温度对黄颡鱼仔鱼摄食强度及饥饿耐受力的影响

对不同温度下黄颡鱼仔鱼的摄食强度及抵达不可逆点(PNR)时间的变化进行初步研究。结果表明,黄颡鱼仔鱼的摄食强度随温度升高而增大;仔鱼抵达PNR的时间随温度升高而缩短,在24～28℃下,仔鱼的PNR点出现在出膜后的7～8d。实验结果显示,28℃是比较适宜黄颡鱼仔鱼生长的水温。     

低强度瞬态电磁脉冲引发细胞电穿孔的实验初探

采用宽频带横电磁传输室,通过实验观察到低强度瞬态电磁脉冲作用下产生的细胞电穿孔现象,并提出了初步分析及其应用前景。     

增强型绿色荧光蛋白基因电穿孔转染骨髓间充质干细胞的研究

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养方法,探讨电穿孔法介导外源基因转染骨髓间充质干细胞的可行性及转染效率.方法 Ficoll-PaqueTMPlus淋巴细胞分离液分离大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)并进行原代培养和传代扩增,免疫组化的方法对其初步鉴定.用荧光显微镜、细胞计数法和流式细胞仪分析转染效率.结果电穿孔法可较高效转染rMSCs,转染率为(32.8%±3)%.该条件下电转染后的MSCs其生长曲线与转染前的细胞比较无明显变化.结论优化条件的电穿孔法具有较高的介导外源基因表达于rMSCs的效率,且对rMSCs的生物学行为没有明显影响.     

构建噬菌体展示抗体库过程中电穿孔法的条件优化

目的：确定稳定且高效的电转化实验方案以达到构建高库容噬菌体展示抗体库的目的。方法：探索电压、脉冲时间、噬菌粒DNA质量与浓度、TG1大肠杆菌的生长周期、重悬洗涤缓冲液及培养基优化等方面对TG1大肠杆菌电转化效率的影响。结果：当电转杯电极间距为2mm时,设定电转仪参数为3kV、25μF、5ms、200Ω;外源DNA经纯化后加入感受态菌液中使终浓度为1ng/μl;培养基中加入20mmol/L的MgCl₂,并将TG1的生长阶段调控在OD₆₀₀=0.8,用无菌超纯水重悬及洗涤细胞,将感受态细胞浓度调整为4×10¹⁰个/ml。在上述条件下,电转化效率可达到4.9×10⁹CFU/μg DNA。结论：通过多种条件优化,提高了电转化效率,为构建高库容噬菌体展示抗体库建立了基础。     

外源EGFP基因在肿瘤细胞中的稳定表达

通过将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因转染到人肺腺癌细胞（A549）内,建立以EGFP为探针的体外抗癌药物细胞株。使用电穿孔法导入EGFP基因到A549细胞;然后用G418筛选以及梯度稀释法筛选出EGFP高度表达的细胞株。初步建立稳定表达绿色荧光蛋白的人肺癌细胞株。     

季节性和大流行性H1N1流感血凝素DNA疫苗电穿孔免疫小鼠及攻毒保护实验

在流感病毒疫苗中,DNA疫苗有望成为常规疫苗的替代品.研究构建了两个分别编码A/New Caledonia/20/99（H1N1）和A/California/04/2009（H1N1）流感病毒株血凝素抗原的DNA疫苗pV1A5和pVEH1,目的抗原经验证能够正确表达后,利用小鼠模型通过电穿孔方法肌肉注射免疫进行疫苗免疫效力评价.采用血凝抑制实验和酶联免疫吸附实验对免疫小鼠的血清进行血凝素特异性抗体检测,对血凝素特异性的T淋巴细胞经IFN-γ酶联免疫斑点实验进行检测.然后选择小鼠适应株A/NewCaledonia/20/99（H1N1）100个半数致死剂量对候选疫苗免疫的小鼠攻毒并监测生存率和体重变化率,以此评价疫苗保护效力.两疫苗组免疫小鼠T淋巴细胞和体液免疫水平显著高于pVAX1空载体对照组（P〈0.05）.此外,pV1A5组能够100%保护免疫小鼠抵抗100致死剂量同源病毒小鼠适应株的攻毒,而同种病毒下pVEH1组只有40%的保护率.结果表明,本实验构建的季节性流感DNA疫苗能够对同源病毒攻毒提供完全保护,而大流行流感株DNA疫苗只能部分抵抗季节性流感病毒.     

饥饿胁迫对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)仔蟹的影响

在26.2 ～28.4℃水温条件下,研究了饥饿对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)仔蟹的形态、行为、存活及体重损失的影响,同时确定了仔Ⅱ的营养饱和储存点(PRS)和不可恢复点(PNR).结果表明:饥饿胁迫下中华绒螯蟹仔Ⅰ、仔Ⅱ、仔Ⅲ的初次死亡时间(T1)分别为8.0、14.0和20.3 d,50％死亡时间(Ts0)分别为11.4、16.0和25.5 d,100％死亡时间(T100)分别为15.0、22.0和32.3 d,耐饥饿能力为仔Ⅲ＞仔Ⅱ＞仔Ⅰ;饥饿期间中华绒螯蟹体内水分含量持续升高,干重量降低显著,干重损失速率也随时间延长逐渐减小;先饱食后饥饿的给饵模式中仔Ⅱ蜕皮率随初始饱食时间延长而升高,50％个体完成蜕皮所需饱食时间(PRS50)为2.10d,各处理组仔Ⅱ的蜕皮周期与持续饱食组均无显著差异(P＞0.05),但只有饱食3d以上才能达到持续饱食饲养蟹的增重率;先饥饿后饱食的给饵模式中,仔Ⅱ的蜕皮率随着初始饥饿时间的延长而下降,其中仔Ⅱ50％不能蜕皮的初始饥饿时间(PNR50)和100％不能蜕皮的初始饥饿时间(PNR100)分别为10 d和14 d,并且蜕皮周期相对延长,延长时间约等于初始饥饿时间,不存在额外的摄食时间来弥补饥饿期间损失的能量,各处理组蜕皮后仔蟹与对照组体重无显著差异(P＞0.05).     

红细胞生成素cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

将(?)红细胞生成素(EPO)cDNA构建的重组表达质粒用电穿孔法引入COS-7细胞,ELISA和红系集落测活结果表明,该重组质粒在哺乳动物细胞中能够表达有生物活性的红细胞生成素。进一步将其转染CHO-dhfr~-细胞,经氨甲喋呤(MTX)加压扩增,混合细胞中各克隆表达水平比较一致,细胞的平均表达水平为2-3μg/10~6 Cells/24hr。细胞冻存后复苏其表达水平与冻存前一致,表明外源基因整合稳定。     

不同场强下IRE的肿瘤消融作用及对抗肿瘤免疫的影响

目的:探讨不同电场强度的不可逆电穿孔(IRE)对于肿瘤的消融效果以及其所引起的肿瘤免疫反应。方法:将B16黑色素瘤细胞接种于C57小鼠,制作黑色素瘤小鼠模型,应用不可逆电穿孔仪对肿瘤进行消融,通过测量肿瘤生长大小研究不同场强下的消融效果。通过CD4、CD8a免疫组化染色初步了解不同场强激发的免疫反应的强弱,从而选择最佳消融参数。结果:随着电场强度增加,肿瘤消融效果逐渐趋于理想,然而平板电极夹之间过高电场引发的热效应则不利于后续抗肿瘤免疫反应的激活。选择合适的电场,通过增加电击组数可以达到良好的治疗效果。结论:IRE对肿瘤的消融优势在于它能够很好的激活机体的抗肿瘤免疫反应,因此,选择合适的电场增加电击组数可以起到很好的抗肿瘤作用,具有很好的应用前景。     

From Decision to Commitment： The Molecular Memory of Flowering

During the floral transition the shoot apical meristem changes its identity from a vegetative to an inflorescence state. This change in identity can be promoted by external signals, such as inductive photoperiod conditions or vernalization, and is accompanied by changes in expression of key developmental genes. The change in meristem identity is usually not reversible, even if the inductive signal occurs only transiently. This implies that at least some of the key genes must possess an intrinsic memory of the newly acquired expression state that ensures irreversibility of the process. In this review, we discuss different molecular scenarios that may underlie a molecular memory of gene expression.