坛紫菜中别藻蓝蛋白的纯化及洗脱组分光谱研究

以福建省平潭县坛紫菜(Porphyra haitanensis)为材料,采用硫酸铵分级分离和柱层析法纯化别藻蓝蛋白(APC),并对纯化的条件进行了详细的探讨。研究结果表明:采用30%~35%饱和硫酸铵沉淀、Tris-HC l(pH=8.0)作为洗脱缓冲液、DEAE-Sephadex-A-50作为层析介质,所获得的APC的纯度和回收率分别为3.50和70.2%;SDS-PAGE表明APC有α和β两个亚基,分子量分别为18.9 kD和17.7 kD。因此该方法对于从坛紫菜中快速纯化APC是适合的。采用光谱分析研究柱洗脱组分,结果表明:坛紫菜中含有分子结构为(αβ)6γ的“双峰型”R-PE,含有结构为(αβ)3的R-PC,含有结构为(αβ)3的APC-Ⅱ。     

两种藻胆蛋白对人喉癌Hep-2细胞的光动力杀伤效果

从条斑紫菜中提取高纯度R-藻红蛋白(R-PE)和R-藻蓝蛋白(c-pc),采用MTT法测定主要研究了不同浓度(10、25、50和100μg/ml)R-PE和C-PC分别介导的光动力效应对人喉癌Hep-2细胞的生存率的影响.实验结果显示,两种藻胆蛋白的光动力作用对Hep-2细胞具有杀伤作用.在浓度为100μg/ml,照射剂量为5OJ/cm2的条件下,藻蓝蛋白对应的细胞存活率为64%.藻红蛋白对应的仅为57%;单用碘钨灯处理,Hep-2细胞的存活率达到86.9%;而单独使用这两种藻胆蛋白处理Hep-2细胞,培养24h后,低浓度藻胆蛋白(10、25μg/ml)对细胞的抑制效果不明显,高浓度对细胞生长具有一定的抑制效果,抑制率为68%.实验证明条斑紫菜R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白具有可开发人喉癌治疗光敏剂应用前景.     

用紫菜培育和观察草履虫

用市售的紫菜加水 (自然水、自来水均可 )浸泡于容器中 ,10℃以上时把容器放在阳台上 ,或放在恒温箱内 ,控制在 2 0℃以内 ,或放在装有 6 0 W灯泡的泡沫箱内 ,既见光 ,又保温。浸泡后的第 2天 ,低倍镜下镜检紫菜表层浸泡液 ,无任何运动的动物存在。 5 d后 ,镜检紫菜表层浸泡液 ,发现有较多小米粒大小的微小个体在做螺旋式运动或平动 ,7d后 ,低倍镜下检查表层浸泡液 ,有大量形如芝麻粒大小的个体在快速螺旋式运动 ,10 d后(15℃左右 ) ,低倍镜下检查 ,可发现大量形如倒转草鞋状 (又象白瓜形状 )的个体 ,约为 0 .0 1～0 .0 2 cm长 ,后部宽处约…     

紫菜的细胞遗传学研究现状及展望

综述了紫菜属的染色体数目,形态,DNA含量和减数分裂发生的状况等细胞遗传学研究的概况。70多种紫菜已有54种做了染色体计数,紫菜属染色体的一个显著特征是染色体小。种内染色体数目不同,尚属计数误差。并对紫菜的单性生殖和减数分裂提出了可能解决的途径。     

条斑紫菜R-藻红蛋白提纯工艺研究

对条斑紫菜叶状体R-藻红蛋白提纯方法进行了研究和分析。首先分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法等单一及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,结果表明溶胀 组织捣碎法效果最佳。其次用25%～60%饱和度范围内的硫酸铵沉淀法粗提藻红蛋白,发现25%～45%硫酸铵分步沉淀法效果最好,再经结晶法盐析纯度(D565nm/D280nm)达到2.088。盐析液用SephadexG-25层析柱脱盐,再经羟基磷灰石(HA)柱层析,纯度可达到4.98。R-藻红蛋白的最大吸收峰在565nm,其室温荧光发射峰为578nm。SDS-PAGE结果显示,R-藻红蛋白可分为α、β两个亚基,Mr分别为17.0×103和19.0×103。     

利用脱落酸和冷适应提高坛紫菜丝状体种质的冻存效率

为验证脱落酸(ABA)和冷适应能否提高紫菜丝状体种质的冷冻保存效率,研究以坛紫菜(Pyropia haitanensis)自由丝状体为材料,在20℃,光强40μmol·photons/(m2·s),在光周期12L﹕12D条件下以ABA(100μmol/L)处理48h或4℃暗培养6d,随后进行–80℃冷冻保存实验.通过连...     

坛紫菜和条斑紫菜的原生质体电融合

用日本岛津公司生产的电融合装置(SSH－2),进行了坛紫菜和条斑紫菜的原生质体融合试验。探讨了不同的电刺激条件、融合缓冲液种类以及蛋白酶的前处理与细胞融台的关系。其结果是,高频电压30一35V,印加时间25—30s;脉冲电压300—350V,印加时间60μs,及添加3m mol／L Ca²⁺、Mg²⁺的融合缓冲液可使融台率达到21—31％。蛋白酶的前处理对细胞融合有明显的效果。融合细胞培养7天后产生细胞壁,4l天长成多细胞团。     

紫菜色素突变体研究进展

色素变异是紫菜常见的突变性状。发生色素突变的紫菜可以为其遗传育种提供优秀的种质资源,并为其生理及基因功能研究提供理想的实验材料。结合色素突变体在育种工作和遗传基础研究等领域逐步显示出的广阔应用前景,本文重点论述了紫菜色素突变体的诱变、遗传特征、突变分子机制及应用等方面的研究进展。     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。     

紫菜多糖提取的研究

研究了热水浸提法提取紫菜多糖的最佳提取工艺,同时,对粗多糖进一步分离,并测定红外光谱图。实验表明：用热水浸提法提取的多糖产率在0．87％-2．55％之间,且多糖浸提液毫无凝固性。当料液比为1：30（g／mL）,温度为95℃,pH值为7,浸提时间为1．5h时提取的效果最好,得率可达2．546％。从紫菜粗多糖中可分离出两种多糖PP1和PP2,其中PP2的红外光谱图与标准琼脂糖样品相类似,而PP1的红外光谱图与PP2存在着较大的差异。