抗对虾白斑综合症病毒的单链抗体A1的表达和生物化学特性

用噬菌体展示技术制备了抗对虾白斑综合症病毒(WSSV)的单链抗体A1。该抗体在30℃培养条件下诱导表达20h后,其蛋白表达量可达总菌体蛋白的3.67%。用亲和层析柱和SephadexG-100层析柱可将单链抗体A1纯化为一条单电泳条带,其分子量约为31.5kD。用等电聚焦电泳测定,其等电点为pH5.8。ELISA测定表明冻干的单链抗体A1在室温储藏4年后与WSSV结合仍具有较高的活力。       

西尼罗病毒研究进展

西尼罗病毒 (West Nile virus,WNV) 首先在1937年乌干达的西尼罗地区的Omogo镇的一位发热病人血液中分离到,从而得名[1].西尼罗病毒属于黄病毒科黄病毒属.     

人源性抗出血热单克隆抗体重链可变区基因克隆及其序列测定

单克隆抗体已广泛应用于医学生物学的各个领域。但目前使用的单克隆抗体多为鼠源性,在临床应用中常使患者产生抗异种蛋白的免疫反应。人源性单抗用于临床比鼠源性优越,但其制备尚有许多难题,其杂交瘤细胞不稳定、抗体产量低、多为IgM,难以达到临床的应用。我们前已报道了成功地获得能分泌人源性     

低容量负荷对创伤后ARDS肺功能的保护作用研究

目的：观察低容量负荷对创伤后急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺功能的保护作用。方法：165 例创伤后ARDS患者随机分为 液体控制组和对照组,用脉搏指示连续心输出量监测(PiCCO)指导液体控制,观察中心静脉压(CVP)、肺动脉楔压(PAWP)、氧合指 数(PaO2/FiO2)、肺泡- 肺动脉氧分压差,测定肺泡灌洗液中白细胞介素6(IL-6)水平、血清的肺泡表面活性蛋白D(SP-D)水平的变 化,检测呼吸机脱机时间,评估两组患者肺功能的恢复情况。结果：液体控制组血管外肺水肿指数(EVLWI)、CVP、PWAP、IL-6、 SP-D 以及肺泡-动脉氧分压差均较对照组明显下降(P<0.05),动脉血气氧分压、氧合指数较均对照组明显升高(P<0.05),机械通气 支持时间较对照组明显缩短(P<0.05)。结论：严格的液体控制可有效降低人体的容量负荷,有效促进创伤后ARDS 肺损伤和肺功 能的恢复,这可能与低容量负荷能够降低炎症反应、促进肺泡复张和改善氧合效率有关。     

双水平气道正压通气对88例重叠综合征患者的临床疗效

目的:探讨双水平气道正压通气(Bi PAP)治疗重叠综合征(OS)患者的临床疗效。方法:选取2012年7月-2014年2月本院收治的88例诊断为重叠综合征的患者,随机分成实验组与对照组,对照组43例,给予常规药物治疗;实验组45例,在常规药物治疗的基础上辅以双水平气道正压通气治疗,对两组治疗前后的监测结果进行比较分析。结果:治疗后,实验组患者在不同时间点上p H和Pa O2高于对照组,Pa CO2、呼吸暂停指数(AHI)、睡眠紊乱指数、最长呼吸暂停时间以及病死率和不良反应发生率均低于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:采用Bi PAP治疗OS患者,能够有效降低患者病死率、减少不良反应发生率,并改善患者呼吸情况,提高睡眠质量。     

表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定

以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆(rHuN4-F112)作为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的421~480nt(141~160aa)和598~639nt(200~213aa)两优势保护性抗原表位串联成的目的基因,通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508~532位缺失区域,经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36 h,将上清接种至MARC-145细胞中培养,并在MARC-145细胞中连续传代,拯救重组病毒。经RT-PCR扩增,MluⅠ酶切及测序验证,结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确,说明重组病毒拯救成功,且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代,将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep。rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析,该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL,且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532)相似,但明显高于rHuN4-F112病毒。     

雌孕激素对ALI大鼠α-ENaC、BNP、TNF-α表达的影响

目的:研究雌孕激素对ALI大鼠II型肺泡上皮细胞钠通道(epithelial Na+channel,ENaC)α亚基,血清脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响,探讨肺泡内液体清除的机制。方法:雌性未成年SD大鼠30只,随机分为3组:对照组(静脉注入生理盐水8 mL/kg)、ALI模型组(静脉注入油酸0.1 mL/kg)、雌孕激素联合组(在油酸注入前12 h、36 h皮下注射1∶1 000雌孕激素混合液0.1 mL)。建模后6 h处死大鼠,观察肺组织病理改变,测定肺湿重/干重比值、肺系数,肺组织匀浆中α-ENaC mRNA及蛋白的表达及血清BNP、TNF-α的表达。结果:与对照组比较,模型组出现明显肺水肿、出血及炎性细胞浸润,肺湿重/干重比值、肺系数及血清中BNP、TNF-α表达增加,而α-ENaC mRNA及蛋白明显降低(P<0.01);雌孕激素联合组与ALI模型组比较,肺水肿、出血及炎性细胞浸润要轻,肺湿重/干重比值、肺系数、BNP下降,α-ENaC mRNA及蛋白增加(P<0.05)。结论:雌孕激素联合治疗可上调α-ENaC mRNA及蛋白的表达,减少BNP表达,促进肺泡内液体的清除,为ALI/急性呼吸窘迫综合症(ARDS)的治疗和监控提供新的方法。     

胸部创伤并发急性呼吸窘迫综合征21例临床分析

目的:总结胸部创伤并发急性呼吸窘迫综合症(ARDS)患者的诊治经验.方法:回顾性研究2000年1月-2008年12月期间我院21例胸部创伤并发ARDS患者的临床资料.结果:本组21例患者均采取以呼吸机辅助通气为主的综合治疗措施,21例患者中治愈15例,死亡4例,2例放弃治疗.结论:严重的胸部创伤并发ARDS死亡率极高,早期诊断和及时正确地采用机械通气为主的综合治疗是成功救治胸部创伤并发ARDS患者的关键.     

噬菌体展示随机十肽库的构建及抗WSSV单链抗体A1的模拟抗原表位的淘选和鉴定

本实验以pCANTAB5E噬菌粒为载体,成功构建了较高容量的噬菌体展示随机十肽库,并将其应用于抗原模拟表位的淘选和鉴定。将一种特异识别对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)的单链抗体A1对十肽库和十五肽库分别进行淘选,结果得到一系列能与单链抗体A1特异性结合的阳性克隆。将这些阳性克隆所编码的多肽氨基酸序列与已知的单链抗体A1的抗原WSSV388片段氨基酸序列做比对,发现多数阳性多肽序列都与WSSV388片段序列的C端一处K????R??R?QS的氨基酸片段相似,由此推论单链抗体A1的模拟抗原表位可能是由该不连续氨基酸片段所构成的构象表位,而非线性表位。研究结果表明,噬菌体展示随机肽库技术是一种用于研究抗原表位结构的有效方法,有助于进一步探讨WSSV的结构蛋白的构象及功能,以及相应单链抗体与细胞受体相互作用的机理。     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-VP19以可溶性的形式得到表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测显示其分子量与预期的大小相符合。目的蛋白经Ni2 柱纯化并定量后分别直接注射鳌虾和包被饲料投喂鳌虾。实验结果表明注射Trx-VP19可以提高鳌虾个体抗WSSV感染力的作用。