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《中国生物工程杂志》2017,(11):109-115
目的:亮氨酸拉链转录因子1(LZTFL1)是一种与纤毛信号转导相关的蛋白质,关于其如何在信号转导中发挥作用以及作用机制目前尚不清楚。莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少,尚未有相应的检测抗体,因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。方法:采用RT-PCR技术从C.reinhardtii CC125中提取总RNA,扩增981bp的目的基因Lztfl1,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,成功构建p ET-28a(+)-Lztfl1重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1∶512 000,经Western blot对C.reinhardtii CC125检测具有较高特异性。结果:首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体,为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号转导中的相互作用奠定了基础。 相似文献
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激素印迹是单细胞动物和多细胞动物的一种生理现象,也是选择参与信号识别过程分子的工具。激素印迹后,受体记忆将遗传给子孙后代,因此其对进化的作用可能是很大的。同时,激素印迹还有利于物种的维持。另外,激素印迹过程还是具有终身效应的临时开放系统的一部分。没有印迹,就没有完全的受体成熟,而不成熟的受体是不能和适量的激素结合的。在围 期诸如治疗药物和环境污染剂等人工合成的物质分子易致错误或病理印迹。许多研究表明错误印迹对生物体具有重要的影响。当然,单细胞动物的激素印迹过程与多细胞动物并不完全一样。 相似文献
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目的 构建符合广东省医疗卫生现状和特点的医师多点执业实施基本框架。方法 采用Delphi法对备选指标进行3轮专家咨询。结果 预调查和2轮咨询专家积极性系数分别为100%、96.67%、100%;专家的权威系数为0.70;正式两轮咨询一级指标权重权重比例接近,P<0.005 ;正式两轮咨询专家一致性系数分别为0.161、0.191。结合专家对指标评价总分的排序和各指标重要性、可操作性变异系数,最终筛选25个指标。结论 从公立医院的角度,构建了一个较为科学、合理的医师多点执业实施框架。 相似文献
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Xiaomin Tang Weidong Bao Wenli Zhang Zhukuan Cheng 《植物学报(英文版)》2007,49(6):953-960
To develop reliable techniques for chromosome identification is critical for cytogenetic research, especially for genomes with a large number and smaller-sized chromosomes. An efficient approach using bacterial artificial chromosome (BAC) clones as molecular cytological markers has been developed for many organisms. Herein, we present a set of chromosomal arm-specific molecular cytological markers derived from the gene-enriched regions of the sequenced rice genome. All these markers are able to generate very strong signals on the pachytene chromosomes of Oryza sativa L. (AA genome) when used as fluorescence in situ hybridization (FISH) probes. We further probed those markers to the pachytene chromosomes of O. punctata (BB genome) and O. officinalis (CC genome) and also got very strong signals on the relevant pachytene chromosomes. The signal position of each marker on the related chromosomes from the three different rice genomes was pretty much stable, which enabled us to identify different chromosomes among various rice genomes. We also constructed the karyotype for both O. punctata and O. officinalis with the BB and CC genomes, respectively, by analysis of 10 pachytene cells anchored by these chromosomal arm-specific markers. 相似文献
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大豆异黄酮代谢途径在大肠杆菌中的构建及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
自然界异黄酮合成途径主要存在于豆科植物中。以微生物为宿主研究异黄酮代谢,则需要将整个相关代谢途径的多酶体系组装到工程菌种,从而进行表达及代谢研究,这就需要用到多基因的转化和共表达技术。综合应用了多基因单载体和多基因多载体方法,将大豆异黄酮代谢途径中的五个关键酶基因导入到大肠杆菌中,对异黄酮代谢途径在大肠杆菌中的构建和表达进行了研究和探索,获得了含有五个外源基因的重组大肠杆菌;重组菌经IPTG诱导,以L-酪氨酸为底物进行发酵,发酵产物经过HPLC测定,结果表明和空白对照相比有新的代谢产物生成,初步断定为异黄酮类化合物。 相似文献
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Angioarrestin是一种具有潜在应用价值的肿瘤血管形成抑制因子.利用DNA重组法构建了angioarrestin C端 hFD cDNA 和麦芽糖结合蛋白(MBP)重组原核表达质粒 pMAL-C2-hFD.将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经0.3 mmol/LIPTG 在37℃条件下诱导表达4h,SDS-PAGE 检测,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的20%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有MBP标签.取表达上清纯化、透析、浓缩并冻干,以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.此多抗可以与pET 22b(+)表达系统获得的 hFD重组蛋白发生良好的抗原抗体反应,ELISA检测多抗效价达1∶10240.实验证明:通过基因重组可获得angioarrestin C端hFD在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.以此为抗原制备的抗angioarrestin多克隆抗体为深入研究angioarrestin提供了材料. 相似文献
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