单链抗体的表达

单链抗体(scFv)是具有抗体活性的最小功能结构单位,是基因工程抗体研究领域中的热点,具有比单克隆抗体在生物病原体、微生物污染和寄生虫病等预防、检测和治疗的独特优点和应用前景.鉴于其重要性,单键抗体在不同的表达系统中得到表达与研究.简要综速了scFv的表达.     

不结球白菜花粉母细胞减数分裂及其雄配子体发育

采用荧光染色法研究了不结球白菜花粉母细胞减数分裂及其雄配子体发育过程.结果表明:(1)不结球白菜花粉母细胞减数分裂的胞质分裂方式为同时型,终变期二价体多为棒状和环状.后期Ⅰ出现少量染色体落后现象,中期Ⅱ纺锤体排列方式有垂直型、平行型和八字型,四分体排列方式有十字交叉型、左右对称型和四面体型.终变期、中期Ⅰ和中期Ⅱ是染色体数目鉴定的最佳时期.(2)1.5～2.49 mm长的花蕾中花粉处于单核早期至中期,2.5～3.0 mm长的花蕾中花粉处于单核靠边期至2核早期.花蕾长2.0～3.0 mm可作为花药培养或小孢子培养的取材依据.     

湖北地区2001年度流感疫情分析

通过流感病毒分离、人群流感抗体水平测定和流行病学调查对2001年度(2001年3月至2002年3月)湖北地区流感疫情进行了分析.结果表明本年度湖北武汉地区出现过两次流感季节性小流行,第一次在2001年8～9月,主要由甲1型流感病毒引起;第二次在2001年12月至2002年1月,以甲3型流感病毒占优势.从病毒分离鉴定和抗体水平测定的情况分析,这次流行的甲3型流感病毒与1999年分离的毒株相比,可能发生了抗原性漂移.     

艰难梭菌毒素B羧基端的表达与卵黄抗体制备简

目的：在大肠杆菌中可溶性表达艰难梭菌毒素B羧基端（TcdB-e）,免疫产蛋鸡,获得针对TcdB-c的卵黄抗体（IgY）。方法：人工合成TcdB-c的基因,将其克隆至pET32b（＋）载体中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,诱导表达产物经金属螯合层析纯化,凝血酶酶切后得到目的蛋白TcdB-c;利用兔红细胞凝集和兔肠袢实验检测目的蛋白活性,用TcdB-c免疫产蛋鸡制备鸡卵黄抗体,分离纯化卵黄抗体并经ELISA测定抗体效价,用兔肠袢实验检测抗体的中和活性。结果：构建了TcdB-c的重组表达载体,诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为79000,经凝血酶酶切后的相对分子质量约65000;目的蛋白免疫产蛋鸡后获得效价为1：20000的抗TcdB-C卵黄抗体,且该抗体可以中和TcdB-c对兔小肠的毒性作用。结论：获得了具有生物学活性的TcdB-C,并制备了针对TcdB-c的鸡卵黄抗体,为利用基因工程方法防治艰难梭菌感染打下了基础。     

单增李斯特菌InternalinA的表达、纯化及多克隆抗体的制备

【目的】克隆表达单增李斯特菌膜表面蛋白InternalinA(InlA),经免疫家兔获得多克隆抗体,为建立其免疫磁珠富集快速检测方法奠定基础。【方法】利用生物软件设计单增李斯特菌inlA基因的引物,通过PCR扩增出inlA基因,并将其克隆至pET28a()原核表达载体,转化大肠杆菌BL21进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性。免疫家兔,制备其多克隆抗体。间接ELISA检测多抗的效价及交叉性,免疫荧光分析多抗与单增李斯特菌菌体结合的特异性。【结果】成功表达了InlA蛋白,融合表达产物分子量约为92 kD,质谱鉴定其为InlA蛋白;免疫家兔获得的抗血清效价为1:100 000,除与金黄色葡萄球菌约20%的交叉外,与副溶血弧菌等其它病源菌均无交叉;免疫荧光证实该多抗特异性结合于单增李斯特菌膜表面,与同种属的威尔斯李斯特菌不结合。【结论】成功制备了单增李斯特菌特异性的兔多克隆抗体,为单增李斯特菌免疫磁珠富集快速检测方法的建立奠定了基础。     

Isolation and identification of canine parvovirus serotype 2a and its VP2 protein expression in transgenic tobacco

A strain of canine parvovirus (CPV) was isolated from feces of an ill puppy in an animal hospital in Wuhan, China. It was designated as CPV/WH02/06. This isolate was identified as serotype CPV-2a by the hemagglutination test, CPV Ag detection strip, electron microscopy, and PCR. The vp2 gene was cloned and sequenced and assigned GenBank accession number EU377537. A 1242 bp segment of the 5' region of the vp2 gene was cloned and inserted into the binary vector pBI121 and used for Agrobacterium-mediated tobacco transformation. Transgenic tobacco plants were selected on MS medium supplemented with 100 μg/mL kanamycin and 100 μg/mL timentin. Integration of the vp2 gene into the tobacco genome was confirmed by PCR using T1 progeny plants, and the expression of the VP2 protein was confirmed by Western blotting.     

青龙胶丸治疗脑梗塞后慢性脑功能不全50例疗效观察

采用青龙胶丸治疗脑梗塞后慢性脑功能不全５０例。结果表明,在连续治疗３个月后,慢性脑功能不全所致的头痛、头晕、失眠、生活主动性减退、对周围事物反应能力减退等症状的有效率均达８０％以上。神经心理学检查证实其对指向记忆、联想学习、人像特点联想回忆、认识能力等均有较好的改善作用。治疗前后血液流变学指标的改善,提示青龙胶丸降低纤维蛋白原、降低血液粘度,具有抗凝、解聚、溶栓、扩张血管、改善微循环的作用。认为是其对慢性脑功能不全发挥较好治疗作用的药理基础之一。     

不同狂犬病毒株抗原反应性的比较研究

应用ELISA法对285份免疫前及健康人血清和742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗(aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测。结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均能达到90％以上,且与SNT效价的相关性较好;而aG株抗原对除aG株以外其它毒株狂犬病疫苗免疫后血清的阳性检出率仅为50％左右。因此不同毒株狂犬病毒抗原的反应性存在明显差异,选用纯度高、活性好的CTN株病毒或两株病毒以不同比例混合作为ELISA检测用抗原,测定疫苗免疫后人群的抗体水平,可获得满意的结果。     

基因工程抗体的性质及应用前景

一、基因工程抗体的理化 及生物学性质 如果需要全抗体分子,目前仍主要选用哺乳动物细胞表达的,而抗体片段则主要用大肠杆菌或噬菌体所表达的。在诊断及治疗,特别是肿瘤的诊断及治疗上,功能抗体片段显示其特殊的优越性。小鼠IgA PMC 603在与抗原结合时或不与抗原结合时的晶体结构已研究得很清楚。通过对这个抗体的研究,掌握了抗体各个区段的基本特征。 1.嵌合抗体(Chimeric antibodies) 嵌合抗体的制作通常是把分泌高亲和力抗体的鼠杂交瘤细胞林中分离到的V基因(VH和VL)连接起来,在骨髓瘤或杂交瘤细胞内表     

丙型肝炎病毒ns2基因的克隆及其表达

以p90-HCV为模板,通过PCR分别得到全长和截短(2881-3078 bp)ns2基因.将截短ns2基因克隆到pET32a原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了Trx-His-NS2C融合蛋白的可溶性高表达.通过His 树脂纯化得到融合蛋白,免疫家兔获得高效价高特异性的抗体.同时构建了含有全长ns2基因的重组腺病毒,利用该重组病毒感染HepG2和293细胞成功的表达23.2kDa的NS2蛋白.本文的研究为进一步开展NS2蛋白的结构与功能研究奠定了良好的基础.