜膜包装冷却牛肉共有6个OTU (Operational taxonomic unit), 主要为Lactococcus(乳球菌属, 28%), Lactobacillus(乳杆菌属, 26%), Carnobacterium(肉品杆菌属, 18%)和Brochothrix(索丝菌属, 10%); 未包装冷却牛肉则共得到18个OTU, 主要是Lactococcus(乳球菌属, 28%), Brochothrix(索丝菌属, 18%)和Acinetobacter(不动杆菌属, 11%)。结果表明, 保鲜膜包装对于葡萄球菌属以及冷杆菌属等一些细菌都起到了一定的抑制作用。本研究为肉类加工生产中微生物的控制提供一定的理论依据。     

原核启动子文库构建的研究进展

启动子是在转录水平上调节基因表达的关键元件，启动子文库广泛应用在代谢工程和合成生物学专业中，主要用于调节基因表达和优化代谢物生物合成。运用启动子对多基因通路中的基因表达进行合理和精确控制，可显著影响代谢通量分布，优化特定目标代谢物的合成。因此，国内外已有大量关于鉴定天然启动子，构建和设计组成型、诱导型、杂交启动子或人工合成启动子文库的研究。文章简要介绍原核启动子的结构和功能，对基于生物信息学的启动子预测和识别及人工构建启动子文库策略的最新进展进行了归纳总结，以期为原核微生物的代谢工程和合成生物学应用提供帮助。     

基于SSH技术的青稞低温诱导cDNA文库的构建(简报)

青稞（Hordeum vulgare L．var．nudum HK．f）．因其果实成熟后可从颖壳中脱落．所以又称裸大麦（hulless barley）．是一种禾本科作物，主要分布于青藏高原地区。由于海拔高，其生长环境的温度相对较低。在青稞生长期间．经常出现霜冻以及雪、雹等天气，夜间温度往往低于0℃，但青稞仍生长良好。因此．青稞具有较强的抗低温胁迫的遗传特性．是一个潜在的遗传资源库。研究开发这些抗低温相关基因及其调控机制将具有重要的理论和实践意义．     

人类特定染色体DNA文库的建立和利用（续）

四、克隆 1.DNA分离和克隆:分选出的染色体(0.2—1.0×10~6)是克隆的原材料,在低浓度时还要离心浓缩。(Los Alamos实验室用多胺法分离染色体,浓缩容易丢失DNA,因此不进行这一步,而是在分选缓