一个改进的PCR过程中聚合酶复制精确性测定系统的建立

在大肠杆菌中建立了一套用于测定ＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ过程中复制精确性的系统,并测定了耐热ＦＤＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ扩增过程中的复制精确性。这一系统主要包括以质粒ｐＵＣ１１８和ｐＵＣ１１９为出发质粒所构建的一套共６个突变质粒,分别为ｐＦＤＦＰ１１８和ｐＦＤＦＰ１１９（＋１移码突变）、ｐＦＤＦＭ１１８和ｐＦＤＦＭ１１９（－１移码突变）、ｐＦＤＦＵ１１８和ｐＦＤＦＵ１１９（碱基置换突变）。这些突变质粒均不能进行ｌａｃＺ－α互补反应,因此在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上菌落呈白色。同时还构建了ＰＣＲ产物克隆载体ｐＦＤＦＬ１１８和ｐＦＤＦＬ１１９。以上述突变质粒为模板进行ＰＣＲ反应,取反应产物和ｐＦＤＦＬ１１８或ｐＦＤＦＬ１１９连接后转化到大肠杆菌中。若在ＰＣＲ过程中发生回复突变,则转化子在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上呈蓝色。由转化子中蓝白菌落个数即可计算出ＤＮＡ聚合酶的复制差错率。用这一系统测得ＦＤＤＮＡ耐热聚合酶的复制差错率为１０－５～１０－６。     

生物进化论的发展

介绍了表型进化的达尔文学说,突变学说和综合进化学以及分子进中性学说的产生背景和主要内容,阐述了这两类进化相互关系的两假说,讨论了这两类进化学说间的共同点和主要分歧。     

RAPD技术的特点及其在昆虫分类中的应用

随机扩增的多态性DNA(RAPD)技术,是近年来发展起来的一项DNA分子水平上 的大分子多态检测手段。由于它具有简捷、灵敏、对材料要求不高,取材少、成本低等优点, 备受人们青睐,在遗传学、分子进化、生物分类等领域被广泛地运用。在昆虫分类的过程中, 由于昆虫的种类繁多,形态、生态差异很大,许多在其它领域被广泛运用的分子生物学技术不能在昆虫分类中充分发挥作用。同时在昆虫分类中出现的一些问题却又需要用涉及遗传本质的分子生物学技术进行探讨和研究。本文就RAPD技术的特点及其在解决昆虫分类中的问题时的优势作一简介。     

反义肽及其在生化分离中的应用

反义肽是由反义RNA编码和翻译的肽．它可与其正义肽分子发生专一性相互作用．近年反义肽的这种特异性结合实例研究,已为其在生化分离领域应用奠定了基础,尤其是在色谱亲和配基的选择方面,可以预见不久以反义肽为配基的亲和色谱将是生物工程产品分离的一种有效手段．     

从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法

cDNA文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力.利用微波炉加热的方法,简化了原位杂交中噬菌斑裂解、DNA变性与固定的程序;进一步运用PCR扩增技术,特异扩增克隆载体中插入的cDNA片段,加快了阳性克隆分析的进程.     

RNA的加工

本书是从近年来大量RNA加工的研究结果中所收集的内容,再加以系统化,因此是一本很实用的参考书,也是一本资料书。全书内容共11章,题目是;蛋白质、多核苷酸识别与原核生物中的RNA加工核酸酶;原核细胞中RNA加工的分子生物学。     

应用肠杆菌科四个属的诊断噬菌体快速诊断沙门氏菌

本文报告应用弗氏柠檬酸细萄噬菌体3组,大肠埃希氏菌噬菌体4组,阴沟肠杆菌噬菌体1组和沙门氏菌O-I噬菌体快速诊断沙门氏菌的结果。沙门氏菌0-I噬菌体可裂解沙门氏菌属地方株1393株中的1351株(97％)。柠檬酸细菌属噬菌体和共可裂解柠橡酸细菌属地方株381株中的362株(95％)。阴沟肠杆菌噬菌体Ent可裂解阴淘肠杆菌地方株l 50株中的133株(84．2％)。埃希氏菌属噬菌体E—1、E一2、E-3和E-4共可裂解埃希氏菌属地方株683株中的567株(83％)。由于E一1和E一2噬菌体的联合使用,可使o I噬菌体对埃希氏菌属地方株的误诊率从6．3％下降到0．6％。E一4噬菌体对沙门氏菌属地方株的误诊率可因与。一I噬菌体的联合使用而从0．36％下降到0．07％。     

耐药菌感染的噬菌体治疗专利技术

耐药菌,尤其是多重耐药菌的出现和持续进化给人类健康带来了巨大的威胁。在抗生素逐渐失去特效作用的情况下,科学界和医药界又把眼光重新投向了抗菌的天然生物-噬菌体,并在一些研究中证明了噬菌体可以作为新的武器去替代抗生素治疗耐药菌感染。通过对噬菌体治疗及衍生的裂解酶治疗的世界专利申请进行统计及分析,获得了专利发展趋势、申请人分布特点及主要专利申请人等信息,详细分析了噬菌体及裂解酶治疗的主要专利技术路线和研发热点。     

乙型脑炎病毒NS2A-C60A位点突变对其生物学特性影响研究*

目的:旨在探索Ⅰ型日本乙型脑炎病毒传代致弱后基因组突变NS2A-C60A对乙脑病毒生物学特性的影响。方法:首先通过对传代致弱及原始乙脑毒株基因组序列进行测序比对、结构预测分析并利用Western blotting(WB)确定了目标研究位点NS2A-C60A;然后使用反向遗传定点突变技术构建拯救了包含NS2A-C60A单点突变的病毒株;最后利用噬斑形态观察、生长曲线、双萤光素酶分析,WB以及炎性因子检测和动物实验研究了该单点突变对于乙脑病毒生物学特性的影响。结果:首次研究发现Ⅰ型乙脑病毒传代致弱会导致NS1'蛋白表达的显著下降以及可能的相关位点NS2A-C60A,并成功拯救获得了NS2A-C60A单点突变毒株rJEV-C60A,研究发现NS2A-C60A突变对乙脑病毒的生长特性及噬斑形成没有显著影响,但是能够显著降低乙脑病毒NS1'蛋白的表达,并且该位点突变能够轻微阻碍乙脑病毒对细胞炎性因子表达的抑制,动物实验结果显示NS2A-C60A点突变病毒与原毒株具有相似的神经毒力,说明该位点突变不是影响乙脑病毒毒力致弱的关键位点。结论:新发现的NS2A-C60A位点突变能够显著减少乙脑病毒NS1'蛋白的表达,但是对其增殖、诱导炎症及神经毒力等生物学特性没有显著影响。     

检测病毒气溶胶存活的方法学研究

以钝齿棒状杆菌噬菌体B271血清型为病毒等小颗粒生物粒子的模拟剂,建立了一种适合这类小颗粒生物粒子气溶胶存活研究的方法。本文从该噬菌体耐气溶胶化特性、气溶胶粒谱、用气溶胶示踪剂求算物理衰亡的方法和气溶胶采样回收技术等方面探讨了病毒气溶胶存活研究中的几个关键技术问题,为病毒气溶胶存活研究提供了参考。