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31.
中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变和6-巯基鸟嘌呤(6-TG)选择,得到稳定的次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)缺陷细胞株,酶活性仅为野生型的6.5%。用磷酸钙共沉淀法和电脉冲法向HPRT-细胞转移人宫颈癌细胞(HeLaS_3)基因组DNA,纠正了CHO细胞的HPRT缺陷。酶活性提高了6.9倍,达到野生型的45%。用Alu序列探针进行分子杂交,证实经过基因转移并连续传代15次以上的受体细胞中含人DNA序列。表明人的有关基因已稳定地整合到CHO细胞的染色体中。 相似文献
32.
33.
质粒YRP7用氯霉素法扩增,碱变性裂解法提取,酸酚法及核糖核酸酶纯化后,得到了高产量(5.6mg/L培养液),高纯度(A260:A280=2.0)的质粒制品,经转化实验及酶切分析确定YRP7具有下列特征:大小为5.41±0.10kb,可赋予宿主细胞AmP~r、Tet~r的表型,对大肠杆菌C600的转化频率为10~(-6)、转化效率为1.5×10~6转化子/mgDNA。限制性内切酶BamH Ⅰ、ECoRⅠ、Hind Ⅲ及PstⅠ在其分子上的切点数分别为1、2、2、2,并确定了各酶切片段的分子大小,对BanHⅠ的单切点,经插入失活法证实其位于Tet~r的基因上。由上述特征可确定,质粒YRP7是一个比较理想的克隆载体。 相似文献
34.
35.
大豆灰斑病抗性遗传的三点测交分析 总被引:1,自引:0,他引:1
本实验利用三点测交分析的方法, 对3个组合在人工接种大豆灰斑病菌的条件下的抗性表现进行基因效应分析,各组合均存在加性,组合1存在显性,组合2、3存在上位性。
Abstract:In this paper,Triple Test Cross Design was used in studing the resistance of soybean to 10 physiological race of Cercospora Sojina Haraby inoculation.Results o analysis of gene effects of resistance indicated that additive effect is significant in all the three crosses,dominant effect exsists only in the cross 1 and epistatic effect remains in the cross 2 and cross 3. 相似文献
36.
快速鉴定重组质粒菌落的新方法董北阎锡蕴(康奈尔大学医学院医学系,纽约)(中国科学院微生物研究所,北京100080)筛选含重组质粒菌落常用的方法有探针杂交、小规模制备质粒DNA进行限制酶切鉴定、。互补及插人失活。我们在此介绍一种新方法,即半菌落PCR扩... 相似文献
37.
38.
大鼠卵巢绒毛膜促性腺激素受体在CHO中的表达和扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了利用二氢叶酸还原酶放大系统将大鼠LH/hCG受体(记为F-hCGR)及其胞外肽段(记为T-hCGR)在中国苍鼠卵巢细胞(CHO)中的表达。SDS-PAGE分析表明,F-hCGR为一条蛋白质带,其表观分子量为92kd,而T-hCGR为35kd和37kd两条带。表达受体对其配基hCG表现出高的亲合力,F-hCGR的解离常数为7×10-9mol/L,T-hCGR为6.4×10-9mol/L。表达F-hCGR的转染CHO细胞可结合125I-hCG,而表达T-hCGB者不结合125I-hCG。这提示F-hCGR主要存在于细胞质膜表面上。表达F-hCGR的转染CHO细胞能刺激。cAMP的形成,而表达T-hCGR者不能刺激cAMP形成。免疫荧光定位结果表明,T-hCGR主要分布于质膜的细胞质侧以及胞内其他一些细胞器膜上。用免疫亲和层析可以得到纯化的T-hCGR。 相似文献
39.
酪氨酸羟化酶基因载体-pCMVTH 质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型,本研究采用分子克隆技术,将合成多巴胺的关键酶-酪氨酸羟化酶(TH)的基因,克隆进入以巨细胞病毒CMV为启动子的载体质粒内,经限制性内切酶定位分析证实该重组的DNA质粒的可靠性。携带TH基因的PCMVTH质粒以LIPO-FECTIN介导,在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。 相似文献
40.
精子介导鱼类基因转移和聚合酶链反应检测技术 总被引:18,自引:0,他引:18
金鱼精子与美洲大绵wei的抗冻蛋白基因一起保温30分钟后,再与卵子受精,共获得145尾成鱼和若干胚胎。从胚胎和成鱼中提取DNA经聚合酶链反应(PCR法)扩增和Southern blot分子杂交表明,外源的抗冻蛋白基因进入了部分受体鱼的染色体组内。测定了45尾一年龄实验鱼中,有12尾显示出明确的杂交带,阳性率为26%。 相似文献