筛选在非生长条件下突变体酶的新方法

利用双层平板筛选由定向进化方法产生的瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ（EGⅢ）突变体库,根据水解圈在平权上形成的速度判断酶活高低。采用这种方法在不同的筛选条件下分别筛选得到了几株在低温或碱性条件下高活性的EGⅢ突变体。比色法测定的酶活性与平板筛选结果一致。该方法的建议将使通过定向进货方法改造现有蛋白质,获得具有新的优良性状的工业用酶的途径得到更加广泛的应用。     

银苗的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　银苗 (Stachysfloridana)又称地灵、银条菜、银根芽。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　芽分化培养基 :( 1 )MS + 3%糖 (云南产食用白砂糖 ,下同 )。增殖培养基 :( 2 )MS +6 BA 0 .1mg·L- 1 (单位下同 ) +IBA 0 .2 +CH(酸水解酪蛋白 ) 1 5 0 + 3%糖 ;( 3) 1 /2MS +IAA 0 .2 +2 .5 %糖。生根培养基 :( 4 ) 1 /2MS +IAA 0 .2 +IBA 0 .1 + 3%糖。上述培养基均加入 0 .5 5 %纯化琼脂粉 ,pH5 .8,1 2 1～ 1 2 3℃高温灭菌 1 5min。培养室温度 1 8～ 2 8℃ ,光照时间 1 2h·d- 1 ,光照度1 5 0 0～ 2 5 0 0lx。4　生长与分…     

大鲵（Andrias davidianus）4种生殖器官的蛋白水解酶种类和活性分析

用蛋白水解酶活性电泳方法（G-PAGE）分析了大鲵卵巢,输卵管,精巢,输精管的蛋白水解酶种类和活性,结果表明：1）精巢和输精管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,活性有差异。主要的蛋白水解酶分子量为240,85,73,61,51,42,37和23kD;2）输精管的蛋白水解酶在碱性条件下活性最强,在中性条件下活性次之,在酸性条件下活性最弱。精巢的蛋白水解酶在中性和碱性条件下活性相似,在酸性条件下活性很弱,推测精巢蛋白水解酶活性的最适pH为中性,输精管蛋白水解酶活性的最适pH为碱性;3）卵巢和输卵管的蛋白水解酶种类（分子量）相似,主要的蛋白水解酶分子量为73、61、51和37kD,它们在酸性条件下活性最强,在中性条件下几乎无活性,推测它们活性的最适pH为酸性;4）与卵巢和输卵管相比,精巢和输精管的蛋白水解酶种类多,活性强,活性的最适pH高,推测这种差别可能有利于受精和发育中所需的蛋白水解酶快速灭活或活化。     

鸭毛梗制备复合氨基酸工艺条件的研究

采用正交试验方法 ,研究了鸭毛梗水解制备复合氨基酸的工艺条件 ,结果表明 :温度 /压力是影响氨基酸转化率最主要的因素。鸭毛梗水解制备的复合氨基酸转化率盐酸法最高 (82 .36 % ) ,氢氧化钠法最低 (5 8.4 6 % ) ,硫酸法与盐酸法接近(79.4 4 % )。硫酸法产率较高 ,操作方便 ,环境污染和设备腐蚀均小 ,适合大量生产 ,确定为水解制备复合氨基酸介质 ,其最佳工艺条件为 :水解时间 8.0h ,硫酸浓度 3.0mol·L-1,水解温度 12 5℃。氨基酸分析表明 ,水解液中均含有 18种以上氨基酸。     

菜豆环氧化物水解酶的表达及其催化特性研究

【背景】光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块。与化学合成法相比,环氧化物水解酶(EHs)介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点。【目的】从菜豆(Phaseolus vulgaris)中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化环氧苯乙烷(Styrene oxide,SO)的水解特性。【方法】通过计算机辅助分析EHs的一级结构,推测一种菜豆来源的未知功能蛋白(PvEH4)可能具有EH活性。利用RT-PCR技术,以菜豆总RNA为模板,扩增编码PvEH4的基因pveh4,并实现其在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。利用重组菌E.coli/pveh4全细胞催化SO水解,分析PvEH4的对映选择性和区域选择性。【结果】一级结构分析表明,PvEH4具有α/β折叠型EH特有的保守区域。SDS-PAGE结果显示PvEH4的表观分子量为39.4 kD。PvEH4针对SO的对映选择率(E值)为10.1,区域选择性系数αS和βR分别为99.5%和82.5%。当外消旋SO转化率达到68.1%时,可同时获得99.9%ees的(R)-SO和92.3%eep的(R)-苯乙二醇(Phenyl-1,2-ethanediol,PED),两者的产率分别为31.9%和65.6%。【结论】PvEH4的挖掘不仅增加了植物类EHs的数量,同时也为EHs的蛋白分子改造提供参考。     

原生质体融合技术构建糖化型啤酒酵母的研究

融合亲株B_6-5（Ala^-,Cys^-α）和T_3-4（His,Thr^-α）细胞于35％PEG（6000）－50mmol／LCaCl₂溶液,28℃下诱导融合30min,筛选出融合株,融合频率为6．2×10^-5。融合株细胞的体积和DNA含量均为两系株细胞之和。融合株有水解淀粉的能力,又有发酵度高于生产用酵母的特点。     

高对映选择性环氧化物水解酶产生菌的筛选及特性研究*

从土壤中分离的芽孢杆菌BacillusmegateriumECU1 0 0 1所产环氧化物水解酶能高对映选择性水解缩水甘油苯基醚 (对映选择率E值可达 47 8) ,当转化率为 55.9%时 ,剩余的 (S) 缩水甘油苯基醚的光学纯度 (对映体过量值 ,ee)可达 99.5 % ;当底物浓度提高到 60mmol/L时 ,光学纯 (S) 缩水甘油苯基醚的收率达到 25.6%     

氮添加对湿地松林土壤水解酶和氧化酶活性的影响

通过3个水平野外氮添加控制试验(0、40、120 kg N·hm^-2·a^-1),研究氮添加对亚热带湿地松林土壤水解酶和氧化酶活性的影响.结果表明: 氮添加显著抑制了土壤有机质中碳、氮、磷水解酶和氧化酶的活性,导致β-1,4-葡糖苷酶(BG)、纤维素二糖水解酶(CBH)、β-1,4-乙酰基-葡糖胺糖苷酶(NAG)、过氧化物酶(PER)活性下降16.5%～51.1%,并且高水平氮添加对酶活性抑制效果更明显;氮添加导致α-1,4-葡糖苷酶(aG)、β-1,4-木糖苷酶(BX)、酸性磷酸酶(AP)、多酚氧化酶(PPO)活性降低14.5%～38.6%,不同水平氮添加处理间差异不显著.土壤酶活性存在明显的季节性差异,BG、NAG、BX、CBH、AP、PPO活性表现为3月>6月>10月,aG、PER活性表现为10月>3月>6月.多数土壤水解酶和氧化酶与pH呈显著正相关,与NO₃^--N含量呈显著负相关,表明氮添加导致pH降低和土壤中硝化作用增强,抑制了土壤水解酶和氧化酶活性.氮添加不利于亚热带土壤有机质的矿化和周转,并且随着氮添加量的增加,效果更明显.     

木质纤维素的微生物降解

由于世界人口不断增加,糖食和饲料的需求成为当今社会急待解决的大问题。每年通过光合作用产生的有机生物量干重约1640亿吨,木质素和纤维素的结合物(木质纤维素)占地球陆生生物量的95％,其中1/4是木质素,其余为纤维素和半纤维素。