木酮糖激酶基因整合表达载体构建及在酿酒酵母中的过表达

【目的】以载体p406ADH1为构建骨架,构建一个酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株的整合表达载体。【方法】通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为筛选标记的G418抗性基因KanR,用于基因表达的ADH1终止子片段,酿酒酵母W5自身木酮糖激酶基因,18S rDNA介导的同源整合区,插入到骨架质粒p406ADH1中,得到多拷贝整合表达载体pCXS-RKTr。将该载体线性转化酿酒酵母后,对转化子中木酮糖激酶酶活进行测定,检测其表达情况。【结果】重组质粒在酿酒酵母体内实现了木酮糖激酶的高水平稳定表达,其酶活力是初始菌株的2.87倍。【结论】本实验构建了一个酿酒酵母工业菌株整合表达载体,并用此载体过表达了其自身的木酮糖激酶基因。该重组质粒载体的构建可以有效解决酿酒酵母中自身木酮糖激酶酶活较低的情况,这为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建和其它酵母重组质粒载体的构建奠定基础。     

课堂教学中“铺垫”的基本类型和原则

课堂教学中的铺垫,是指教师有意识地为学生学习后续内容提供准备,使之形成合理认知结构的一种教学艺术,它是课堂教学中联系教和学双方的重要纽带,也是体现教师主导作用和学生主体作用的重要手段。阐述了课堂教学中铺垫的基本类型及原则。     

调控骨骼肌纤维类型转化的信号通路

骨骼肌由异质性的肌纤维组成,不同类型的肌纤维具有不同的形态、代谢、生理和生化特性.根据不同肌纤维中表达的特异肌球蛋白重链亚型可将成体哺乳动物骨骼肌纤维分为4类,即Ⅰ,Ⅱa,Ⅱx和Ⅱb型.骨骼肌保持高度可塑性,当机体受到某些生理或病理刺激时,骨骼肌为了适应需要,通过激活胞内相关信号通路改变肌纤维特异基因的表达从而诱发肌纤维类型的转化.本文综述了细胞内参与调控肌纤维类型转化的多条重要信号通路,如Ca2+信号通路,Ras/MAPK信号通路及多种转录调节因子,辅激活因子和抑制子等,为改善肉类品质,提高运动训练效果及治疗肌肉相关疾病奠定了理论基础.     

铁线莲品种‘Multi-Blue’不定根的诱导培养及其发生过程的解剖学观察

对适宜于铁线莲品种 'Multi-Blue'(Clematis 'Multi-Blue')不定芽生根培养的基本培养基进行了筛选,并采用L9(32)正交实验设计对生根培养基中NAA和IBA质量浓度进行了比较分析,对不定根形成过程中解剖结构的变化也进行了观察.接种在1/2MS培养基上的铁线莲品种'Multi-Blue'不定芽的生根率极显著高于改良1/2MS、MS和WPM培养基(P<0.01),生根率达66.97%;在1/2MS培养基中添加 0.05 mg·L-1 NAA,不定芽的生根效果最好,生根率达69.34%,极显著高于其他处理组(P<0.01).研究结果表明,添加0.05 mg·L-1 NAA的1/2MS培养基(含30 g·L-1蔗糖和8 g·L-1琼脂,pH 5.8)为铁线莲品种'Multi-Blue'不定芽生根培养的最佳培养基.在不定芽的茎横切面上未见潜伏根原基存在;而在接种约1周后,不定芽茎基部皮层的薄壁细胞逐渐恢复分生能力,出现胞质变浓、核质增加、液泡缩小及细胞排列紧密等变化,细胞开始分裂并形成分生细胞团;接种后约2周,根原基发端细胞不断分裂并逐渐形成体积较小、染色较深的一群分生细胞,并出现明显的分层结构;接种后约3周,细胞继续进行平周分裂和垂周分裂,并分化出球形或楔形的不定根根原基;根原基在皮层中常发生弯曲或分支,且皮层处的不定根加粗生长,最终突破皮孔并形成独立的不定根.观察结果表明,铁线莲品种'Multi-Blue'不定芽基部形成的不定根根原基为诱生根原基.     

NaCl胁迫下平邑甜茶根系线粒体特性和细胞死亡特征

以平邑甜茶(Malus hupehensis var. pingyiensis)实生幼苗为试验材料, 研究NaCl浇灌后根系线粒体H₂O₂含量、膜电位(Δψm)和根系ATP含量的变化以及细胞死亡特征。结果表明, 根系线粒体H₂O₂含量在0.085 mol·L ^-1 NaCl处理的第1-6天逐渐降低, 在第6-15天则快速上升; 线粒体Δψm在0.085 mol·L ^-1 NaCl处理的15天内一直呈下降趋势, 在第6-15天下降速度明显加快; 根系ATP含量在0.085 mol·L ^-1 NaCl处理的15天内始终低于对照, 但保持在一个较稳定的范围内。TUNEL原位末端标记试验显示, 0.085 mol·L ^-1 NaCl处理的第9天, 根系石蜡组织切片上的阳性反应斑点明显增多, 到第15天时阳性反应斑点密集成片, 表明细胞核DNA发生了细胞程序性死亡的特征性断裂。根系中细胞程序性死亡关键酶类caspase3/7活性在0.085 mol·L ^-1 NaCl处理的第1-6天处于较低水平, 其活性在第6-15天成倍上升。这些结果表明, 0.085 mol·L ^-1 NaCl处理6-15天能诱导平邑甜茶根细胞发生程序性死亡, 而且线粒体特性的变化与根系细胞程序性死亡密切相关。     

不同部位、分化和起源胃癌中H.pylori、CagA基因的探讨

目的通过检测不同部位和不同组织类型中胃癌组织中幽门螺杆菌(H.pylori)和细胞毒素相关基因(CagA基因),探讨H.pylori、CagA基因与胃癌的关系,以及H.pylori、CagA基因导致胃癌的可能机制。方法应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色及血清H.pylori CagA抗体检测胃癌患者H.pylori,应用PCR检测胃癌组织中H.pylori CagA基因。结果胃癌组织中随活检部位不同,H.pylori检出率也不同,以胃窦部检出率最高为76.9%,与胃体大弯侧、胃角和贲门相比差异均有非常显著性(P0.005),胃体大弯侧、胃角与贲门相比差异均有非常显著性(P0.005),胃底与贲门相比差异无显著性(P0.05)。胃窦部癌的CagA检出率(85.6%)最高,与其他部位相比差异均有非常显著性(P0.005),胃角胃癌CagA检出率显著高于胃体大弯侧和贲门胃癌(P0.005)。高分化胃癌H.pylori检出率为73.1%,低分化胃癌H.pylori检出率为44.1%,二者相比差异均有非常显著性(P0.01)。肠型胃癌H.pylori检出率为76.7%,弥漫型胃癌H.pylori检出率为33.3%,二者相比差异有显著性(P0.05),高分化胃癌CagA检出率为26.3%,低分化胃癌CagA检出率为80.0%,二者相比差异均有非常显著性(P0.01)。肠型胃癌CagA检出率为80.4%,弥漫型胃癌CagA检出率为57.1%,二者相比差异无显著性(P0.05)。结论不同部位和不同组织类型中胃癌组织中H.pylori和CagA基因的表达存在一定差异性,对探讨胃癌的发生及胃癌的防治有一定的指导意义。     

猝死,一颗未引爆的炸弹

猝死是指平时身体“健康”或病情基本稳定的患者,发生非预料中的突然死亡,一般将发病后1小时内死亡定为猝死的时间标准。研究表明,近年来我国猝死发生率有上升趋势,并以中老年人居多。     

2种纤维素酶水解效果比较及酶蛋白组分分析

比较了自产纤维素酶和商品纤维素酶的水解效果,并采用超滤、层析、SDS-PAGE相结合的方法分析2种纤维素酶蛋白组分的差异。里氏木霉以纸浆为C源合成的自产纤维素酶的水解得率高于商品纤维素酶,自产纤维素酶水解48h的得率为66.24%,商品纤维素酶的得率为52.19%。自产纤维素酶中存在着Cel6A酶组分和XYNⅡ酶组分,而商品纤维素酶中没有检测到这2种酶组分。自产纤维素酶和商品纤维素酶的Cel1A酶组分和Cel7A酶组分间存在着分布和含量上的差异。自产纤维素酶在相对分子质量(2.5～3.5)×104范围内存在着几条蛋白条带,而商品纤维素酶则是在相对分子质量3.5×104附近存在着几条蛋白条带。     

刺木蓼和长枝木蓼种子休眠的解除及萌发条件

刺木蓼（Atraphaxis spinosa）和长枝木蓼（A.virgata）为蓼科木蓼属灌木,是乌鲁木齐周边植被组成的重要种。这两种木蓼种子成熟后不萌发,处于休眠状态,对其种子进行5℃（黑暗）和野外低温层积处理,结果表明：5℃层积处理能明显提高两种木蓼种子在15/6、20/10、25/15和30/20℃（昼12 h/夜12 h）的萌发率。野外层积处理显著提高了种子在15/6℃的萌发率。刺木蓼和长枝木蓼的种子均为非深度生理休眠,分别经8、6周的低温层积处理后种子休眠得以解除。刺木蓼种子的休眠程度比长枝木蓼深,休眠解除后,种子萌发所需的最低温度降低。这两种木蓼种子经过冬天的低温层积,可以在春天较低的生境温度下萌发。     

基于文献计量的染料木素最新研究现状分析

目的:通过分析SCIE中染料木素领域相关论文,了解目前染料木素研究的现状与发展趋势。方法:利用Web of Science,从载文量、作者、地区与机构、关键词等角度统计分析;结果:共检索出9,446篇相关文献,涉及26222位作者及18个国家(地区)与4015个科研机构;染料木素专题学科发展趋于成熟,拥有一支实力雄厚、造诣较深的影响力较大的核心作者群。美国、日本、德国、中国、韩国、英格兰、加拿大、意大利、法国、台湾成为染料木素研究的中心国家和地区。染料木素生理学功能、提取分离方法、分析方法、药理作用、结构修饰等方面的研究为目前染料木素专题研究的主要内容。结论:染料木素该学科需要在临床实践中进一步发展成熟,生物利用度需得到进一步的提高。