通过优化表达元件及培养基组分提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量

【背景】碱性丝氨酸蛋白酶(Subtilisin)是一种具有广泛用途的工业酶制剂。【目的】旨在通过优化启动子、信号肽及培养基组分来提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量。【方法】以地衣芽胞杆菌BL10为出发菌株,构建了含有4种不同类型启动子(PbacA、P43、PaprE和PsrfA)及4种不同类型信号肽(SPVpr、SPSacB、SPSacC和SPAprE)的碱性丝氨酸蛋白酶表达菌株,并在获得高产菌株的基础上进行培养基优化。【结果】4种启动子的表达水平为PbacAPaprEP43PsrfA,4种信号肽的分泌效率为SPAprESPSacCSPSacBSPVpr。其中,菌株BL10/pPbacA-aprE产生最高的碱性丝氨酸蛋白酶酶活(275.21 U/mL),相比于出发菌株BL10/pHY-aprE (167.98 U/mL)提高了64%。随后,通过对发酵培养基成分进行优化并结合正交优化,获得了一种高产碱性丝氨酸蛋白酶的培养基(g/L):玉米淀粉40.0,豆粕50.0,(NH4)2SO4 4.0,K2HPO4 3.0,CaCO3 1.0。最后,碱性丝氨酸蛋白酶酶活提高到747.37 U/mL,是初始酶活的4.45倍。【结论】为工业化高产碱性丝氨酸蛋白酶提供了一种有效策略。     

无牛血清IgG细胞培养基（—GFCS培养基）的制备及其在杂交瘤细胞体外培养中的应用

为了制备不含牛血清IgG的细胞培养基（－GFCS培养基）,并研究其在杂交瘤细胞体外培养中的应用,采用蛋白G亲和层析的方法,将含有血清的细胞培养基中的牛血清IgG去除,以制备无IgG的培养基。使用该培养基体外培养杂交瘤细胞后,监测细胞生长和上清抗体浓度。对培养上清中的IgG类单克隆抗体可以采用蛋白G亲和层析进行纯化。与示去除牛血清IgG的培养基相比,－GFCS培养基培养的杂交瘤细胞的生长状况及上清抗体浓度均无明显变化;从－GFCS培养上清中成功纯化出不被血清IgG污染的IgG类单克隆抗体,本文结果表明,采用－GFCS培养基体外培养分泌IgG类单抗的杂交瘤细胞,可以简化上清抗体的纯化工艺。     

光照、湿度和培养基对苎麻疫霉卵孢子产生量的影响

采用3因素随机区组设计研究了光照、湿度和培养基对苎麻疫霉(hytophthoraboehmeriae)卵孢子产生量的影响。结果表明,各因子对卵孢子产生量的影响效应大小次序为培养基>光照>湿度,其中培养基和光照两因子影响均在0.01水平上显着。在供试的4种常用培养基上,卵孢子产生量的大小次序为：SLA培养基(SLA)>利马豆培养基(LBA)>V₆汁培养基(V₆A)>澄清的V₆汁培养基(V₆B).在设置的3种光照条件中,卵孢子产生量以连续黑暗处理最高,连续光照最低,光照与黑暗交替处理居中。3个试验因子间的所有互作对卵孢子产生量均有极显着的影响。在不同光照、湿度、培养基组合中,卵孢子产生量以低湿+连续黑暗+SLA组合最高,低湿+连续光照+V₆B组合最低。     

嗜盐菌H.Sp.XZ515中古紫质的光化学和质子泵特性

应用视黄醛蛋白在介质中有羟胺存在时由光照而引起的漂白反应,再一次确定了在嗜盐菌Ｈ．Ｓｐ．ＸＺ５１５中含有古紫质。利用不同ｐＨ时的差光谱确定了这种古紫质属于类ＢＲ蛋白。这种蛋白所具有的质子泵功能也如同ＢＲ一样是使质子自膜内侧转运至膜外侧。但质子在膜上转运的动力学过程与ＢＲ有区别。如果ＢＲ中质子在膜上转运过程通常是质子释放先于质子接收,则在ＸＺ５１５中是质子释放落后于质子接收。     

牙龈紫质单胞菌类胰蛋白酶及其致病机制研究动态

牙龈紫质单胞菌类胰蛋白酶及其致病机制研究动态华西医科大学口腔医学院成都６１００４１黄毅牙周病与产黑色素的革兰氏阴性杆菌尤其是牙龈紫质单胞菌（Ｐｏｒｐｈｏｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉ－ｖａｌｉｓ）有密切关系,文献报道该菌为进展性成人牙周炎的优势菌种［１,２...     

光质对水稻幼苗超弱发光和谷氨酰胺合成酶活性的影响

生长在不同光质下的水稻幼苗叶片的超弱发光（ＵＢＥ）随着其生长进程不断增强,光质对ＵＢＥ有显著影响,生长在白光下的水稻幼苗的ＵＢＥ明显高于生长在红光或蓝光下的水稻幼苗的ＵＢＥ,而红光和蓝光处理之间无显著差异．同时谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性变化也是白光处理的水稻幼苗ＧＳ活性明显高于红光和蓝光处理,而后两者之间也无显著差异．表明光质对水稻幼苗ＵＢＥ和ＧＳ活性的影响是相似的,可能与叶绿体的发育和光合作用有关．讨论了超弱发光的生物学应用前景．     

光质对水稻幼苗超弱发光和谷氨酸胺合成酶活性的影响

生长在不同光质下的水稻幼苗叶片的超弱发光随着其生长进程不断增强,光质对ＵＢＥ有显著影响,生长在白光下的水稻幼苗的ＵＢＥ明显高于生长在红光或蓝光下的水稻幼苗的ＵＢＥ,而红光和蓝光处理之间无显著差异。     

潜在性缺铁条件下大豆根系质外体铁库的积累与利用

用营养液培养方法研究了在不同供铁条件下,大豆根系质外体铁库的积累与活化利用。结果表明：1、供应难溶性Fe（OH）3,大豆根系质外体铁库呈现出积累与亏缺的节律性变化。与之相应出现根系还原力的降低与升高的节律性变化,但地上部总铁含量和新叶叶绿素含量均无变化。说明了根系质外体铁库的利用,维持了大豆正常生长需铁。2、对缺铁植株脉冲供铁后,大豆根系质外体铁库首先出现明显积累,随后一直处于下降状态,与此同时根系还原力表现出相应的变化,前期下降,后期有波动。地上部总铁含量与新叶叶绿素含量的变化与前两者密切联系,出现升高、降低不同趋势的变化。     

走马胎灰分对光的响应特征及其与生长指标的相关性

为探究光照强度和光质对走马胎(Ardisia giantifolia)灰分积累的影响，利用遮阳网和薄膜设定4个光照梯度(100%、60%、40%、20%全光照)和4种光质(绿、白、蓝、红)，分析了基径、株高以及生物量的响应特征，以及灰分与生长指标的关系。结果表明，走马胎灰分含量在绿光下随着光照强度的减弱而呈减少的趋势，在白光下随着光照强度的减弱呈现“低-高-低-高”的波动变化，在蓝光或红光下没有显著变化；在100%光照强度下，白光的灰分含量最低，与其余光照强度存在显著差异; 在60%、40%、20%光照强度下，光质对走马胎灰分含量的影响不显著。走马胎灰分含量与株高、基径和生物量间不存在明显的相关性；随着光照强度的减弱，走马胎的株高、基径以及生物量均呈现增加的趋势，且在白光下达到最大。因此，光照对走马胎灰分的积累和生长指标均有影响，种植走马胎时要选择适当遮荫强度或郁闭度较高的林型。     

光质和光周期对山白兰苗木生长、生理的影响

为筛选出山白兰(Michelia baillonii)苗木培育过程中适宜的光环境，该研究以一年生山白兰幼苗为试验材料，设置12、16 h·d^-1两个光周期，配合使用红蓝复合光(8R1B、6R1B)、红蓝紫绿复合光(8R1B1P1G、6R1B1P1G)4种光质和白光(W)对照，采用双因素随机区组试验设计和隶属函数法，探讨了山白兰苗木生长、光合色素、内源激素含量对不同光质和光周期处理的响应规律。结果表明：(1)光质、光周期及其交互作用对山白兰苗高增长量、叶面积、叶绿素a、玉米素(ZR)、脱落酸(ABA)的含量、内源激素比值[IAA/ABA、(IAA+GA₃+ZR)/ABA]等均有显著影响(P<0.05)。(2)16 h·d^-1光周期有利于苗高增长量、叶面积、苗木质量指数、生物量、叶绿素a、生长素(IAA)、ZR的含量、内源激素比值的提高。(3)当光周期为16 h·d^-1时，8R1B处理下的苗高增长量、叶面积和苗木质量指数均最大，分别为21.84 cm、158.39 cm²和2...