红霉素合成蛋白基因的克隆和高表达

文献报道红霉素合成蛋白DEBS2 (6-脱氧红霉内酯B合酶)(374 kD)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达量比较低,难以开展后续蛋白纯化和结构等研究.为获得该大蛋白基因的异源高表达,本研究通过PCR的方法,对编码红霉素合成蛋白DEBS2的基因起始5'端设计了起始密码子之后的十一个简并密码子序列,随机筛选获得在表达宿主BL21(DE3)中高表达的简并序列质粒,质粒命名为DEBS2-17.结果 表明:mRNA的起始二级结构影响200 kD以上的蛋白质表达水平.本研究为开展红霉素合成蛋白的结构及生化研究提供理论基础,同时对表达分子量200 kD以上蛋白具有一定借鉴意义.     

西南大西洋阿根廷滑柔鱼生物学年间比较

将2007年2—5月、2008年3—5月、2010年1—3月我国鱿钓船在西南大西洋公海海域采集的阿根廷滑柔鱼样本,比较其不同年间的生物学特性。结果表明,渔获物雌雄比为1.14—1.50:1;3a雌性个体的胴长(体重)分别为188—346mm(110—856g)、200—364mm(145—950g)、124—276mm(72—425g),雄性个体的胴长(体重)为178—298mm(102—703g)、193—314mm(145—680g)、104—335mm(70—374g)。2010年渔获个体明显比2007和2008年小。各年间及雌、雄个体间的体重与胴长关系均存在差异(P<0.001),渔获物中年间性成熟组成差异明显,此外各年3月份渔获个体也存在显著差异。雌、雄个体的胴长平均生长率分别为0.53—1.07 mm/d、0.47—0.68 mm/d,相对生长率分别为0.24—0.41%d-1、0.23—0.33%d-1;雌、雄个体的体重平均生长率在1.70—5.25 g/d、1.64—4.59 g/d,相对生长率分别为0.92—1.37%d-1、0.86—1.40%d-1。渔汛期间,胴长、体重与时间的关系均符合指数生长曲线,但生长指数年间差异明显。综合分析认为:2007年渔获物基本上为南巴塔哥尼亚种群;2008年以南巴塔哥尼亚种群为主,但也有少量较小个体的夏季产卵种群;2010年则以夏季产卵种群为主,并有少量的南巴塔哥尼亚种群。     

红霉素生物合成的生物化学和基因学

从基因重组技术问世以来,对红霉素(大环内酯类抗生素)生物合成的生物化学和基因学的研究到目前已经累积了大量的研究结果。就这2个领域中对红霉素生物合成的研究历史、研究现状和研究前景(组合生物合成)作以简要的介绍。     

红霉素促动力作用的易感性与多巴胺受体D3和神经肽受体Y5

通过应用核素法测定糖尿病胃瘫大鼠的胃排空 ,建立了糖尿病胃瘫大鼠的模型 ;据此模型观察了小剂量红霉素 (3mg kg)对糖尿病胃瘫大鼠液相胃排空的影响。结果显示该药能够显著减小其胃排空的一小时残留率 (R1H) [(6 3%± 6 .8% )vs.(36 %± 3.8% ) ];但此作用具有显著个体差异 ,根据所设标准分成红霉素有效组 (E组 )和无效组 (F组 )后 ,发现两组疗效具有显著差异。应用受体相关基因芯片初步筛选了这两组大鼠胃窦组织的差异表达基因。结果筛选出 10条差异表达基因 ,其中对多巴胺受体D3和神经肽Y受体Y5基因进行了RT PCR半定量验证 ,结果与芯片一致 ,即D3和Y5基因在E组中的表达水平显著高于F组 [D3受体 :(0 .2 6± 0 .0 4 )vs.(0 .16± 0 .0 4 ) ;Y5受体 :(0 .94± 0 .10 )vs .(0 .6 8± 0 .0 9) ],而与正常对照组和阴性对照组间未见明显差异。结果表明 :小剂量红霉素可以改善糖尿病胃瘫大鼠的胃排空 ,其疗效有明显的个体差异 ;红霉素有效组多巴胺受体D3(DRD3)和神经肽受体Y5 (NPYY5 )表达水平显著高于红霉素无效组。提示这两种受体可能与红霉素促动力作用的易感性相关。     

柔膜菌属（柔膜菌目）新种及中国新记录种

本文对采自中国温带部分省区的柔膜菌属Hmenoscyphus标本进行了研究。文中报道新种一个－－井冈柔膜菌Hymenoscyphus jinggangensis,中国新记录种三个,它们是无须柔膜菌Hmenoscyphus imberbis,（参照）闪烁柔膜菌H.cf.nitidulus以及该属的一个未命名种。新种模式标本保藏在中国科学院微生物研究所菌物标本馆。     

糖多孢红霉菌A226 的原生质体转化和染色体同源整合

糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PEG－T缓冲液体积比例为15：40：200（μl)时转化效果较好;比重小原生本的转化效率虽高,但在转化子中有效整合的比例较低;PEG1000和PEG3350对转化效率没有显差异;而Yamamoto转化系统优于Weber转化系统。PCR鉴定、抑菌活性鉴定和质谱分析均表明,转化质粒已整合到染色体红霉素合成基因位点。     

西南大西洋阿根廷滑柔鱼作业渔场特征

基于2006年1—7月中国鱿钓船在西南大西洋捕获阿根廷滑柔鱼的生产数据及卫星反演的海流、海水表层温度和叶绿素a浓度等海洋环境资料,综合分析了阿根廷滑柔鱼的作业渔场、产量及环境特点.结果表明：西南大西洋存在2个主要的阿根廷滑柔鱼渔场,南部中心位置在60°30′ W、45°30′ S,北部中心位置在58°00′ W、42°00′ S,1—7月,作业渔场由南向北移动;不同月份阿根廷滑柔鱼产量的差异较大,其中,1—4月产量较高,最高产量出现在3月,5月之后,其产量逐渐减少;阿根廷滑柔鱼渔场与福克兰寒流流经路径有关,北部渔场位于福克兰寒流的主流上,平均流速为28～60 cm·s^-1,南部渔场在寒流的西边界处,且其西部伴有一小尺度反气旋涡,平均流速在5～32 cm·s^-1;阿根廷滑柔鱼渔场的适宜海洋表层温度在7 ℃～15 ℃,最适宜温度约12 ℃,适宜的海水叶绿素a浓度在0.4～1.5 mg·m^-3,最适宜浓度在0.9～1.2 mg·m^-3,且海水叶绿素a浓度与捕捞量呈显著正相关关系（P<0.05）.     

红霉素、氨溴索与环丙沙星雾化吸入对实验大鼠铜绿假单胞菌生物膜的影响

目的研究红霉素和氨溴索分别联合环丙沙星雾化吸入对铜绿假单胞菌成熟生物膜的干预效果。方法平板法培养成熟铜绿假单胞菌生物膜;微量肉汤稀释法测量红霉素和环丙沙星的最低抑菌浓度;制作气管插管铜绿假单胞菌生物膜感染模型;平板计数法计算红霉素、氨溴索分别联合环丙沙星对生物膜菌落数的影响;日本岛津紫外-可见光分光光度计UV1700测铜绿假单胞菌菌液的A值;石蜡切片HE染色定性观察肺组织的炎症情况;扫描电镜定性观察各处理组的生物膜结构变化。结果各处理组干预7 d后肺组织细菌菌落计数（×10^4CFU/m l）：干预组分为：生理盐水对照,氨溴索,红霉素,红霉素联合环丙沙星,氨溴索联合环丙沙星,各组分别为139.250±42.0162、101.625±40.4190、109.625±33.4747、57.750±37.8295和22.250±17.3184,前3组与后2组对比差异均有显著性（P〈0.05）,前3组之间对比差异没有显著性（P〉0.05）,后2组对比差异有显著性（P〈0.05）。导管生物膜细菌菌落计数（×10^4CFU/m l）：5组分别为170.000±48.3263、127.625±39.0163、133.500±33.6876、70.375±35.7768和38.125±19.1045,结论和肺组织菌落计数是一致的。导管生物膜电镜观察：第1组导管内表面均有较厚基质覆盖,2、3组减少不明显,而联合用药组导管内表面生物膜明显减少,其中第5组效果更好。结论氨溴索与红霉素分别联合环丙沙星雾化吸入在控制导管生物膜和呼吸系统相关感染均具有显著效果,其中氨溴索联合环丙沙星疗效更好。     

miR146a通过Smad4参与多柔比星的心肌细胞毒性作用

目的:探讨miR146a参与多柔比星心肌细胞毒性作用的可能机制。方法:用多柔比星处理大鼠心肌细胞,用CCK-8方法检测细胞活力,用荧光定量PCR检测miR146a的变化,用Western blot检测切割的Caspase 3的蛋白变化。使用常间回文重复序列丛集(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的方法,设计针对miR146a的向导RNA,敲除miR146a的表达。用CCK-8方法和Western blot分别检测敲除细胞的活力和Caspase 3蛋白变化。用软件预测miR146a的靶基因,利用荧光素酶系统进行验证。用Western blot检测多柔比星处理后靶基因的变化,以及用Western blot检测敲除miR146a对靶基因变化的影响。结果:多柔比星处理导致大鼠心肌细胞活力降低,切割的Caspase 3水平升高,同时发现miR146a表达升高(3.6倍)。使用CRISPR可有效敲除miR146a的表达,敲除效果显著高于microRNA decoy的效果(88.6%vs 57.6%)。敲除miR146a的细胞用多柔比星处理,miR146a增加不明显(1.08倍),并且敲除miR146a抑制了多柔比星导致的细胞活力降低和Caspase 3升高。经生物信息学及荧光素酶检测证实在大鼠心肌细胞内Smad family member 4(Smad4)是miR146a的靶基因,用多柔比星处理心肌细胞后,Smad4的表达降低。而敲除miR146a后,Smad4的表达升高,用多柔比星处理敲除miR146a的细胞,Smad4的表达变化不明显。结论:大鼠心肌细胞中,miR146a通过调节Smad4的表达参与了多柔比星对细胞的毒性作用。     

中国小双孢盘菌属分类研究——7个新种和4个新记录种（英文）

对中国科学院菌物标本馆保藏和近年来采集的我国小双孢盘菌属标本进行了分类研究,鉴定出14个种,包括7个新种(线孢小双孢盘菌、湖北小双孢盘菌、大孢小双孢盘菌、山地小双孢盘菌、蕨生小双孢盘菌、香地小双孢盘菌、中国小双孢盘菌)、4个中国新记录种(碘蓝小双孢盘菌、四孢小双孢盘菌、三隔小双孢盘菌、一个未定名种:Bisporella sp.3999)和3个已报道种。对新种与相似种的主要形态学区别进行了详尽的比较和讨论,更新了部分种在我国的分布状况。提供了该属我国已知种的分种检索表。