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991.
胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究GDNF在神经系统中的生物学功能,通过RT-PCR方法从大鼠睾丸总RNA中扩增出GDNFcDNA全序列,序列分析表明与GenBank中的顺序完全相同.将GDNFcDNA以非融合方式连接在真核表达载体pEGFP-NⅠ的绿色荧光蛋白的上游,在CMV启动子控制下表达.通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明GDNFcDNA能在真核细胞HeLa中很好表达.采用裸DNA转染方法研究GDNF对损伤的坐骨神经的修复作用,在雏鸡出生后3h切断其右侧坐骨神经,将pEGFP-GDNF与Lipofectin的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内,5d后追补一次.20d后进行实验检测,观察到GDNFcDNA的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内[L4-L6]运动神经元的大量死亡,并显著促进了切断坐骨神经的再生. 相似文献
992.
为了探讨人跨膜型和跨膜稳定型肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)对脑恶性胶质瘤基因治疗的有效方法 ,研究应用了基因重组、细胞培养以及免疫组化等技术 ,通过真核表达载体 pc DNA3转染 NIH3T3细胞 ,并在体外观察了 TNF- α对脑胶质瘤生长的影响。结果显示 :与对照组相比 ,TM- TNF- α组和 TM- TNF- αm组中 GFAP和 S- 10 0免疫反应阳性肿瘤细胞的数量、胞体截面积、周长、平均光密度皆明显减少。统计学分析提示差异有显著性意义。这表明 TNF- α基因的表达可明显抑制胶质细胞的生长和分化。而且 ,还发现跨膜稳定型 TNF- α的杀瘤效果较跨膜型 TNF- α强。这为 TNF- α基因用于胶质瘤的基因治疗提供了一定的实验依据 ,提示大剂量的 TNF- α在临床治疗可能产生毒副作用。 相似文献
993.
994.
人血管内皮生因子受体配体结合域 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的人血管内皮生长因子受体(Flt-1)cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3、1-3个环,应用酵母双杂交系统对Flt-1的配体结合域进行了研究,结果表明不仅其胞外1-3环能与hVEGF165结合,比其更小的片段2-3环也具有与配体结合的能力。进一步构建了重组表达质粒pPIC9K/Flt-1(1-3)和pPIC9K/Flt-1(2-3),转化Piv 相似文献
995.
反义寡核苷酸pH敏前体脂质体的制备及性质分析 总被引:4,自引:0,他引:4
为了提高反义寡核苷酸的稳定性和生物利用度及避免在溶酶体内降解,采用旋转蒸发-薄膜水化、超声-挤压、冻干三步法完成pH敏前体脂质体的制备,研究了体外释药规律;以反义寡核苷酸为实验对象,测定了包封率.制得的pH敏前体脂质体复水后形成的pH敏脂质体形态圆整,粒径12.3~389.9 nm范围内,平均粒径为22.7 nm;三批pH敏脂质体的平均包封率为68.3%;体外释药方程为Q=1.8382-2.5186×10-2T (r=0.9913);结果说明制备的pH敏前体脂质体水合形成的pH敏脂质体粒度适宜,可用于反义寡核苷酸的包封. 相似文献
996.
利用体外定点突变技术获得SypY279F,Y304F和Y546F突变的cDNA,将这些突变体和野生型Syp分别构pXM真核表达载体,转入K562细胞,经Western印迹证明,各转染K562细胞中都有Syp蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现WT,Y279F,Y304F和Y546F等4种Syp在胞内均能直接与Bcr-Abl结合,体外结合实验结果表明Y304F突变导致了Syp不能与Shc结合,T2 相似文献
997.
998.
The P2X3 receptor plays a vital role in sensory processing and transmission. The assembly and trafficking of the P2X3 receptor are important for its function in primary sensory neurons. As an important inflammation mediator, ATP is released from different cell types around primary sensory neurons, especially under pathological pain conditions. Here, we showthat α, β-MeATP dramatically promoted membrane delivery of the P2X3 receptor both in HEK293T celts expressing recombinant P2X3 receptor and in rat primary sensory neurons. α, β-MeATP induced P2X3 receptor-mediated Ca^2+ influx, which further activated Ca^2+/calmodulin-dependent protein kinase Ilec (CaMKIIα). The N terminus of the P2X3 receptor was responsible for CaMKIleα binding, whereas Thr38s in the C terminus was phosphorylated by CaMKIIα. Thr^388 phosphorylation increased P2X3 receptor binding to caveoUn-1. CaveoUn-1 knockdown abrogated the α, β-MeATP-induced membrane insertion of the P2X3 receptor. Moreover,α, β-MeATP drove the CaMKIlec-mediated membrane coinsertion of the P2X2 receptor with the P2X3 receptor. The increased P2X3 receptors on the cell membrane that are due to Thr388 phosphorytation facilitated P2X3 receptor-mediated signal transduction. Together, our data indicate that CaMKIIoL and caveoUn-1 cooperate to drive Ugand-induced membrane delivery of the P2X3 receptor and may provide a mechanism of P2X3 receptor sensitization in pain development. 相似文献
999.
电脉冲作用将外源基因导入稀有ju鲫精子的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
将稀有ju鲫(Gobiocypris rarus)精子与重组质粒pGAhLFc线性DNA混合温育,经电脉冲处理后与卵子受精,孵化出苗。从鱼苗中提取DNA,经PCR检测,25.5%~66.7%鱼苗带有外源基因。在显微镜下观察经电脉冲处理过的精子,发现其活力有不同程度下降,受精率也有不同程度下降,说明不同的电脉冲条件对精子有不同程度的损害作用。精子与外源DNA混合温育,经电脉冲处理后,用DNA外切酶消化后,提取精子DNA,经PCR检测,仍有阳性电泳带,证明电脉冲可以促使稀有ju鲫精子摄入外源基因。 相似文献
1000.
本文旨在建立适合国境口岸现场应用的生物恐怖防控快速检测方法,从而保障口岸安全.针对生物恐怖炭疽芽胞杆菌,选择目标菌种特异性基因片段,设计引物,运用环介导等温扩增(LAMP)技术建立一套简便、高效的检测方法,并模拟生物恐怖炭疽芽胞杆菌可能存在的基质条件,评价LAMP技术在快速筛查中的适用性.结果显示,LAMP技术排查生物恐怖炭疽芽胞杆菌简便、快速、特异,检测灵敏度为102~103 CFU/ml;且能有效检出在偏酸、偏碱及黏稠基质中的炭疽芽胞杆菌.而高盐环境对该反应影响较大,有必要采用能有效去除盐分的核酸抽提方法. 相似文献