一株金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

摘要：【目的】由于金黄色葡萄球菌（金葡菌）小菌落突变株（small colony variants,简称SCVs ）可引起持续复发性感染,且对氨基糖苷类有抗药性,在临床诊断和治疗上造成很大的困扰。我国国内尚无金葡菌SCVs的报道,本研究旨在分离鉴定出金葡菌SCVs菌株,为国内进行SCVs的相关研究提供生物学材料。【方法】通过细菌的形态鉴定、种特异性基因（nuc）的PCR扩增鉴定以及系列生化实验,从人源、动物源及环境源共104株金葡菌分离株中筛选得到金葡菌SCVs,并通过甲萘醌、硫胺素、胸腺嘧啶和血红素等补     

新抗菌靶点分选酶基因（srtA）在两种原核载体中的克隆表达

【目的】革兰氏阳性菌的表面蛋白在病原菌致病性方面具有重要作用,表面蛋白锚定到细胞壁过程的关键酶—分选酶成为抗感染的新靶点。【方法】本文利用GenBank中的分选酶A基因（srtA）序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得618 bp的DNA片段。按照常规分子克隆操作成功构建两种原核表达载体pet22-srtA和pTRX-srtA,转入大肠杆菌感受态BL21（DE3）中,在1 mmol/LIPTG诱导下进行表达。利用SDS-PAGE和western blot进行鉴定和分析,【结果】结果显示：(1)重组载体pet22-srtA和pTRX-srtA分别表达出相对分子量为约45 kDa和39 kDa的外源蛋白;【结论】（2）分子伴侣硫氧还蛋白（Trx）有利于分选酶A基因的可溶性表达。该实验为后续的分选酶酶学性质研究特别是抑制剂筛选研究奠定良好基础。     

利奈唑胺治疗儿童社区获得性金黄色葡萄球菌肺炎的临床疗效分析

目的:分析儿童社区获得性金葡菌肺炎应用利奈唑胺的临床疗效.方法:选择2008-1-1至2009-3-1在青岛大学医学院附属医院普通儿科及青岛市儿童医院诊断社区获得性金葡菌肺炎患儿22人为研究对象,分析其体温、咳嗽、肺部罗音、住院时间等临床资料.结果:患儿的平均住院时间为13.0±2.26天,有效率100%,不良反应发生率4.55%.结论:利奈唑胺治疗儿童社区获得性金葡菌肺炎有较高的临床治愈率,可快速改善症状.缩短住院时间.     

治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的抗体药物

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA) 作为超级细菌的典型代表,严重威胁人民群众的健康。目前经典的抗生素治疗和疫苗主动预防都无法有效控制MRSA的感染。近年来,随着抗体药物产业的兴起,诸多药物研发公司和研究人员致力于研究治疗性抗体,以期控制MRSA的感染并已经取得了很多突破。就治疗MRSA感染的抗体药物研究进展作一简要综述。     

金黄色葡萄球菌溶血素的研究进展

金黄色葡萄球菌简称金葡菌,是一类革兰阳性需氧或兼性厌氧菌,可导致化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等局部感染,以及败血症、脓毒血症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决其产生的毒素和侵袭性酶,其中溶血素已经成为该细菌的一个重要致病因子。本文对金黄色葡萄球菌溶血素的分子特征、作用机制、免疫预防及临床应用方面的研究进展进行综述。     

金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起食物中毒的重要致病菌。为简化金黄色葡萄球菌复杂的检测方法,并了解舟山市水产品中该致病菌的污染状况,通过比较已公开的3套针对耐热核酸酶编码基因的PCR鉴定体系,根据特异性和灵敏性实验筛选了1套最优的针对金黄色葡萄球菌的PCR鉴定体系。基于这一体系和国家规定的标准方法,对舟山市水产品加工厂各个环节采集的120份样品中金黄色葡萄球菌的污染状况进行了调查。结果显示,120份样品中金黄色葡萄球菌的检出率为8.3%,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较无显著差异,而且集中在原料和环境这两个环节检出金黄色葡萄球菌,在半成品和成品中却未检测到。由此,可以认为舟山市水产品加工厂的原料和环境中存在着一定的安全隐患,而成品相对较为安全。     

金黄色葡萄球菌hmp基因缺失突变株的构建及抗一氧化氮能力分析

摘要：【目的】:构建金黄色葡萄球菌RN6390黄素血红蛋白(flavohaemoglobin, HMP)基因缺失突变株,研究其抗一氧化氮(Nitric Oxide, NO) 能力及其在细菌生物被膜形成中的作用。【方法】：根据同源重组技术的原理,利用PCR扩增RN6390的hmp基因上下游同源臂,经过抗生素和温度交替培养筛选hmp基因缺失突变株,利用基因组PCR、定量PCR对突变菌株进行鉴定。以硝普钠（SNP）为NO供体,检测了hmp基因缺失菌株的抗NO能力,并初步研究了hmp基因在生物被膜形成中的作用。【结果】：成功构建了RN6390的hmp基因缺失突变株,外源NO能够诱导菌株hmp基因的表达,hmp基因缺失菌株抗NO能力明显下降,但其生物被膜形成能力有明显提高。【结论】：获得了RN6390的hmp基因缺失突变株,该突变株的获得为进一步研究hmp基因的生物功能,以及细菌内源性NO的作用奠定了良好的技术平台。     

基于免疫磁分离的三重荧光定量PCR检测食品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌

【目的】开发一种同时对食品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌快速、灵敏、准确的检测方法。【方法】利用特异性免疫磁球,在37°C条件下从250 m L猪肉增菌液体系中边富集边循环捕获目标菌。快速提取DNA后,利用特异性的引物与探针,对3种食源性致病菌进行三重荧光定量PCR检测。【结果】针对沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的检测限分别达到2.0、6.8和9.6 CFU/g。方法总体灵敏度、特异性和准确度达到99.2%、100%及99.5%。对151份实际样品进行检测,与国标(GB/T 4789.4-2010、GB 4789.5-2012和GB/T4789.10-2010)方法的检测结果相比,金黄色葡萄球菌有一例阴性偏差。【结论】开发的基于免疫磁分离的三重荧光定量PCR方法,能够在8 h内完成对食品中3种致病菌检测,并且灵敏度高、特异性好、检测准确,可以作为快速应对此类食品安全突发事件的检测手段。     

Effect of site-specific PEGylation on the fibrinolytic activity,immunogenicity, and pharmacokinetics of staphylokinase

The bacterial plasminogen-activator staphylokinase （Sak） is a promising thrombolytic agent for treating acute myocar- dial infarction. To effectively reduce the immunogenicity of Sak while maintaining its fibrinolytic activity, site-specific PEGylation was performed in the present study. The che- moselective cysteine PEGylation site was selected within an immunodominant region （amino acid residues 71-87） using an in sUico approach. The PEGylated Sak variants pre- pared in this study showed a purity of 〉97.0%. PEGylation at Position 80 resulted in a Sak variant Sak（E80C-PEG） which has similar fibrinolytic activity and thermostability compared with the native recombinant staphylokinase （r-Sak）. The immunogenicity of Sak（E80C-PEG） in guinea pigs was greatly reduced compared with the native r-Sak. Furthermore, preliminary pharmacokinetic results sug- gested that the plasma clearance of Sak（E80C-PEG） from the blood stream of rabbit was significantly decreased com- pared with that of r-Sak, resulting in a 2.8-fold increase of initial half-life and a 3.8-fold increase of systemic availabil- ity. In summary, these results demonstrated that site-specif- ic PEGylation yielded a novel Sak variant Sak（E80C-PEG） with remarkable advantages over the unmodified Sak.