人羊膜与人脱细胞羊膜形态结构的对比观察

目的：对比观察人羊膜（human amniotic membrane,HAM）脱细胞处理前后的形态结构变化,为人脱细胞羊膜（human acellu-lar amniotic membrane,HAAM）作为良好的生物支架材料提供依据。方法：取健康剖宫产孕妇的胎盘,剥离获取HAM,行HE染色、透射电镜（transmission electron microscope,TEM）、上皮面与基质面扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）检测;将HAM经物理和胰蛋白酶等脱细胞处理后获得HAAM,亦行HE染色、TEM、上皮面与基质面SEM检测;最后将检测结果进行对比观察。结果：通过HE染色表明HAM的细胞成分去除干净;TEM断面观察HAAM表明其富含大量密集的呈点状、线状及条索状的纤维成分;SEM观察表明HAAM的上皮面与基质面呈现不同的三维结构,未见胶原纤维和网状纤维断裂。结论：HAM经脱细胞处理制备的HAAM,既去除了可引起移植排斥反应的细胞成分,又保存了完整的三维结构,为良好的生物支架材料。     

山羊角膜缘干细胞荧光蛋白(Venus)细胞株的建立及角膜上皮植片构建

角膜缘干细胞是角膜上皮更新与修复的来源,角膜上皮受损严重常会导致角膜盲。尽管近几年通过角膜缘干细胞移植术(LSCT)治愈角膜上皮受损的临床应用已被推广,但是对于角膜缘干细胞移植受损机体后的修复机理并不明确。为了实现角膜缘干细胞移植后的活体追踪,使用G418筛选标记有Venus荧光蛋白的角膜缘干细胞株(GLSC-V),并以其为种子细胞接种于去上皮羊膜上,体外培养21d构建成荧光角膜上皮植片。荧光倒置显微镜下观察GLSC-V的细胞质和细胞核均有绿色荧光表达,在体外培养荧光至少持续3个月。免疫荧光检测GLSC-V细胞P63、Integrinβ1均呈阳性表达,对GLSC-V细胞及未转染的GLSCs进行半定量RT-PCR检测显示,两组细胞皆未表达终末分化角膜上皮细胞基因k3、k12,GLSC-V中p63及pcna较未转染组细胞略上调,venus强表达。经HE染色观察构建的人工角膜组织由5～6层上皮细胞组成,组织中上表皮细胞个数少、体积大且呈扁平状;基底部细胞密集、体积小且成立方状。经免疫荧光检测仅组织基底部最基层细胞表达P63,上表皮细胞不表达。该人工角膜与正常角膜上皮组织结构特性相似,可用于移植,为研究角膜缘干细胞修复严重受损角膜上皮机理奠定基础。     

角型青光眼急性期行小梁切除并丝裂霉素联合羊膜移植术的疗效观察

目的探讨闭角型青光眼急性期滤过手术中应用生物羊膜的临床疗效。方法对我院收治的急性期闭角型青光眼患者25例施行小梁切除并丝裂霉素联合羊膜移植术,术后对手术疗效进行评估。结果 25例患者中,1例患者术后视力下降,其余24例患者视力无变化或提高。术后1、3、7天及术后1个月的视力变化,差异有统计学意义(P0.05);术后3天~1周的视力保持稳定,患者术前、术后各时间点眼压差异有统计学意义(P0.01)。术后1、3、7天以及术后1、3、6、12个月眼压控制较稳定,前房形成良好,无并发症发生。结论急性闭角型青光眼患者的眼压持续升高,实施小梁切除并丝裂霉素联合羊膜移植术安全有效。     

浆液性卵巢癌铁死亡关键基因的筛选及[]生物信息学分析

利用生物信息学方法筛选浆液性卵巢癌相关铁死亡关键基因,并预测其生物学功能。从GEO数据库中获得有关浆液性卵巢癌的数据集GSE54388和GSE12470,采用R语言中的“Limma”包分析挑选浆液性卵巢癌上皮组织与正常卵巢上皮组织中差异表达基因,绘制火山图、热图。利用Venn软件在线工具绘制GSE54388,GSE12470,FerrDb三个数据集韦恩图。对相关基因进行功能富集分析、蛋白互作分析、生存分析,对关键基因绘制ROC曲线进行诊断分析。采用GEPIA2 数据库对筛选基因进行验证,并进行免疫浸润分析。结果发现:从GSE54388中筛选出2458个差异基因,其中上调1309个,下调1149个。从GSE12470中筛选出3534个差异基因,其中上调1 837个,下调1 697个。与铁死亡基因数据集取交集,共得到16个差异基因,蛋白互作网络筛选出7个基因构建的关键模块,绘制生存曲线发现浆液性卵巢癌患者中5个基因与患者总生存率不良相关,其中NRAS,PSAT1,CDKN2A,GDF15这4个基因高表达,CAV1低表达。ROC曲线显示这5个基因中CAV1,NRAS,PSAT1的AUC诊断曲线面积大于0.95,有较高的诊断价值。GEPIA2 数据库验证发现5个基因的表达情况与预测相符,仅NRAS基因表达在浆液性卵巢癌患者Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期有显著差异(P<0.05)。免疫浸润分析发现CDKN2A表达与aDC细胞浸润水平呈正相关(P<0.05,spearman相关系数0.353);CAV1表达与Mast细胞浸润正向关(P<0.05,spearman相关系数0.327);NRAS与T helper细胞浸呈正向关(P<0.05,spearman相关系数0.362)。通过生物信息学方法筛选出与浆液性卵巢癌铁死亡相关的5个基因CAV1,NRAS,PSAT1,CDKN2A,GDF15,可能在浆液性卵巢癌的发生发展中起重要作用,有望成为该病诊断、治疗和预后的潜在分子生物标志物。     

羊膜移植治疗角膜溃疡的护理

羊膜是人体最厚的基底膜 ,主要由胶原蛋白IV和 V组成。羊膜取材方便 ,获得量多 ,且无血管、无淋巴、不含抗原、不发生免疫排斥反应而越来越广泛应用于临床。我科应用羊膜移植治疗角膜溃疡 1 5例 ,取得良好效果。1　临床资料1 .1　一般资料　本组患者 1 5例 ( 1 5只眼 ) ,其中男 9例 ,女 6例 ,年龄 1 5～ 1 7岁 ,其中病毒性角膜溃疡 6例 ,细菌性角膜溃疡 9例 ,其中有 2例合并前房积脓。1 .2　手术方法　球后麻醉后 ,用显微镊清创溃疡基底 ,去除溃疡边缘附着不良的上片。用含抗生素的生理盐水将剖切表面冲洗干净 ,然后将羊膜上皮面朝上 ,平…     

微囊藻毒素对鱼组织匀浆液蛋白磷酸酶活性抑制作用的研究

蛋白磷酸酶是在调节细胞内蛋白磷酸化水平方面具有重要作用的酶。研究表明，蛋白磷酸化水平与肿瘤的促进作用密切相关，激活蛋白激酶C和抑制丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶（Ser／ThrProtein…。s…atase，简称PP，根据对抑制剂的敏感性和对二价阳离子的依赖性，分为1，ZA，ZB，ZC四类）的物质都对肿瘤形成起促进作用。近期研究发现，天然有毒物微囊藻毒素对PPI和PPZA活性具有极强的抑制作用l’］。对PPI和PPZA具有极强抑制作用的这一物质的发现有重要意义，从酶学研究来看，由于这类物质对酶抑制作用专一和灵敏，因而可作为理想的分…