mir-26a对子宫肌瘤细胞周期和增殖的影响

目的:近年来许多报道表明,miRNA与一些肿瘤的发病息息相关,其其表达失调直接或间接的影响肿瘤的进展。检测mir-26a在子宫肌瘤组织和肌层组织中的表达,并进一步探究其对子宫肌瘤细胞周期和增殖的影响。方法:收集第二军医大学长海医院妇产科2009年12月至2011年10月手术治疗并经病理检查确诊为子宫肌瘤的患者肌瘤组织和成对肌层组织标本13例,Realtime PCR检测这13例成对组织中mir-26a的表达情况。建立可稳定传代的子宫肌瘤平滑肌细胞系后,将mir-26a转入肌瘤细胞中使其高表达,流式细胞仪检测高表达mir-26a后子宫肌瘤细胞周期的变化,同时用cck-8方法验证细胞增殖活性。结果:Realtime PCR结果显示,与相应肌层组织相比,肌瘤组织mir-26a的表达均显著降低(P0.05)。流式检测结果显示,24 h时,与对照组相比,mir-26a高表达的肌瘤细胞G1期比例增高。增殖实验显示种植细胞第二天开始,mir-26a高表达的子宫肌瘤细胞增殖速度显著降低。结论:与正常子宫肌层组织相比,mir-26a在子宫肌瘤组织中表达下调,这种表达失调直接影响肌瘤细胞的增殖速度和周期比例,提示mir-26a在子宫肌瘤的发生发展过程中发挥了重要的调控作用。     

自噬对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究自噬对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的影响。方法:将人冠状动脉内皮细胞,分别用常规培养基(正常对照组)、含30 mmol/L D-葡萄糖的高糖培养基(高糖组)、高糖培养基合并雷帕霉素(Rapamycin,RAPA;100 nmol/L)干预(RAPA组)和高糖培养基合并3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA,5 mmol/L)干预(3-MA组)培养。利用CCK-8法检测细胞生长活力,使用流式细胞术检测细胞凋亡水平,western blot检测细胞自噬标记蛋白(Beclin1)的表达水平。结果:(1)高糖溶液刺激内皮细胞24 h后,细胞生长活力为正常组的55.0%(P0.01),自噬标记蛋白Beclin1的表达水平明显增加,凋亡水平为正常组的2.0倍;(2)与高糖组相比,RAPA组细胞生长活力明显增加,Beclin1的表达明显升高(P0.01),凋亡水平为高糖组的70.1%;(3)与高糖组相比,3-MA组细胞生长活力明显减少,Beclin1的表达明显降低(P0.01),凋亡水平为高糖组的1.42倍。结论:细胞自噬可能对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞具有凋亡保护作用。     

微RNA在炎症致癌化中的作用

炎症与肿瘤关系密切,约25%的肿瘤是直接由慢性感染与炎症导致。随着研究的深入,两者在分子水平的联系不断被阐明。微RNA(microRNA,miRNA)作为一类新发现的调节因子在一系列促肿瘤及抗肿瘤的炎症反应通路中起到至关重要的调控作用,对其加深了解将有助于探索出肿瘤预防、诊断、治疗的新思路。本文将就miRNA在炎症及肿瘤间的调控作用予以综述,为炎症相关性肿瘤的早期诊断、预防和治疗提供分子靶标。     

Mir-26a 调控子宫肌瘤中孕激素受体a（PRa）、雌激素受体α（ER-alpha） 的表达

目的：雌激素和孕激素在子宫肌瘤发病中起重要作用。但miRNA 在子宫肌瘤发病中的作用还知之甚少,我们前期已证实 mir-26a 在子宫肌瘤中低表达,本实验进一步探讨mir-26a 在体外对子宫肌瘤中孕激素受体a（PRa）、雌激素受体琢（ER琢）表达 的调控。方法：利用TargetScan 软件预测mir-26a 的潜在靶基因,找出靶基因3''UTR 区片段,插入PmirGLO 绿色荧光蛋白编码 区下游,构建报告基因载体,同时原代培养子宫肌瘤平滑肌细胞。将报告基因载体与mir-26a 共转染入原代培养的子宫肌瘤平 滑肌细胞,引入双荧光素酶报告基因系统对mir-26a 的靶基因进行验证。转染mir-26a mimics 于子宫肌瘤平滑肌细胞,western blotting检测子宫肌瘤平滑肌细胞中mir-26a 靶蛋白表达水平。结果：用TargetScan 软件和双荧光素酶报告基因系统证实ER琢、 PRa 为mir-26a 的靶基因。蛋白水平进一步验证,mir-26a mimics 的转染量不同,ER琢、PRa 的蛋白表达水平下调不同。结论： Mir-26a 通过结合靶基因的3''-UTR 区调控靶基因的mRNA水平。Mir-26a 抑制雌激素受体琢（ER琢）、孕激素受体a（PRa）在子宫 肌瘤中的表达。Mir-26a 可能通过调控雌激素受体琢（ER琢）、孕激素受体a（PRa）影响子宫肌瘤的发展。本实验通过确定mir-26a 对子宫肌瘤的作用机制,有望进一步提高子宫肌瘤的治疗技术,减少手术治疗的创伤。     

高糖诱导内皮细胞损伤microRNA表达紊乱的体外研究

目的:研究高糖诱导的内皮细胞损伤微小RNA(microRNA,miRNA)的表达变化。方法:常规培养的人冠状动脉内皮细胞,利用不同浓度D-葡萄糖溶液(0 mmol/L、5 mmol/L、15 mmol/L和25 mmol/L),诱导刺激24 h后分别用CCK-8法和流式细胞术检测其生长活力和凋亡水平。收集细胞总RNA,利用实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测miRNA的表达变化,同时利用TargetScan、PicTar等生物信息学预测软件预测可能的靶基因。结果:高糖溶液(25 mmol/L)刺激内皮细胞后,细胞生长活力明显降低,为对照组的67.5%(P0.01),凋亡水平为对照组的4.5倍(P0.01)。QRT-PCR结果显示miRNA的表达出现了明显的紊乱,其中miR-451、miR-504、miR-302d、miR-18b*、miR-198、miR-328和miR-517c明显下调,miR-29c、miR-100*、miR-137、miR-660和miR-217明显上调(P0.05)。靶基因预测发现miR-217和miR-451可能调控内皮细胞功能相关的多个基因的表达。结论:在高糖诱导的内皮细胞损伤中,miRNA表达紊乱提示其可能参与内皮细胞功能。