脑心肌炎病毒VP1蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证

为筛选与脑心肌炎病毒VP1蛋白相互作用的靶细胞cDNA文库蛋白,构建VP1蛋白的诱饵载体pDHB1-VP1。扩增EMCV的VP1基因并克隆至pMD18-T载体中,经测序验证正确后定向克隆至酵母双杂交诱饵载体pDHB1。将重组pDHB1-VP1载体进行酶切验证和测序分析,并转化酵母报告菌株NMY51,检测其在酵母细胞中有无表达和自激活作用。结果表明,构建的p DHB1-VP1基因可以在酵母细胞中正确表达,产物大小约66 kD,而且可以与兔抗EMCV血清发生特异性结合,有较好免疫原性。成功构建了诱饵载体pDHB1-VP1,可以在酵母细胞中表达且其对报告基因无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选试验中。     

转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体 pGBKT7 中,转化酵母 AH109(a type). 免疫印迹检测诱饵质粒 pGBKT7-XBP1 在AH109 酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母 AH109 与含有肝细胞 cDNA 文库质粒 pACT2 的酵母 Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有 X-α-gal 的营养缺陷型培养基上 (SD/-Trp-Leu-His-Ade) 进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框 ORF,得到 7 种不同的蛋白质. 为了进一步验证这些筛选蛋白质与 XBP1 的相互作用,克隆其中一种蛋白质 MT1E,并运用 GST pulldown 和免疫共沉淀技术成功检测了 MT1E 和 XBP1 的相互作用(体外 / 体内),结果提示,MT1E 可能是 XBP1 的一个新的调节蛋白. 通过酵母双杂交技术筛选得到的 7 种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关. 上述结果有助于揭示 XBP1 的生物学功能,为进一步探讨 XBP1 的表达和调控机制提供新线索.     

Bite me： Blue tails as a ＇risky-decoy＇ defense tactic for lizards

Many lizard species use caudal autotomy to escape entrapment. Conspicuous coloration may increase the likelihood of being attacked, but if that attack can be directed towards the autotomous tail this may ultimately increase the chances of the lizard surviving a predatory attack. We tested the hypothesis that brightly-colored tails function to divert predatory attention away from the head and body using pairs of blue-tailed and all-brown clay model lizards. Predatory bird attacks on the 24 blue-tailed models occurred sooner （P = 0.001） than attacks on the 24 all-brown models, and over 7 days blue-tailed models were attacked more often than all-brown models （P = 0.007）. Blue-tailed models were, however, more frequently attacked on the tail than other parts of the body （P 〈 0.001）, while all-brown models were more frequently attacked on the head and body （P = 0.019） which would be more likely to be fatal for a real lizard. Our results suggest that models with a blue tail were more conspicuous than all-brown models, attracting attacks sooner and more often, but that the attacks were predominantly directed at the tail. It is better for individuals to be attacked unsuccessfully many times, than successfully just once. Having a brightly-colored tail may, therefore, act as a ＇risky decoy＇. Despite increased conspicuousness, a blue tail increases the likelihood that the lizard would be able to effect escape through caudal autotomy rather than being grabbed by the head or body [Current Zoology 60 （3）： 333-337, 2014].     

蛋白质组学肽段鉴定可信度评价方法

蛋白质组学基于质谱数据鉴定肽段和蛋白质，从而给出基因表达的直接证据，帮助解析蛋白质的结构和功能，研究蛋白质与疾病的关系，提供靶向治疗方案，而这些都取决于鉴定的肽段和蛋白质的准确性。蛋白质组学常采用目标-诱饵库方法（target-decoy approach，TDA）对鉴定的肽段和蛋白质进行质量控制，并对其进行改进演化后应用到子类肽段（比如突变肽段和修饰肽段等）和交联肽段等特殊鉴定结果的可信度评价中。然而，TDA存在两个局限，即错误率估计值不够准确以及不能评价单个鉴定结果的可信度，经过TDA质量控制后的结果还需要进一步检验，因此领域内也提出了一系列其他方法（本文统称为Beyond-TDA方法），协同加强肽段的可信度评价。本文对数据依赖模式下采集的质谱数据肽段层面的TDA常规方法和特殊方法进行了综述，对Beyond-TDA方法进行了分类阐述，并总结了各种方法的优势与不足。     

胡蜂巢穴寻找方法

胡蜂巢穴多建筑在较隐蔽和人难以到达之处,所以给寻找和移巢都会带来很大困难。为帮助较快地找到蜂巢,这里介绍两种方法: 1.直接寻巢:于开春后到野外寻找,地点为向阳背风山坡、村寨、农田附近的土洞、树洞、灌丛等处用棍棒敲打或摇动树杆,当发现有蜂飞出,趁势寻找可得到巢穴。 2.蜂标寻巢:方法是,用一根长约1米左右竹棍,顶端破开呈夹子状,夹入诱饵如